MỞ ĐẦU Thực phẩm luôn là một phần thiết yếu của cuộc sống. Vì thế vấn đề an toàn vệ sinh thực phẩm luôn là mối quan tâm hàng đầu của người tiêu dùng, các doanh nghiệp sản xuất thực phẩm và các nhà chức trách xã hội. Một số chất có thể gây độc cho cơ thể được cho vào thực phẩm nhằm mục đích bảo quản, tạo màu mùi thu hút, cũng có những chất khác được sinh ra ngay trong quá trình sản xuất. Việc làm rõ mức độ gây độc và kiểm soát những chất mới sinh này luôn là vấn đề nan giải. Năm 1999, lần đầu tiên ở Anh, nước tương nhập khẩu từ Trung Quốc được phát hiện có 3-MCPD với hàm lượng dao động từ 6 - 124mg/Kg [100]. Tuy nhiên, đây không phải là thời điểm đầu tiên 3-MCPD được biết đến mà ngay từ những năm đầu thập kỷ 80 của thế kỷ 20, các nhà khoa học đã biết rằng, những thực phẩm nào được chế biến bằng phương pháp thủy phân chất đạm thực vật bằng HCl đậm đặc đều có chứa 3–MCPD [99]. Năm 1991, sự có mặt của chất này trong thực phẩm đã bắt đầu được mô tả. Tuy nhiên, vào thời điểm đó, người ta ít để ý đến cho dù hàm lượng 3– MCPD được tìm thấy trong thực phẩm là rất cao, phổ biến ở mức 100mg/kg [100]. 3-MCPD là chữ viết tắt của một chất có danh pháp hóa học là 3-monocloropropan- 1,2-diol, một hóa chất thuộc nhóm cloropropanol. Trong quá trình chế biến nhiều loại thực phẩm (như nước tương, dầu hào, các sản phẩm quay rán, nướng, bánh mì, bánh bích quy …) luôn luôn tồn tại một dư lượng 3-MCPD trong sản phẩm cuối cùng. Ngay cả những thức ăn được chế biến trong gia đình cũng tìm thấy có chứa 3-MCPD nhất là những món thịt được ướp muối và chiên, nướng …[100] Trước đây, nước tương hoặc sản phẩm nước chấm từ đậu nành được chế biến bằng phương pháp lên men truyền thống. Khi công nghệ phát triển, người ta thấy rằng nước tương hoặc sản phẩm đậu tương được sản xuất bằng phương pháp thủy phân bằng acid HCl đem lại hiệu năng rất cao về mặt chất lượng và hiệu suất thành phẩm. Vì thế, phương pháp này ngày càng được ứng dụng nhiều trong công nghệ chế biến nước tương, dầu hào và các sản phẩm từ đậu tương có thông qua quá trình thủy phân. Tuy nhiên, quy trình này lại sinh ra hợp chất 3-MCPD với nồng độ quá mức và được cho là có hại cho sức khỏe [105]. Ở Việt Nam, tháng 11/2001, lần đầu tiên các kiểm nghiệm về chất 3-MCPD được tiến hành và cũng xác minh là nồng độ 3-MCPD có mặt trong một số sản phẩm nước tương bán ở thị trường Việt Nam là cao quá ngưỡng cho phép so với tiêu chuẩn châu Âu. Cho dù đã được nhà nước kiểm soát chặt chẽ hơn, thì cho đến nay cũng đã xảy ra vài vụ nước tương có chứa hàm lượng 3-MCPD bị phát hiện trên thị trường. Điều này cho thấy, 3-MCPD vẫn luôn là mối quan tâm của xã hội, người tiêu dùng vẫn còn tâm lý hoang mang, e ngại còn cơ quan quản lý và các doanh nghiệp thì vẫn băn khoăn chưa tìm ra lời giải cho vấn đề 3-MCPD. Từ 2002, nhiều quốc gia trên thế giới đã tiến hành nghiên cứu, khảo sát và thiết lập ngưỡng tiếp xúc được cho là tương đối an toàn đối với hoá chất này, đặc biệt ở những sản phẩm nước tương hay các thực phẩm được chế biến bằng sự thủy phân đạm thực vật trong môi trường HCl [97]. Cho đến nay, đã có nhiều nghiên cứu xác định độc tính của 3-MCPD được thực hiện, ví dụ như các nghiên cứu đánh giá độc tính trên thận, hệ sinh dục, thần kinh, và khả năng gây ung thư,…Các nghiên cứu cho thấy rằng 3-MCPD gây thương tổn hệ sinh sản của chuột cống đực, thương tổn dạng tăng sinh và tạo khối u ở thận trên mô hình thực nghiệm động vật, đồng thời có sự gia tăng thương tổn khi liều lượng tiếp xúc gia tăng [97]. Một số nghiên cứu độc tính trên thần kinh trung ương cho thấy 3-MCPD gây nhiều tổn thương trên chất xám, trải dài từ vỏ não cho đến cột sống, làm tăng thể tích nước trong bào tương, gây phù các tế bào hình sao [17], [18], [20]. Dựa trên một số kết quả nghiên cứu được về độc tính của 3-MCPD, giới khoa học phải chấp nhận suy luận ngoại suy là 3-MCPD vẫn có thể có nguy cơ gây hại cho con người. Tuy nhiên để có cái nhìn toàn diện hơn về độc tính của chất này, ngoài các độc tính đã biết của 3-MCPD trên thận và cơ quan sinh dục với nhiều bằng chứng thuyết phục, thì các nghiên cứu về độc tính trên những cơ quan mục tiêu khác như máu, gan, não cũng cần được nghiên cứu nhiều hơn và tìm hiểu sâu hơn. Vì vậy trong luận án này, chúng tôi đặt trọng tâm nghiên cứu đánh giá độc tính của 3-MCPD trên các cơ quan này nhằm cung cấp thêm các dữ liệu khoa học có ý nghĩa cho lĩnh vực an toàn thực phẩm. Đồng thời qua luận án này, chúng tôi cũng mong muốn đề xuất một số phương pháp nhằm có thể ứng dụng cho việc đánh giá độc tính của những hóa chất hay thuốc có nghi ngờ có thể gây ra độc tính trên các cơ quan đích. Cụ thể, mục tiêu của chúng tôi như sau: 1. Đánh giá độc tính của 3-MCPD trên huyết học sau khi gây phơi nhiễm mạn tính trong 6 tháng và 12 tháng. 2. Đánh giá độc tính của 3-MCPD trên nhiễm sắc thể ở các pha cấp tính, bán cấp tính và mạn tính bằng phương pháp vi nhân trên hồng cầu. 3. Đánh giá độc tính của 3-MCPD trên gan thông qua các enzym chức năng gan và khảo sát mô học tế bào gan. 4. Đánh giá độc tính của 3-MCPD trên não chuột nhắt qua sự biểu hiện c-fos và thoái hóa tế bào thần kinh.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGƠ KIẾN ĐỨC ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA 3-MONOCLORO PROPAN-1,2-DIOL (3-MCPD) TRÊN GAN, MÁU VÀ THẦN KINH CỦA CHUỘT NHẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP Hồ Chí Minh, Năm 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGƠ KIẾN ĐỨC ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA 3-MONOCLORO PROPAN-1,2-DIOL (3-MCPD) TRÊN GAN, MÁU VÀ THẦN KINH CỦA CHUỘT NHẮT Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc Độc chất Mã số: 62720410 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Mạnh Hùng GS.TS Nguyễn Văn Thanh TP Hồ Chí Minh, Năm 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Ngô Kiến Đức i MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình Danh mục biểu đồ Danh mục sơ đồ Trang MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đại cương 3-Monocloropropan-1,2-diol (3-MCPD) 1.2 Các nghiên cứu đánh giá độc tính 3-MCPD giới 1.3 Xét nghiệm huyết học 19 1.4 Thử nghiệm vi nhân (micronucleus) 24 1.5 Giải phẫu mô học – Dị sản tế bào gan 28 1.6 Gen tiền ung thư c-fos (proto-oncogen) 31 1.7 Phương pháp hóa mơ miễn dịch 31 1.8 Thối hóa tế bào thần kinh 35 1.9 Phương pháp nhuộm màu cresyl violet 36 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Đối tượng nghiên cứu 38 2.2 Thuốc thử – Trang thiết bị – Nơi thực 38 2.3 Phương pháp nghiên cứu .40 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 54 3.1 Đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học .54 3.2 Đánh giá độc tính 3-MCPD nhiễm sắc thể 78 3.3 Đánh giá độc tính mạn tính 3-MCPD gan 89 3.4 Đánh giá độc tính 3-MCPD não chuột nhắt .94 ii Trang Chương 4: BÀN LUẬN 106 KẾT LUẬN 123 KIẾN NGHỊ .125 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt 1,3-DCP 1,3-Dicloropropan-2-ol 2,3-DCP 2,3-Dicloropropan-1-ol 2-MCPD 2-Monocloropropan-1,3-diol 3-MCPD 3-Monocloropropan-1,2-diol ALT Alanin aminotransferase AST Aspartat aminotransferase EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Hb Hemoglobin HCT Hematocrit Thể tích khối hồng cầu LD50 Lethal Dose 50% Liều gây chết 50% LYM Lymphocytes Bạch cầu lympho MCV Mean Corpuscular Volume Thể tích trung bình hồng cầu MCH Mean Corpuscular Hemoglobin Huyết sắc tố trung bình hồng cầu MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Nồng độ huyết sắc tố trung Concentration bình hồng cầu MN Micronucleus Vi nhân MPV Mean Platete Volume Thể tích trung bình tiểu cầu NEU Neutrophils Bạch cầu trung tính MONO Monocytes Bạch cầu đơn nhân PLT Platelets Tiểu cầu RBC Red blood cells Hồng cầu WBC White blood cells Bạch cầu M Mean Giá trị trung bình SD Standard deviation Độ lệch chuẩn TDI Tolerable daily intake Mức thu nạp cho phép hàng ngày PMTDI Provisional maximum tolerable Định mức tạm thời cho phép thể daily intake thu nạp ngày iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Khảo sát hàm lượng 3-MCPD số thực phẩm nước Anh Bảng 1.2 Nồng độ tối đa 3-MCPD nước tương cho phép số quốc gia Bảng 1.3 Mức tiêu thụ 3-MCPD ngày người dân số quốc gia Bảng 1.4 Một số kết tổn thương bệnh học, tăng sản ung thư sau năm nghiên cứu độc tính 3-MCPD chuột cống 14 Bảng 1.5 Kết thử nghiệm in vitro khả gây đột biến gen 3-MCPD 17 Bảng 1.6 Kết thử nghiệm in vivo khả gây đột biến gen 3-MCPD 19 Bảng 1.7 Cơng thức bạch cầu bình thường 20 Bảng 1.8 Sự thay đổi số lượng loại bạch cầu ý nghĩa lâm sàng .20 Bảng 1.9 Các dạng bất thường kích thước hồng cầu 23 Bảng 1.10 Các dạng bất thường hình thái hồng cầu .23 Bảng 3.1 Tác động 3-MCPD số bạch cầu lô thử nghiệm độc tính mạn tháng 55 Bảng 3.2 Tác động 3-MCPD số hồng cầu lơ thử nghiệm độc tính mạn tháng 57 Bảng 3.3 Tác động 3-MCPD số tiểu cầu lơ thử nghiệm độc tính mạn tháng 59 Bảng 3.4 Tác động 3-MCPD số bạch cầu lô thử nghiệm độc tính mạn 12 tháng 60 Bảng 3.5 Tác động 3-MCPD số hồng cầu lơ thử nghiệm độc tính mạn 12 tháng 62 Bảng 3.6 Tác động 3-MCPD số tiểu cầu lô thử nghiệm độc tính mạn 12 tháng 64 Bảng 3.7 Tổng kết thay đổi hình thái hồng cầu phương pháp phết máu ngoại vi 71 Bảng 3.8 Kết xét nghiệm bất thường hồng cầu máy huyết đồ ADVIA 2120i .72 Bảng 3.9 Kết lympho bất thường sau phơi nhiễm 3-MCPD mạn tính 12 tháng .73 v Trang Bảng 3.10 Tác động 3-MCPD lên thời gian chảy máu sau phơi nhiễm tháng, tháng 12 tháng 75 Bảng 3.11 Tác động 3-MCPD lên thời gian đông máu sau phơi nhiễm tháng, tháng 12 tháng 76 Bảng 3.12 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lơ thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD 24 78 Bảng 3.13 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lơ thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD 48 79 Bảng 3.14 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lơ thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD 72 80 Bảng 3.15 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lơ thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD tuần .81 Bảng 3.16 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lô thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD tháng 84 Bảng 3.17 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lơ thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD tháng 85 Bảng 3.18 Số lượng vi nhân quan sát thị trường lơ thí nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD 12 tháng .87 Bảng 3.19 Hoạt tính AST ALT huyết tương sau phơi nhiễm 3-MCPD thời gian tháng lô thử nghiệm 90 Bảng 3.20 Tỷ số khối lượng gan/thể trọng chuột lô thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD tháng 90 Bảng 3.21 Kết vi phẫu gan lô chuột thí nghiệm sau 12 tháng phơi nhiễm 3MCPD 93 Bảng 3.22 Tổng kết biểu c-fos lô thử nghiệm sau gây phơi nhiễm 3MCPD 99 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cơng thức hóa học dẫn xuất cloropropanol .4 Hình 1.2 Cơ chế tạo thành vi nhân biểu vi nhân hồng cầu .25 Hình 1.3 Vi thể dị sản gan với nhân đa hình, nhân đơi màng nhân bất thường 29 Hình 1.4 Dẫn truyền biểu c-fos .32 Hình 1.5 Phương pháp hóa mơ miễn dịch trực tiếp .34 Hình 1.6 Phương pháp hóa mô miễn dịch gián tiếp 34 Hình 1.7 Phương pháp nhuộm cresyl violet quan sát thân tế bào thần kinh thể Nissl 36 Hình 2.1 Máy xét nghiệm huyết học ADVIA 2120i 39 Hình 2.2 Máy xét nghiệm huyết học EXCELL 2280 39 Hình 2.3 Máy xét nghiệm sinh hóa Tecno 168 39 Hình 2.4 Lấy máu từ tim chuột 43 Hình 2.5 Mẫu mơ não nhuộm hóa mô miễn dịch .52 Hình 3.1 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD 24 67 Hình 3.2 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD 48 67 Hình 3.3 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD 72 68 Hình 3.4 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD tuần 69 Hình 3.5 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD tháng 69 Hình 3.6 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD tháng 70 Hình 3.7 Hình thái hồng cầu sau phơi nhiễm 3-MCPD 12 tháng 71 Hình 3.8 Vi nhân tế bào hồng cầu lơ thí nghiệm sau 24 phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 79 Hình 3.9 Vi nhân tế bào hồng cầu lơ thí nghiệm sau 48 phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 80 Hình 3.10 Vi nhân tế bào hồng cầu lơ thí nghiệm sau 72 phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 81 Hình 3.11 Vi nhân tế bào hồng cầu lơ thí nghiệm sau tuần phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 82 Hình 3.12 Vi nhân tế bào hồng cầu lơ thí nghiệm sau tháng phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 84 vii Trang Hình 3.13 Vi nhân tế bào hồng cầu lơ thí nghiệm sau tháng phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 85 Hình 3.14 Vi nhân tế bào hồng cầu lô thí nghiệm sau 12 tháng phơi nhiễm 3MCPD (x 1000) 88 Hình 3.15 Hình ảnh đại thể gan lô thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD tháng .91 Hình 3.16 Hình ảnh sinh thiết gan lơ thí nghiệm (x 400) 92 Hình 3.17 Mơ gan bình thường trường hợp viêm, nghịch sản 94 Hình 3.18 Sự biểu c-fos độ pha loãng 1/100 (kháng thể sơ cấp kháng c-fos) 1/20 (kháng thể thứ cấp-cơ chất tạo màu) 95 Hình 3.19 Sự biểu c-fos lô thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD liều 10 mg/kg 24 96 Hình 3.20 Sự biểu c-fos lô thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD liều 50 mg/kg 24 97 Hình 3.21 Sự biểu c-fos lô thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD liều 100 mg/kg 24 98 Hình 3.22 Sự biểu c-fos lơ thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD liều 100 mg/kg 48 99 Hình 3.23 Sự biểu c-fos lô thử nghiệm sau phơi nhiễm 3-MCPD liều 100 mg/kg 72 100 Hình 3.24 Sự bắt màu cresyl violet vùng hồi hải mã lô thử nghiệm sau 24 phơi nhiễm 3-MCPD .101 Hình 3.25 Sự bắt màu cresyl violet vùng hồi hải mã lô thử nghiệm sau 48 72 phơi nhiễm 3-MCPD .101 Hình 3.26 Sự bắt màu cresyl violet vùng hồi hải mã với độ phóng đại cao (x 1000) sau 72 phơi nhiễm 3-MCPD 103 Hình 3.27 Sự bắt màu cresyl violet vùng hồi hải mã lô thử nghiệm sau tuần phơi nhiễm 3-MCPD .104 Hình 3.28 Sự bắt màu cresyl violet vùng hồi hải mã với độ phóng đại cao (x 1000) sau tuần phơi nhiễm 3-MCPD .105 PL-11 PHỤ LỤC 3: THỜI GIAN CHẢY MÁU VÀ THỜI GIAN ĐÔNG MÁU Ở CÁC LÔ SAU KHI PHƠI NHIỄM 3-MCPD TRONG THÁNG, THÁNG VÀ 12 THÁNG Thời gian chảy máu (giây) sau tháng STT Chứng 3-MCPD 3-MCPD 3-MCPD mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg 219 109 100 111 207 66 125 75 194 211 59 100 179 185 92 121 133 148 50 113 162 140 140 88 204 190 135 72 150 119 107 Chết 75 176 133 Chết 10 149 88 81 Chết 11 148 192 118 Chết 12 Chết 143 113 Chết 13 Chết 145 126 Chết 14 Chết Chết 128 Chết 15 Chết Chết 174 Chết 16 Chết Chết Chết Chết 17 Chết Chết Chết Chết 18 Chết Chết Chết Chết 19 Chết Chết Chết Chết 20 Chết Chết Chết Chết 21 Chết Chết Chết Chết 22 Chết Chết Chết Chết 23 Chết Chết Chết Chết 24 Chết Chết Chết Chết 25 Chết Chết Chết Chết PL-12 PHỤ LỤC 3: THỜI GIAN CHẢY MÁU VÀ THỜI GIAN ĐÔNG MÁU Ở CÁC LÔ SAU KHI PHƠI NHIỄM 3-MCPD TRONG THÁNG, THÁNG VÀ 12 THÁNG Thời gian đông máu (phút) sau tháng STT Chứng 3-MCPD 3-MCPD 3-MCPD mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg 11,53 7,81 6,51 5,1 10,89 8,18 7,8 3,83 11,43 8,23 7,33 3,43 11,33 9,17 6,68 4,92 12,30 7,99 6,95 3,31 12,45 8,17 8,01 3,86 12,45 8,57 7,41 4,61 10,14 7,63 8,33 Chết 10,50 7,48 7,88 Chết 10 11,11 8,09 7,56 Chết 11 12,48 8,08 7,77 Chết 12 11,56 8,68 7,77 Chết 13 11,97 9,13 7,15 Chết 14 Chết Chết 8,44 Chết 15 Chết Chết 7,37 Chết 16 Chết Chết 9,23 Chết 17 Chết Chết 9,33 Chết 18 Chết Chết 10,04 Chết 19 Chết Chết Chết Chết 20 Chết Chết Chết Chết 21 Chết Chết Chết Chết 22 Chết Chết Chết Chết 23 Chết Chết Chết Chết 24 Chết Chết Chết Chết 25 Chết Chết Chết Chết PL-13 PHỤ LỤC 3: THỜI GIAN CHẢY MÁU VÀ THỜI GIAN ĐÔNG MÁU Ở CÁC LÔ SAU KHI PHƠI NHIỄM 3-MCPD TRONG THÁNG, THÁNG VÀ 12 THÁNG Thời gian chảy máu (giây) sau 12 tháng STT CHỨNG 3-MCPD MG/KG 3-MCPD 10 MG/KG 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 219 207 194 179 133 162 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết 155 175 160 150 145 195 190 197 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết 75 78 135 145 90 145 135 105 150 170 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết PL-14 PHỤ LỤC 3: THỜI GIAN CHẢY MÁU VÀ THỜI GIAN ĐÔNG MÁU Ở CÁC LÔ SAU KHI PHƠI NHIỄM 3-MCPD TRONG THÁNG, THÁNG VÀ 12 THÁNG Thời gian đông máu (phút) sau 12 tháng STT CHỨNG 3-MCPD MG/KG 3-MCPD 10 MG/KG 11.53 10.58 11.82 10 11 12 13 11.95 11.77 13.25 13.42 11.9 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết 9.97 9.08 12.25 10.85 9.5 Chết Chết Chết Chết Chết Chết 10.37 11.75 8.67 9.58 9.5 8.42 7.95 7.71 Chết Chết Chết Chết 14 15 16 17 18 19 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết 20 21 22 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết 23 24 25 Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết Chết PL-15 PHỤ LỤC 4: NỘI KIỂM ENZYM Thời gian: Tháng 12/2010 Test: AST Số lô: 0002 Mean: 33,6 ± 3,9 Máy : Tecno 168 Huyết kiểm tra: Humatrol - N Hạn sử dụng: 12/2012 Người thực hiện: ThS Nguyễn Thị Xuân Ngày 10 11 12 13 16 17 18 19 20 23 24 25 26 Giá trị đo 34,1 35,6 37 32,4 30,1 29,9 35,4 30,1 36,2 36 36,7 35,2 32,1 31,4 30,6 31,5 33,6 34,5 35,2 M 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 33,6 1SD 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 37,5 2SD 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 41,4 3SD 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 45,3 -1SD 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 29,7 -2SD 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 25,8 -3SD 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 21,9 27 30,1 33,6 37,5 41,4 45,3 29,7 25,8 21,9 Xi (U/L) BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra - AST Ngày PL-16 PHỤ LỤC 4: NỘI KIỂM ENZYM Máy : Tecno 168 Huyết kiểm tra: Humatrol - N Hạn sử dụng: 12/2012 Người thực hiện: ThS Nguyễn Thị Xuân Thời gian: Tháng 12/2010 Test: ALT Số lô: 0002 Mean: 31,5 ± 3,65 Ngày 10 11 12 13 16 17 18 Giá trị đo 33,1 31 29,6 29 35 34,2 32,1 30,6 34,6 33,5 35 30,4 29,9 M 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 1SD 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 2SD 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 3SD 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 -1SD 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 -2SD 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 -3SD 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 19 20 23 24 25 26 30 34,2 35,6 33,2 29,8 30,1 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 31,5 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 35,15 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 38,8 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 42,45 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 27,85 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 24,2 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 20,55 27 33,4 31,5 35,15 38,8 42,45 27,85 24,2 20,55 Xi (U/L) BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra - ALT Ngày PL-17 PHỤ LỤC 5: NỘI KIỂM HUYẾT ĐỒ Thời gian: Tháng 2/2010 Test: WBC (109/L) Số lô: U054 Mean: 3,35 ± 0,14 Ngày Giá trị đo 3,4 3,4 3,3 3,3 3,5 3,4 12 3,3 13 3,4 18 3,3 19 3,5 20 3,3 21 3,4 22 3,4 23 3,6 25 3,5 26 3,3 27 3,3 28 3,5 M 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 3,35 1SD 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 3,49 2SD 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 3,63 Máy : ADVIA 2120 Huyết kiểm tra: R&D Systems Hạn sử dụng: 2/2012 Người thực hiện: ThS Lại Thị Thảo 3SD -1SD -2SD -3SD 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 3,77 3,21 3,07 2,93 Xi (109/L) BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra – WBC Ngày PL-18 PHỤ LỤC 5: NỘI KIỂM HUYẾT ĐỒ Máy : ADVIA 2120 Huyết kiểm tra: R&D Systems Hạn sử dụng: 2/2012 Người thực hiện: ThS Lại Thị Thảo Thời gian: Tháng 2/2010 Test: RBC (109/L) Số lô: U054 Mean: 4,38 ± 0,08 Value 12 13 18 19 20 21 22 23 25 26 27 28 4,32 4,44 4,35 4,37 4,45 4,38 4,45 4,46 4,49 4,48 4,39 4,3 4,25 4,38 4,28 4,29 4,3 4,51 M M+SD M+2SD M+3SD M-SD 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 4,38 4,46 4,54 4,62 4,30 BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra - RBC Xi (1012/L) Date Ngày M-2SD M-3SD 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,22 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 4,14 PL-19 PHỤ LỤC 5: NỘI KIỂM HUYẾT ĐỒ Máy : ADVIA 2120 Huyết kiểm tra: R&D Systems Hạn sử dụng: 2/2012 Người thực hiện: ThS Lại Thị Thảo Thời gian: Tháng 2/2010 Test: Hb (g/dL) Số lô: U054 Mean: 12,6 ± 0,2 Value 12 13 18 19 20 21 22 23 25 26 27 28 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 12,70 M M+SD M+2SD M+3SD M-SD M-2SD M-3SD 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 12,60 12,80 13,00 13,20 12,40 BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra – Hb 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,20 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00 Xi (g/dL) Date Ngày PL-20 PHỤ LỤC 5: NỘI KIỂM HUYẾT ĐỒ Máy : ADVIA 2120 Huyết kiểm tra: R&D Systems Hạn sử dụng: 2/2012 Người thực hiện: ThS Lại Thị Thảo Thời gian: Tháng 2/2010 Test: MCV (fL) Số lô: U054 Mean: 94 ± Value 12 13 18 19 20 21 22 23 25 26 27 28 93,60 93,9 93,7 93,6 93,9 93,9 94,1 94,2 93,5 93 93,5 93,3 93,5 93,5 93,6 93,6 91,6 92,1 M M+SD M+2SD M+3SD M-SD M-2SD M-3SD 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 94,00 96,00 98,00 100 92,00 BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra – MCV 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 90,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 88,00 Xi (fL) Date Ngày PL-21 PHỤ LỤC 5: NỘI KIỂM HUYẾT ĐỒ Máy : ADVIA 2120 Huyết kiểm tra: R&D Systems Hạn sử dụng: 2/2012 ThS Lại Thị Thảo Thời gian: Tháng 2/2010 Test: PLT (109/ L) Số lô: U054 Mean: 230 ± Value 12 13 18 19 20 21 22 23 25 26 27 28 239 235 225 236 235 229 239 240 238 232 230 227 236 222 223 227 229 239 M M+SD M+2SD M+3SD M-SD 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 230 235 240 245 225 BIỂU ĐỒ LEVEY – JENNINGS Mẫu kiểm tra – PLT Xi (109/L) Date Ngày M-2SD M-3SD 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 220 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 215 PL-22 PHỤ LỤC 6: SO SÁNH THỐNG KÊ CÔNG THỨC MÁU GIỮA LÔ CHỨNG VÀ CÁC LÔ PHƠI NHIỄM 3-MCPD BẠCH CẦU TRUNG TÍNH Ở CÁC LƠ SAU THÁNG PHƠI NHIỄM 3-MCPD 3-MCPD 3-MCPD 3-MCPD STT Lô chứng mg/kg 10 mg/kg 20 mg/kg 3.86 10.09 4.18 1.52 8.23 3.86 3.17 4.7 12.7 4.99 2.38 3.11 5.15 4.88 2.09 3.01 3.78 4.5 3.88 2.95 3.22 3.83 2.49 1.35 7.58 6.58 3.25 3.98 4.39 6.19 3.04 3.31 11.5 6.1 2.71 8.52 10 8.53 2.7 5.18 5.2 11 4.83 2.2 5.24 4.87 12 3.73 6.5 3.57 13 5.2 0.7 1.95 14 9.33 3.44 15 4.78 F-Test Two-Sample for Variances Mean Variance Observations df F P(F