ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA 3-MONOCLOROPROPAN-1,2-DIOL (3-MCPD) TRÊN GAN, MÁU VÀ THẦN KINH CỦA CHUỘT NHẮT

Header Page of 166 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGƠ KIẾN ĐỨC ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA 3MONOCLOROPROPAN-1,2-DIOL (3-MCPD) TRÊN GAN, MÁU VÀ THẦN KINH CỦA CHUỘT NHẮT CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 62720410 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP Hồ Chí Minh, Năm 2016 Footer Page of 166 Header Page of 166 Cơng trình hoàn thành tại: ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Mạnh Hùng GS.TS Nguyễn Văn Thanh Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ Hội đồng chấm luận án cấp Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Vào hồi: … giờ……ngày……tháng……năm…… Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Khoa học Tổng hợp TP.Hồ Chí Minh - Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Footer Page of 166 Header Page of 166 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Thực phẩm phần thiết yếu sống Các chất lạ diện thực phẩm mối quan tâm người tiêu dùng Các chất lạ chất có khả gây độc cho thể cho vào thực phẩm nhằm mục đích bảo quản, tạo màu mùi thu hút; chất sinh trình sản xuất Việc đánh giá, làm rõ mức độ gây độc chất cần thiết mang tính thời 3-monocloropropan-1,2-diol (3-MCPD) hóa chất thuộc nhóm cloropropanol Trong q trình chế biến nhiều loại thực phẩm (như nước tương, dầu hào, sản phẩm quay rán, nướng, bánh mì,…) ln ln tồn dư lượng 3-MCPD sản phẩm cuối Để đánh giá tồn diện độc tính chất này, ngồi độc tính biết 3-MCPD thận quan sinh dục với nhiều chứng thuyết phục, chúng tơi đặt trọng tâm nghiên cứu đánh giá độc tính 3-MCPD quan khác máu, gan, não nhằm cung cấp thêm liệu khoa học có ý nghĩa cho lĩnh vực an tồn thực phẩm Mục tiêu sau: Đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học sau gây phơi nhiễm mạn tính tháng 12 tháng Đánh giá độc tính 3-MCPD nhiễm sắc thể pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính phương pháp vi nhân hồng cầu Đánh giá độc tính mạn tính 3-MCPD gan thông qua enzym chức gan khảo sát mô học tế bào gan Đánh giá độc tính 3-MCPD não chuột nhắt qua biểu c-fos thối hóa tế bào thần kinh Tính cấp thiết đề tài Trên giới có nhiều cơng trình nghiên cứu độc tính 3MCPD thận quan sinh sản Những vấn đề quan tâm lại đề cập đến độc tính 3-MCPD tác động 3- Footer Page of 166 Header Page of 166 MCPD huyết học, gan hay quan thần kinh Đồng thời, tác động 3-MCPD nhiễm sắc thể nghiên cứu công bố chưa rõ ràng Ngồi ra, chưa có cơng trình nghiên cứu đánh giá độc tính 3-MCPD thể người động vật thực nước ta, đề tài nghiên cứu độc tính 3MCPD chuột nhắt quan mục tiêu gan, máu thần kinh cần thiết, có ý nghĩa khoa học thực tiễn Những đóng góp luận án Kết luận án đóng góp thêm số tác động 3MCPD như: 3-MCPD làm thay đổi số lượng biến đổi hình thái bạch cầu lympho phơi nhiễm mạn tính; gây biến đổi hình thái tế bào hồng cầu; gây hình thành vi nhân tế bào hồng cầu máu ngoại vi liều cao giai đoạn cấp tính liều thấp giai đoạn mạn tính; có tác động gây khuynh hướng tăng nghịch sản tế bào gan phơi nhiễm mạn tính; gây biểu c-fos liều cao Bố cục luận án Luận án gồm 125 trang: đặt vấn đề trang, tổng quan tài liệu 34 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 16 trang, kết nghiên cứu 52 trang, bàn luận 17 trang; kết luận kiến nghị trang Luận án có 32 bảng, 13 biểu đồ, sơ đồ, 40 hình, 110 tài liệu tham khảo CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ 3-MONOCLOROPROPAN-1,2-DIOL (3-MCPD) 3-MCPD, tên gọi khác alpha-monoclorohydrin, thuộc nhóm hóa chất gây độc có tên gọi chung cloropropanol, công thức phân tử C3H7ClO2 3-MCPD hình thành kết trình phản ứng chất béo (triglycerid) với nguồn có chứa Cl- thực phẩm (ví dụ: muối ăn, hay acid hydrocloric) phản ứng với thành phần thực phẩm xúc tác nhiệt độ Footer Page of 166 Header Page of 166 (chiên, nướng…) Tùy loại thực phẩm thời gian, nhiệt độ chế biến mà lượng 3-MCPD tạo nhiều hay 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA 3-MCPD 1.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp Nghiên cứu xác định liều gây chết 3-MCPD thực chuột nhắt ICR với LD50 190 mg/kg 1.2.2 Độc tính thần kinh trung ương 3-MCPD gây nhiều tổn thương chất xám, trải dài từ vỏ não tủy sống, làm tăng thể tích nước bào tương, gây phù tế bào hình Ở liều cao (250-1000 mg/kg), 3-MCPD gây chết động vật thí nghiệm vịng 24 gây tổn thương nghiêm trọng thần kinh trung ương Chuột nhận ba liều 3-MCPD 100 mg/kg hàng ngày chết có tổn thương lan rộng riêng biệt vùng chất xám, từ vỏ não đến tủy sống Ở nhóm dùng liều 50 mg/kg/ngày ngày cho thấy có tổn thương nhỏ vùng trung tâm thân não 1.2.3 Độc tính gan huyết học Ở liều 75 mg/kg, 3-MCPD gây tăng nhẹ trọng lượng gan, sưng tế bào gan mức độ nhẹ đến trung bình Trên chuột nhắt, 3-MCPD làm tăng nhẹ số thể tích trung bình hồng cầu (MCV) chuột đực (liều 400 ppm) chuột (liều 100 200 ppm) không làm thay đổi số lượng hồng cầu 3-MCPD liều 30 mg/kg tuần khỉ gây thiếu máu, giảm bạch cầu, giảm tiểu cầu suy tủy xương 1.2.4 Độc tính thận 3-MCPD gây tích tụ acid oxalic (hình thành từ chuyển hóa 3MCPD) gây tạo sỏi calci oxalat, gây tượng viêm cầu thận cấp, vơ niệu gây tử vong liều cao ( 100 mg/kg) 3MCPD liều 100 mg/kg gây tượng protein niệu glucose niệu trầm trọng Sự thay đổi hình thái thận ghi nhận sau ngày dùng liều 75 mg/kg 3-MCPD, quan sát thêm sau 75 ngày thấy hoại tử, tái tạo phình to ống thận Footer Page of 166 Header Page of 166 1.2.5 Độc tính quan sinh sản 3-MCPD có ảnh hưởng đến nhiều enzym tế bào biểu mơ tinh hồn, dẫn đến kết giảm ly giải glucose 3-MCPD làm giảm sản sinh progesteron tế bào leydig chuột cống, gây biến đổi hình thái phá hủy DNA tế bào leydig gây chết tế bào 3MCPD gây thay đổi cấu trúc chức protein tế bào tinh hoàn chuột cống giai đoạn sớm suy giảm chức quan sinh sản 3-MCPD liều 75 mg/kg tiêm phúc mạc gây tắc nghẽn túi tinh gây tắc nghẽn ống dẫn tinh sau 5-7 ngày Chuột cống đực vô sinh sau 3-6 ngày tiêm 3-MCPD liều 15-40 mg/kg/ngày 1.2.6 Độc tính dài hạn 3-MCPD Chuột cống Fischer 344 cho uống 3-MCPD liều từ 1,1 đến 35 mg/kg/ngày 104 tuần Bệnh thận mạn tính ghi nhận tất lơ, tỉ lệ gia tăng theo liều, có ý nghĩa thống kê lô sử dụng liều cao Bệnh thận nguyên nhân gây tăng tỉ lệ chết non có khác biệt chuột đực chuột Các biểu bệnh thận lô ghi nhận khác biệt có ý nghĩa, thể độc tính phụ thuộc liều tiêu trọng lượng thận, nồng độ creatinin huyết thanh, BUN Tăng sản tế bào biểu mô ống thận ghi nhận hai lô dùng liều cao Tỉ lệ tăng sản xuất khối u liên quan đến liều ghi nhận tất lô, thận: tăng sản ống thận u tuyến, tinh hoàn: tăng sản tế bào Leydig, u tuyến hay ung thư, tuyến vú tuyến bao quy đầu chuột đực: u tuyến, ung thư CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Hóa chất 3-MCPD (98% tinh khiết) hãng Sigma Chuột nhắt trắng, giống đực, chủng Swiss albino, 6-8 tuần tuổi, khỏe mạnh, không dị tật, Viện Vaccin Sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Trọng lượng bắt đầu thí nghiệm 22 ± gam Footer Page of 166 Header Page of 166 2.2 THUỐC THỬ - TRANG THIẾT BỊ – NƠI THỰC HIỆN 2.2.1 Thuốc thử: Kháng thể sơ cấp đa dòng kháng c-fos ly trích từ thỏ (Sigma) Kháng thể thứ cấp liên kết với Extravidin-peroxidase (Sigma) Bộ kit phát màu AEC (3-Amino-9-Ethyl-Carbazole, Sigma) Các thuốc thử, hóa chất khác đạt tiêu chuẩn phịng thí nghiệm 2.2.2 Nơi thực trang thiết bị sử dụng thử nghiệm Nơi thực hiện: Bộ mơn Dược lý, Bộ mơn Hóa sinh - Khoa Dược, Bộ môn Giải phẫu bệnh – Khoa Y (Đại học Y Dược TPHCM), Bệnh viện Chợ Rẫy Trang thiết bị: máy sinh hóa TECNO 168, Ý; máy huyết học EXCELL 2280, Mỹ; máy huyết học ADVIA 2120i, Mỹ 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp nghiên cứu độc tính 3-MCPD chuột nhắt thực theo nguyên tắc sau: a) Chọn chuột thử nghiệm đạt yêu cầu nghiên cứu  Cho chuột phơi nhiễm 3-MCPD: khảo sát lượng nước uống trung bình hàng ngày chuột thử nghiệm, chất 3-MCPD (98% tinh khiết) tính tốn pha với liều thích hợp vào nước uống hàng ngày lô thử nghiệm  Các lô thử nghiệm bao gồm lô chứng (chỉ uống nước) lô cho uống 3-MCPD hàng ngày với liều khác Số lượng chuột cho lơ tính tốn đáp ứng yêu cầu nghiên cứu thống kê theo công thức: E = tổng số lượng chuột lô – tổng số lô, điều kiện chấp nhận: 10 < E < 20  Liều 3-MCPD cho chuột phơi nhiễm chọn dựa sở tham khảo liều gây độc thấp 3-MCPD (1,1 mg/kg), tăng dần 10 lần, 20 lần, 40 lần, 100 lần từ liều thấp để đánh giá tác động có 3-MCPD tác động (nếu có) có đáp ứng theo liều hay khơng b) Sau đạt thời gian phơi nhiễm mong muốn, chuột thử nghiệm Footer Page of 166 Header Page of 166 lấy máu để đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học (cơng thức máu, hình thái tế bào, thời gian đông cầm máu), nhiễm sắc thể (thử nghiệm vi nhân) lấy quan (gan, não) để đánh giá độc tính 3-MCPD gan thần kinh c) Tiêu chí loại bỏ chuột: chuột sau thời gian phơi nhiễm không chọn lấy mẫu chết hay xuất ghẻ lở, bị tiêu chảy…ảnh hưởng đến sức khỏe Các mẫu lấy từ chuột không đạt yêu cầu như: mẫu máu đơng, hay mẫu mơ khơng cho hình ảnh rõ không đưa vào kết nghiên cứu 2.3.1 Đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học  Trên cơng thức máu: chuột lấy máu tồn phần để đánh giá độc tính mạn tính 3-MCPD (6 tháng, 12 tháng) công thức máu bao gồm: hồng cầu, hemoglobin (Hb), hematocrit (Hct), thể tích trung bình hồng cầu (MCV), lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH) nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu; tổng lượng bạch cầu, bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu lympho; tiểu cầu thể tích trung bình tiểu cầu  Trên hình thái hồng cầu, bạch cầu: sau thời gian phơi nhiễm (cấp tính, bán cấp tính mạn tính), hình thái hồng cầu quan sát kính hiển vi kỹ thuật phết máu ngoại vi Ở pha mạn tính 12 tháng, hình thái hồng cầu bạch cầu khảo sát máy huyết học ADVIA 2120i bệnh viện Chợ Rẫy  Trên q trình đơng máu - cầm máu: đánh giá độc tính 3MCPD giai đoạn cầm máu ban đầu thông qua khảo sát thời gian chảy máu thời gian đông máu tiến hành thời gian tháng, tháng 12 tháng 2.3.2 Đánh giá độc tính 3-MCPD nhiễm sắc thể Cho chuột thử nghiệm uống 3-MCPD hàng ngày với liều từ mg/kg đến 100 mg/kg thời gian tương ứng với pha cấp tính (24, 48, 72 tuần), bán cấp tính (3 tháng) mạn tính (6 tháng, Footer Page of 166 Header Page of 166 12 tháng) Đánh giá độc tính 3-MCPD thơng qua thành lập vi nhân hồng cầu phương pháp phết máu ngoại vi 2.3.3 Đánh giá độc tính mạn 3-MCPD gan Cho chuột thử nghiệm uống 3-MCPD hàng ngày với liều từ mg/kg đến 40 mg/kg thời gian tháng 12 tháng Đánh giá độc tính 3-MCPD qua thông số enzym gan (AST, ALT) giải phẫu mô học gan Quan sát đại thể gan so sánh màu sắc, hình dạng gan lô uống 3-MCPD với lô chứng Quan sát vi thể gan: cấu trúc, hình thái tế bào gan tiểu thùy gan xem xét để tìm cấu trúc hình thái bất thường 2.3.4 Đánh giá độc tính 3-MCPD thần kinh Cho chuột thử nghiệm uống 3-MCPD với liều 10, 50 100 mg/kg thời gian 24, 48, 72 tuần Đánh giá độc tính 3-MCPD não chuột dựa phương pháp hóa mơ miễn dịch biểu c-fos phương pháp nhuộm cresyl violet để phát thối hóa tế bào thần kinh CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học 3.1.1 Độc tính 3-MCPD công thức máu 3.1.1.1 Tác động 3-MCPD sau tháng phơi nhiễm  Tác động tổng lượng bạch cầu loại bạch cầu Khơng có khác biệt tổng lượng bạch cầu lô chứng so với lơ có sử dụng 3-MCPD Trên bạch cầu trung tính: lơ 3MCPD 10 mg/kg 20 mg/kg giảm khoảng 50%, có ý nghĩa thống kê Số lượng bạch cầu đơn nhân lơ 3-MCPD có khuynh hướng giảm (p = 0,07) 3-MCPD làm tăng số lượng bạch cầu lympho Như vậy, phơi nhiễm 3-MCPD tháng liều 10 20 mg/kg gây giảm số lượng bạch cầu trung tính, có khuynh hướng gây giảm bạch cầu đơn nhân gây tăng bạch cầu lympho Footer Page of 166 Header Page 10 of 166  Tác động 3-MCPD sau tháng phơi nhiễm hồng cầu 3-MCPD gây tăng nồng độ huyết sắc tố hồng cầu (MCHC) Lô 3-MCPD liều mg/kg làm giảm có ý nghĩa hematocrit thể tích trung bình hồng cầu Như 3-MCPD với liều mg/kg/ngày - 20 mg/kg/ngày sử dụng liên tục tháng có khuynh hướng gây giảm thể tích trung bình hồng cầu làm tăng nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu  Tác động 3-MCPD sau tháng phơi nhiễm tiểu cầu Số lượng tiểu cầu lô uống 3-MCPD tăng lên, lơ 3-MCPD liều 10 mg/kg 20 mg/kg gây tăng có ý nghĩa thống kê Thể tích trung bình tiểu cầu giảm lơ sử dụng 3-MCPD 3.1.1.2 Tác động 3-MCPD sau 12 tháng phơi nhiễm  Tác động tổng lượng bạch cầu loại bạch cầu Sau 12 tháng, toàn chuột lô liều 3-MCPD liều 40 mg/kg bị tử vong 3-MCPD làm giảm tổng lượng bạch cầu, bạch cầu trung tính, bạch cầu lympho gây tăng bạch cầu đơn nhân  Tác động 3-MCPD hồng cầu 3-MCPD liều 10 mg/kg gây giảm số lượng hồng cầu, hematocrit hemoglobin Trên thông số MCH, MCHC MCV, tất không cho thấy có thay đổi rõ rệt Như vậy, sau 12 tháng phơi nhiễm, 3-MCPD có tác động làm giảm số lượng hồng cầu, hemoglobin hematocrit  Tác động 3-MCPD sau 12 tháng phơi nhiễm tiểu cầu Số lượng tiểu cầu lô phơi nhiễm 3-MCPD mg/kg, 10 mg/kg tăng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng, củng cố cho kết thu sau tháng Sau tháng 12 tháng thử nghiệm, thấy rằng: phơi nhiễm mạn tính 3-MCPD với liều từ 1-20 mg/kg gây độc tính hệ tạo máu Độc tính thể khác dòng tế bào máu Rối loạn sản xuất bạch cầu lympho gia tăng số lượng tiểu cầu có Footer Page 10 of 166 Header Page 13 of 166 11 vi nhân thể rõ với tỷ lệ hồng cầu có vi nhân xuất nhiều mức độ xuất vi nhân tăng theo liều lượng Đặc biệt hai lô 10 mg/kg 40 mg/kg, số lượng tế bào có vi nhân xuất nhiều thị trường dễ dàng quan sát thấy Như vậy, 3-MCPD gây xuất vi nhân tế bào hồng cầu, biểu tổn thương nhiễm sắc thể, lệ thuộc vào liều lượng thời gian phơi nhiễm Ở liều cao (100 mg/kg), 3-MCPD gây tổn thương nhiễm sắc thể vòng 24 Ở liều thấp mg/kg, tác động gây tổn thương nhiễm sắc thể 3-MCPD thể sau tháng phơi nhiễm  3.2.3 Tác động gây hình thành vi nhân 3-MCPD sau 12 tháng phơi nhiễm Sau 12 tháng phơi nhiễm, hình thành vi nhân hồng cầu thể rõ, với tỉ lệ hồng cầu có vi nhân xuất cao nhiều so với pha tháng mức độ xuất tăng theo liều lượng phơi nhiễm Kết củng cố lại kết bất thường thu sau nghiên cứu pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính (3, tháng) Vì kết luận 3-MCPD gây tổn thương nhiễm sắc thể lệ thuộc vào thời gian phơi nhiễm liều lượng sử dụng 3.3 Đánh giá độc tính mạn tính 3-MCPD gan 3.3.1 Độc tính 3-MCPD gan tháng  Tác động 3-MCPD lên hoạt tínhcác enzym AST ALT 3-MCPD liều 1, 10 20 mg/kg thể trọng khơng làm thay đổi hoạt tính AST ALT có ý nghĩa mặt bệnh lý so với lơ chứng  Tác động 3-MCPD mô học gan a Tác động 3-MCPD lên tỷ số khối lượng gan / thể trọng chuột Có thay đổi nhỏ tỷ số khối lượng gan thể trọng lô chứng lô 3-MCPD Trọng lượng thực gan lơ có sử dụng 3-MCPD giảm nhẹ so với lô chứng, 3-MCPD sử dụng liều cao 20 mg/kg tháng không làm to gan hay Footer Page 13 of 166 Header Page 14 of 166 12 teo gan có khuynh hướng làm giảm trọng lượng gan b Quan sát đại thể gan Gan chuột lô chứng lơ uống 3-MCPD có bề mặt nhẵn bóng, màu nâu đỏ đồng nhất, không xuất nốt trắng hay nốt tăng sản bất thường gan c Quan sát vi thể gan Kết sinh thiết gan lô chứng lô uống 3-MCPD cho thấy tế bào gan có cấu trúc bình thường, khơng có thâm nhập tế bào viêm quanh khoảng cửa Tất mẫu sinh thiết khơng có hình ảnh xơ gan Như vậy, qua xét nghiệm sinh hóa enzym gan (AST, ALT) phân tích mơ học, kết cho thấy 3-MCPD liều lượng mg/kg, 10 mg/kg 20 mg/kg sử dụng liên tục tháng không gây xuất bất thường cấu trúc chức gan 3.3.2 Đánh giá độc tính mạn tính 3-MCPD gan sau 12 tháng phơi nhiễm Sau 12 tháng thử nghiệm, kết mặt đại thể gan tương tự kết thu tháng, nhiên kết vi phẫu gan thu kết khác biệt Trên nghịch sản tế bào gan: lơ 3MCPD 10 mg/kg có tỉ lệ nghịch sản tế bào gan 45,45 %, cao lần so với lô chứng, khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê cho thấy, việc sử dụng 3-MCPD liều 10 mg/kg có khuynh hướng làm tăng tỉ lệ nghịch sản tế bào gan (p = 0,07) Các tổn thương hoại tử đốm, hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm, hoại tử theo chu trình apoptosis xảy tất lơ thí nghiệm với tỉ lệ khác Với chất chung hoại tử theo chu trình, tổn thương không liên quan đến việc sử dụng 3-MCPD mà trình tự phát chuột lão hóa 3.4 Đánh giá độc tính 3-MCPD não chuột nhắt 3.4.1 Khảo sát biểu c-fos não chuột Footer Page 14 of 166 Header Page 15 of 166 13  Khảo sát biểu c-fos sau gây phơi nhiễm 3-MCPD liều 10, 50 mg/kg 24-48-72 Quan sát nhuộm màu hóa mơ miễn dịch lát cắt não, khoảng từ Bregma 0.0 đến -1.0 mm, cho thấy 3-MCPD liều 10 50 mg/kg không gây kích hoạt biểu c-fos thời điểm gây phơi nhiễm  Khảo sát biểu c-fos sau gây phơi nhiễm 3-MCPD liều 100 mg/kg 24-48-72 Khơng phát não chuột có dấu hiệu biểu c-fos sau uống 3-MCPD liều 24 Sự biểu c-fos quan sát sau 48 giờ, chủ yếu vùng vỏ não Sự biểu c-fos khơng tập trung vị trí mà trải cách rải rác 3-MCPD liều 100 mg/kg gây biểu c-fos rải rác vùng vỏ não sau 72 Dù khơng thể xác định xác mức độ biểu hiện, mật độ tín hiệu dương tính thấp so với thời điểm 48 3.4.2 Khảo sát tác động 3-MCPD thối hóa tế bào thần kinh não chuột phương pháp nhuộm cresyl violet Ở giai đoạn cấp tính (từ 24-72 giờ), 3-MCPD liều 10 mg/kg, 50 mg/kg 100 mg/kg chưa thể tác động gây thối hóa tế bào thần kinh vùng hồi hải mã Sau tuần cho uống 3-MCPD tất chuột uống liều 100 mg/kg bị tử vong Sự nhuộm màu vùng hồi hải mã cresyl violet cho thấy khơng có khác biệt rõ rệt lô uống 3-MCPD liều 10 mg/kg 50 mg/kg so với lô chứng CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Chọn liều nghiên cứu thời gian thử nghiệm Trong nghiên cứu chúng tôi, liều phơi nhiễm 3-MCPD chuột thử nghiệm chọn dựa sở liều thấp có khả gây độc 3-MCPD 1,1 mg/kg; đồng thời dựa sở tham Footer Page 15 of 166 Header Page 16 of 166 14 khảo từ cơng trình cơng bố nghiên cứu độc tính 3MCPD với khoảng liều sử dụng dao động từ 1-100 mg/kg thể trọng Liều 3-MCPD thử nghiệm tăng dần từ liều thấp lên 10 lần, 20 lần, 40 lần, 100 lần để đánh giá mức liều gây tác động 3-MCPD quan theo mục tiêu (trên gan, máu thần kinh) theo dõi đáp ứng theo liều có Thời gian thử nghiệm thiết kế phù hợp với tính chất thử nghiệm thử nghiệm thời gian ngắn biểu cfos c-fos gen biểu sau có yếu tố tác động vịng 24 Thử nghiệm thời gian dài (6 tháng, 12 tháng) số thử nghiệm độc tính thời gian ngắn chưa cho thấy tác động rõ ràng 3-MCPD tác động gan, huyết học 4.2 Độc tính 3-MCPD huyết học So sánh với nghiên cứu thực hiện, thiết kế nghiên cứu xác định mục tiêu đánh giá độc tính 3-MCPD theo mốc thời gian trải dài từ pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính (6 tháng, 12 tháng) tiêu để đánh giá nghiên cứu chúng tơi có khác biệt với nghiên cứu trước thời gian đông cầm máu Với khác biệt này, tác động 3-MCPD huyết học đánh giá bao quát rõ ràng 4.2.1 Trên số bạch cầu Trong nghiên cứu chúng tôi, tháng, 3-MCPD có khuynh hướng gây giảm bạch cầu đơn nhân, giảm bạch cầu trung tính, gây tăng bạch cầu lympho Trong nghiên cứu Kirton cộng (1970) khỉ, kết cho thấy 3-MCPD (30 mg/kg) gây suy tủy, giảm bạch cầu, nghiên cứu Cho cộng (2008) chuột nhắt 13 tuần khơng cho thấy tác động 3-MCPD Vì thế, cho thiết kế thời gian, liều thử nghiệm chủng thú vật thí nghiệm cho kết khác Sau 12 tháng, kết cho thấy 3-MCPD gây giảm tổng lượng bạch cầu, Footer Page 16 of 166 Header Page 17 of 166 15 giảm bạch cầu trung tính bạch cầu lympho, phù hợp với nghiên cứu Kirton cộng (1970), Cho cộng (về tăng bạch cầu đơn nhân, dù nghiên cứu Cho chưa có ý nghĩa thống kê) Chúng tơi cịn nhận thấy khả tác động mạnh mẽ 3-MCPD lên lympho bào, tạo lympho có hình thái đa hình lympho bào bất thường Những biến đổi nói chung số lượng loại bạch cầu hình thái bạch cầu lympho tác động gây nhiễm độc mạn tính khác 3-MCPD dòng tế bào tủy (tế bào gốc đa tạo bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân) dòng tế bào lympho (tạo lympho B lympho T), làm rối loạn tăng sinh biệt hóa dịng bạch cầu Trong nghiên cứu chúng tơi, kết quan sát chủ yếu dòng bạch cầu máu ngoại vi Chúng chưa tiến hành kỹ thuật phết tủy để chứng minh nhận định nêu Tuy vậy, với quy trình đánh giá độc tính 3-MCPD thiết kế thời gian dài (6 tháng 12 tháng), tác động lên dòng tế bào bạch cầu 3-MCPD ghi nhận nghiên cứu kết độc tính 3-MCPD so với nghiên cứu trước Kết đưa lời cảnh báo nguy gây ung thư bạch cầu bị phơi nhiễm mạn tính 3-MCPD 4.2.2 Trên số hồng cầu thông số liên quan Kết nghiên cứu cho thấy 3-MCPD gây tăng nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu, có khuynh hướng gây giảm thể tích trung bình hồng cầu sau tháng phơi nhiễm làm giảm số lượng hồng cầu, hematocrit, Hb sau 12 tháng phơi nhiễm Đồng thời, kết xét nghiệm bất thường hồng cầu cho thấy có tình trạng hồng cầu có kích thước nhỏ (MCV < 80 fL) Như vậy, độc tính mạn tính 3-MCPD gây thiếu máu hồng cầu nhỏ Điều phù hợp với kết nghiên cứu Kirton cộng (1970) cho thấy 3-MCPD gây thiếu máu chuột cống Trong Footer Page 17 of 166 Header Page 18 of 166 16 nghiên cứu Cho cộng (2008) khơng quan sát thấy tình trạng thay đổi số lượng hồng cầu, có gia tăng số thể tích trung bình hồng cầu (MCV) Qua kết này, khẳng định phơi nhiễm 3-MCPD lâu dài có nguy gây thiếu máu hồng cầu nhỏ 3-MCPD tác động lên dòng tế bào hồng cầu gây giảm số lượng hồng cầu thay đổi kích thước hồng cầu  Trên hình thái hồng cầu: theo tài liệu tham khảo, chúng tơi chưa tìm thấy có nghiên cứu mơ tả tác động 3-MCPD hình thái hồng cầu Có lẽ phần lớn nghiên cứu tập trung vào số sinh hóa huyết học chưa quan tâm đến khía cạnh hình thái Tác động 3-MCPD hình thái hồng cầu theo thời gian pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính, cho thấy pha cấp tính, 3MCPD chưa tác động đến hình thái hồng cầu ngoại trừ liều cao 100 mg/kg; pha bán cấp tính, 3-MCPD với liều ≥ 10 mg/kg sau tháng có tác động đến hồng cầu, làm màng tế bào hồng cầu xuất chỗ lồi rõ hình thành gai liều 40 mg/kg sau tháng xuất nhiều hồng cầu có gai nhọn Hồng cầu hình gai quan sát thường thấy phết máu nhiều loại động vật, kết phết máu môi trường ưu trương Tuy nhiên, nhiều diễn tiến bệnh, bệnh lý thiếu hụt abetalipoprotein, bệnh lý tuyến giáp hay rối loạn thần kinh độc chất tìm thấy làm thay đổi màng hồng cầu, dẫn đến thay đổi hình dạng hồng cầu Vì vậy, có mặt hồng cầu hình gai phết máu xét nghiệm huyết học phản ánh thay đổi bệnh lý có ý nghĩa mặt chẩn đốn Chúng tơi chưa có điều kiện đánh giá thay đổi nồng độ abetalipoprotein, chưa nhận thấy rõ tác động 3-MCPD gan nên chưa thể kết luận nguyên nhân gây nên hình thành hồng cầu hình gai, nhiên nhận định tác động bất lợi 3-MCPD hình thái hồng cầu Footer Page 18 of 166 Header Page 19 of 166 17 Bên cạnh tác động gây tượng hồng cầu gai, sau 12 tháng 3MCPD cịn ghi nhận có tác động gây hồng cầu có nhân kết đặc (NRBC), đặc biệt gây tạo mảnh vỡ hồng cầu Điều cho thấy 3MCPD gây thay đổi hình thái, từ gây tạo mảnh vỡ hồng cầu Sự thay đổi hình dạng hồng cầu nguyên nhân dẫn đến thiếu máu nặng khả bắt giữ oxy màng hồng cầu không bền dẫn đến vỡ hồng cầu qua nơi mao mạch máu hẹp, nhỏ Như vậy, tác động 3-MCPD lên thay đổi hình thái hồng cầu xem biểu bệnh lý, nhận định 3MCPD, với tác động làm thay đổi số lượng hình thái hồng cầu, gây ảnh hưởng định lên chức hồng cầu Tóm lại, so với kết báo cáo nghiên cứu trước đây, tác động bất lợi 3-MCPD hình thái hồng cầu, xem bất thường, biểu bệnh lý, thu nghiên cứu điểm độc tính mạn tính 3MCPD xét khía cạnh huyết học, bổ sung thêm vào phần độc tính chung 3-MCPD 4.2.3 Trên số tiểu cầu q trình đơng máu Trái ngược với nghiên cứu khỉ Kirton cộng (1970), kết thí nghiệm chúng tơi cho thấy số lượng tiểu cầu lô uống 3-MCPD tăng lên, nhiên thể tích trung bình tiểu cầu lại giảm Mặc dù chưa có thử nghiệm đánh giá chức tiểu cầu thay đổi làm thay đổi chất lượng chức tiểu cầu Điều phù hợp với kết thí nghiệm q trình đơng máu với thời gian đông-chảy máu ngắn lô dùng 3-MCPD Tiểu cầu tăng trường hợp: thiếu máu hồng cầu nhỏ thiếu sắt, hội chứng cận ung thư (paracancersyndrome), hay nhiễm trùng hay viêm nhiễm mạn tính Kết dịng tế bào hồng cầu cho thấy phơi nhiễm 3-MCPD lâu Footer Page 19 of 166 Header Page 20 of 166 18 dài gây thiếu máu nên số lượng tiểu cầu gia tăng nghiên cứu giải thích thiếu máu Kết phù hợp với nghiên cứu Kirton cộng khía cạnh 3-MCPD gây thiếu máu, lại trái ngược số lượng tiểu cầu So sánh quy trình nghiên cứu để làm rõ khác cho thấy: thời gian, nghiên cứu Kirton diễn tuần so với nghiên cứu tháng, tháng, 12 tháng; thú vật thử nghiệm, nghiên cứu Kirton sử dụng khỉ, so với chuột nhắt nghiên cứu Như vậy, khác biệt giải thích thời gian nghiên cứu khác nhau, phần thú vật thử nghiệm khác Nghiên cứu Kirton cộng thực tuần phơi nhiễm 3-MCPD nên tác động tiểu cầu chưa rõ rệt, giảm tiểu cầu tác động 3-MCPD tủy xương gây ảnh hưởng đến trình sinh máu, thực chất suy tủy đề cập nghiên cứu Kirton Trong nghiên cứu dài chúng tôi, kết phản ánh rõ nét tác động chuyên biệt 3-MCPD dòng tế bào máu cho thấy có phù hợp việc 3-MCPD gây thiếu máu làm tăng số lượng tiểu cầu Với kết thu gia tăng số lượng tiểu cầu, thực khảo sát đánh giá ảnh hưởng tác động 3-MCPD đến trình đơng cầm máu Có nhiều xét nghiệm để đánh giá q trình đơng cầm máu bao gồm xét nghiệm thăm dò giai đoạn cầm máu ban đầu hay giai đoạn đông máu huyết tương (đông máu ngoại sinh hay nội sinh) Trong nghiên cứu chúng tôi, với điều kiện thực tế cịn hạn chế, chúng tơi thực đánh giá tác động 3MCPD lên trình đơng cầm máu giai đoạn cầm máu ban đầu thông qua khảo sát thời gian chảy máu thời gian đông máu (thực chất khảo sát giai đoạn đông máu nội sinh), tiến hành thời gian tháng, tháng 12 tháng Sự giảm thời gian chảy máu thời gian đông máu thu phần phản ánh tác động 3- Footer Page 20 of 166 Header Page 21 of 166 19 MCPD lên q trình đơng cầm máu, tác động khởi nguồn từ gia tăng tiểu cầu, từ làm gia tăng nguy tăng đông Như vậy, với khác biệt phù hợp phân tích nghiên cứu với nghiên cứu nêu, chúng tơi có ý kiến độc tính 3-MCPD huyết học sau:  Phơi nhiễm mạn tính 3-MCPD (12 tháng) gây rối loạn tăng sinh biệt hóa bạch cầu, làm giảm tổng lượng bạch cầu gây giảm bạch cầu trung tính, gây thay đổi số lượng bạch cầu lympho làm tăng bạch cầu đơn nhân Điều 3-MCPD gây tác động tủy xương, làm rối loạn sản xuất dòng bạch cầu Mặc khác, 3-MCPD làm thay đổi hình thái bạch cầu lympho, tạo tế bào lympho có hình thái đa hình lympho bào bất thường yếu tố nguy gây bệnh lý ung thư hệ tạo máu  Phơi nhiễm mạn tính 3-MCPD có nguy gây thiếu máu thể qua giảm số lượng hồng cầu, giảm lượng Hb, giảm tỉ lệ Hct, làm thay đổi hình thái hồng cầu, kích thước hồng cầu nhỏ lại hồng cầu bị phân mảnh Những tác động làm giảm chức sinh lý hồng cầu (vận chuyển oxy, mềm dẻo linh động lưu thông qua mạch máu nhỏ mà không bị vỡ hồng cầu) Nguyên nhân 3-MCPD gây tác động bất lợi lên màng hồng cầu, làm thay đổi cấu trúc màng hồng cầu, từ dẫn đến biến đổi hình thái chất lượng thành phần hồng cầu  Phơi nhiễm 3-MCPD mạn tính làm tăng tiểu cầu, rút ngắn thời gian đơng máu chảy máu Điều gây tác động bất lợi q trình đơng cầm máu, với tác động làm biến đổi hình thái hồng cầu, máu dễ bị đơng bình thường (thực tế có mẫu máu bị đông chứa ống chống đơng có EDTA) 4.3 Độc tính 3-MCPD nhiễm sắc thể Các liều 3-MCPD mg/kg, 10 mg/kg sau 24 sau Footer Page 21 of 166 Header Page 22 of 166 20 tuần chưa có tác động đến hình thành vi nhân tế bào hồng cầu Kết phù hợp với kết nghiên cứu Stephen Robjohns cộng (2003), khảo sát thử nghiệm vi nhân tế bào hồng cầu non tủy xương với liều 15 mg/kg, 30 mg/kg 60 mg/kg sau 24 giờ, cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa lô thử nghiệm với lô chứng Khảo sát liều 100 mg/kg nhận thấy 24 giờ, hồng cầu có vi nhân xuất tăng lên sau 48 72 Sau tháng tháng, 3-MCPD liều 1, 10, 20 40 mg/kg gây hình thành vi nhân rõ rệt Sau 12 tháng, hình thành vi nhân hồng cầu thể rõ, với tỉ lệ hồng cầu có vi nhân xuất cao nhiều so với pha tháng mức độ xuất tăng theo liều lượng phơi nhiễm Kết củng cố lại kết thu thời gian ngắn chúng tơi kết luận 3-MCPD gây hình thành vi nhân hồng cầu máu ngoại vi, lệ thuộc vào thời gian phơi nhiễm liều lượng sử dụng Tác động phản ánh nguy phá vỡ nhiễm sắc thể 3-MCPD lên tế bào máu ảnh hưởng đến tế bào khác Nguyên nhân gây xuất vi nhân hồng cầu tổn thương nhiễm sắc thể đánh giá xác khảo sát tượng với xét nghiệm hồng cầu lưới tế bào tủy xương cho kết bất thường Chúng hy vọng nghiên cứu tiếp theo, có điều kiện thực hiện, chúng tơi có kết đánh giá xác tác động gây tổn thương nhiễm sắc thể 3-MCPD Tóm lại, sau 12 tháng, chúng tơi ghi nhận 3-MCPD gây nên hình thành vi nhân hồng cầu máu ngoại vi Đây kết so với tài liệu chúng tơi tìm thấy được, nghiên cứu trước tiến hành thời gian ngắn (ít tháng) nên chưa ghi nhận biến đổi 4.4 Tác động 3-MCPD gan Footer Page 22 of 166 Header Page 23 of 166 21 Kết thu nghiên cứu chúng tôi, lô chuột uống 3-MCPD liên tục thời gian tháng tất liều (1, 10 20 mg/kg) không thấy xuất bất thường bệnh lý gan Kết phù hợp với nghiên cứu Cho cộng chuột nhắt (2008) Theo đó, 3-MCPD liều cao 76,79 mg/kg/ngày uống liên tục 13 tuần không gây gia tăng hoạt tính enzym gan, khơng gây bất thường bệnh lý gan Một nghiên cứu khác Kluwe (1983) thực thời gian ngắn (từ 24 đến 90 ngày), cho thấy số tác động định 3-MCPD gan, kết khơng khẳng định rõ ràng độc tính 3-MCPD gan, dù mặt vi thể, nghiên cứu Kluwe có báo cáo xung quanh tĩnh mạch cửa gan, bào tương tế bào gan bị căng phồng nhiều mức độ khác Tác động 3-MCPD pha mạn tính 12 tháng cho thấy liều 3MCPD 10 mg/kg tần xuất nghịch sản tế bào gan có xu hướng tăng lên Kết dù chưa thể kết luận cụ thể độc tính 3-MCPD gan góp phần cảnh báo khả gây độc 3-MCPD gan bị phơi nhiễm thời gian dài (12-24 tháng) Trong nghiên cứu Sunahara (24 tháng) khơng thấy đề cập đến độc tính 3-MCPD gan, dù đánh giá thiết kế thời gian dài khảo sát mô học gan mặt vi thể chưa thực hiện, nên chưa phát tác động gan 3-MCPD 4.5 Khảo sát tác động 3-MCPD não dựa biểu c-fos phương pháp nhuộm màu cresyl violet Chúng tơi chọn phương pháp hóa mơ miễn dịch để khảo sát biểu c-fos, đánh giá thối hóa tế bào thần kinh phương pháp nhuộm cresyl violet, khác với nghiên cứu Cavanagh cộng (1993), phương pháp chụp cắt lớp não áp dụng để quan sát tác động 3-MCPD thần kinh C-fos gen tiền ung thư, mã hóa cho protein giúp điều hịa tăng trưởng biệt Footer Page 23 of 166 Header Page 24 of 166 22 hóa tế bào Sự tăng chép tăng biểu c-fos xảy có kích thích yếu tố tăng trưởng Vì vậy, có hóa chất tác động thần kinh, quan sát biểu c-fos thời gian thích hợp (24 giờ) Trong thử nghiệm này, biểu c-fos ghi nhận liều 3-MCPD cao (100 mg/kg) thời điểm 48 72 Vì xem tác động 3MCPD tế bào thần kinh C-fos protein nội bào nên biểu kết xác kháng thể xâm nhập vào bào tương phải phá vỡ màng tế bào Kỹ thuật western blot giúp xác định biểu protein rõ việc xử lý tính thấm qua màng kháng thể thuốc thử triton làm tăng độ phản ứng kháng nguyên - kháng thể Chúng tiến hành xử lý mẫu mô não với chất tăng thấm chưa có điều kiện tiến hành western blot, hạn chế kết chưa thể tránh khỏi Đối với phương pháp nhuộm màu cresyl violet, kết chưa thật cho thấy có điểm khác biệt rõ rệt lơ chứng lơ sử dụng 3-MCPD, chí liều cao Ngoài ra, kết luận chủ yếu dựa mặt định tính chúng tơi chưa có phần mềm xác định số lượng thân tế bào bắt màu nên khó có nhận định xác tượng xảy Có thể, phương pháp cần phải thử nghiệm thời gian dài (6-12 tháng) có kết cho thấy khác biệt (nếu có xảy ra) KẾT LUẬN Qua thời gian thực đề tài nghiên cứu, theo mục tiêu đề ra, thu số kết sau đây: Tác động 3-MCPD huyết học: - Trên bạch cầu: sau tháng, 3-MCPD gây giảm bạch cầu trung tính gây tăng bạch cầu lympho liều 3-MCPD ≥ 10 mg/kg Sau 12 tháng, tượng giảm bạch cầu trung tính thể rõ rệt hơn, đặc Footer Page 24 of 166 Header Page 25 of 166 23 biệt bạch cầu lympho lúc giảm mạnh Trên lympho bào có thay đổi hình thái xuất lympho bào bất thường - Trên hồng cầu: sau tháng, 3-MCPD chưa gây tác động đến hồng cầu ngoại trừ tượng hồng cầu tăng sắc Sau 12 tháng, 3-MCPD gây tượng thiếu máu với việc giảm số lượng hồng cầu, giảm hematocrit giảm hemoglobin lô uống 3-MCPD đặc biệt lơ 3-MCPD 10 mg/kg Ngồi ra, 3-MCPD gây phân mảnh hồng cầu làm thay đổi hình thái hồng cầu, tác động lên chức hồng cầu - Trên tiểu cầu q trình đơng máu: 3-MCPD gây tăng số lượng tiểu cầu rõ rệt làm giảm thể tích tiểu cầu Kết khảo sát q trình đơng cầm máu cho thấy có rút ngắn thời gian đơng máu chảy máu Tác động 3-MCPD nhiễm sắc thể: Kết thu hình thành vi nhân hồng cầu tượng hồng cầu có nhân kết đặc cho thấy 3-MCPD có nguy gây phá vỡ cấu trúc nhiễm sắc thể, thể độc tính gen Tác động 3-MCPD gan: Sau tháng, 3-MCPD liều cao đến 20 mg/kg thể trọng/ngày không gây bất thường bệnh lý gan chuột nhắt Sau 12 tháng, liều 10 mg/kg, 3-MCPD có khuynh hướng làm tăng tỉ lệ nghịch sản tế bào gan cao lần so với lô chứng Tuy khác biệt chưa có ý nghĩa thơng kê cho thấy khuynh hướng gây loạn sản tế bào gan sử dụng 3-MCPD với liều 10 mg/kg thời gian kéo dài Tác động 3-MCPD thần kinh: Chỉ có 3-MCPD liều 100 mg/kg gây biểu c-fos biểu quan sát rõ thời điểm 48 phơi nhiễm, thời điểm 72 giờ, phù hợp với đặc tính gen c-fos biểu thoáng qua biến 3-MCPD liều lượng thời điểm Footer Page 25 of 166 Header Page 26 of 166 24 khảo sát mô tả thực nghiệm chưa phản ánh tình trạng thối hóa thần kinh vùng quan sát hồi hải mã Với trình thử nghiệm độc tính 3-MCPD thu kết định trên, với việc tham khảo tài liệu liên quan, chúng tơi đề xuất sử dụng thiết kế phương pháp nghiên cứu chúng tơi để đánh giá độc tính số độc chất khía cạnh sinh học: - Đánh giá độc tính nhiễm sắc thể pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính qua phương pháp vi nhân hồng cầu - Đánh giá độc tính huyết học, đặc biệt đánh giá hình thái bất thường hồng cầu, bạch cầu - Đánh giá độc tính mạn tính gan quan sát mô học, đặc biệt quan sát vi thể - Quy trình hóa mơ miễn dịch nhuộm màu cresyl violet để đánh giá độc tính thần kinh KIẾN NGHỊ Nghiên cứu sâu tác động 3-MCPD chức hồng cầu, đặc biệt ý nghĩa bệnh học hình thành hồng cầu gai Khảo sát tạo thành vi nhân hồng cầu với xét nghiệm hồng cầu lưới tế bào tủy xương để đánh giá xác nguyên nhân gây xuất vi nhân Nghiên cứu độc tính dài hạn (2 năm) 3-MCPD nhằm xác định nguy gây ung thư 3-MCPD, đặc biệt loại bệnh lý ung thư hệ tạo máu Hồn thiện quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch nghiên cứu ảnh hưởng 3-MCPD lên não với thời gian dài để phát tổn thương thần kinh kháng thể chuyên biệt khác Footer Page 26 of 166 Header Page 27 of 166 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ Ngơ Kiến Đức, Trần Đình Duy, Trần Mạnh Hùng (2009), “Khảo sát độc tính mạn tính 3-Monochloropropan-1,2-diol (3-MCPD) gan chuột nhắt”, Tạp chí Y học Thực hành, Bộ Y Tế, Số (682 + 683), tr 716-720 Hội nghị khoa học cơng nghệ tồn quốc – Trường Đại học Y Dược Cần Thơ 2009 Ngo Kien Duc, Tran Thi Kim Cuc, Nguyen Thi Tuong Vi, Tran Manh Hung (2009), “3-Monochloropropan-1,2-diol (3-MCPD) induced micronucleus formation and morphological alteration in peripheral erythrocytes”, Pharma Indochina VI, Proceedings of the sixth Indochina Conference on Pharmaceutical Sciences, pp 20-24 Ngô Kiến Đức, Trần Mạnh Hùng (2010), “Nghiên cứu độc tính 3Monochloropropan-1,2-diol (3-MCPD) hình thái hồng cầu tạo vi nhân”, Tạp chí Y học, Đại học Y Dược TPHCM, Tập 14 (1), tr 47-51 Hội nghị khoa học công nghệ tuổi trẻ - Đại học Y Dược TPHCM lần thứ 21 – 14/1/2010 Ngô Kiến Đức, Lê Phan Xuân Quyên, Nguyễn Văn Thanh, Trần Mạnh Hùng (2011), “Nghiên cứu độc tính 3-Monochloropropan-1,2-diol (3-MCPD) nhiễm sắc thể pha cấp tính, bán mạn tính mạn tính”, Tạp chí Y học, Đại học Y Dược TPHCM, Tập 15 (1), tr 20-25 Hội nghị khoa học kỹ thuật – Đại học Y Dược TPHCM lần thứ 28 – 14/1/2011 Ngô Kiến Đức, Đặng Thị Trúc Giang, Nguyễn Văn Thanh, Trần Mạnh Hùng (2011), “Nghiên cứu tác động 3-Monochloropropan-1,2-diol (3-MCPD) biểu c-fos”, Tạp chí Y học, Đại học Y Dược TPHCM, Tập 15 (1), tr 318-323 Hội nghị khoa học kỹ thuật – Đại học Y Dược TPHCM lần thứ 28 – 14/1/2011 Ngô Kiến Đức, Trần Mạnh Hùng, Nguyễn Văn Thanh (2011), “Nghiên cứu tác động 3-Monochloropropan-1,2-diol (3-MCPD) q trình đơng máu”, Tạp chí Dược học, Bộ Y Tế, Số 424, tr 33-37 Footer Page 27 of 166 ... chúng tơi để đánh giá độc tính số độc chất khía cạnh sinh học: - Đánh giá độc tính nhiễm sắc thể pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính qua phương pháp vi nhân hồng cầu - Đánh giá độc tính huyết học,... không đưa vào kết nghiên cứu 2.3.1 Đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học  Trên cơng thức máu: chuột lấy máu tồn phần để đánh giá độc tính mạn tính 3-MCPD (6 tháng, 12 tháng) công thức máu bao gồm:... sau: Đánh giá độc tính 3-MCPD huyết học sau gây phơi nhiễm mạn tính tháng 12 tháng Đánh giá độc tính 3-MCPD nhiễm sắc thể pha cấp tính, bán cấp tính mạn tính phương pháp vi nhân hồng cầu Đánh giá