Trong thiết kế thử nghiệm này, 3-MCPD ở các liều 1 mg/kg, 10 mg/kg và 20 mg/kg được cho phơi nhiễm trên các lô chuột thử nghiệm trong thời gian 6 tháng và 12 tháng.
3.3.1. Thẩm định kết quả định lượng hoạt tính AST, ALT của mẫu huyết thanh từ máu chuột nhắt trên máy xét nghiệm sinh hóa Tecno 168
Máy xét nghiệm sinh hóa Tecno 168 được nội kiểm trên các thông số hoạt tính enzym ALT và AST trước khi đo mẫu. Chương trình nội kiểm được thực hiện theo đúng quy định của phòng xét nghiệm. Tất cả các kết quả nội kiểm đều cho kết quả đạt yêu cầu. Như vậy, các thông số hoạt tính enzym đo trên máy xét nghiệm sinh hóa Tecno 168 là tin cậy.
3.3.2. Đánh giá độc tính mạn tính của 3-MCPD trên gan trong 6 tháng
Tác động của 3-MCPD trên gan sau 6 tháng phơi nhiễm được đánh giá thông qua các thông số như hoạt tính các enzym AST, ALT, tỷ lệ khối lượng gan/thể trọng chuột, quan sát đại thể và vi thể gan.
3.3.2.1. Đánh giá tác động mạn tính 6 tháng của 3-MCPD lên hoạt tính các enzym gan AST và ALT
3-MCPD ở các liều 1 mg/kg, 10 mg/kg và 20 mg/kg thể trọng không làm thay đổi hoạt tính AST và ALT có ý nghĩa về mặt bệnh lý so với lô chứng (bảng 3.19 và biểu đồ 3.12). Kết quả sinh thiết gan cũng cho thấy lô chứng và các lô uống 3-MCPD đều không có hiện tượng viêm cũng như xơ gan (hình 3.15). Như vậy 3-MCPD không gây tổn thương tế bào gan khi sử dụng liên tục trong 6 tháng ở cả 3 liều lượng 1 mg/kg, 10 mg/kg và 20 mg/kg.
90
Bảng 3.19. Hoạt tính AST và ALT trong huyết tương sau khi phơi nhiễm 3-MCPD trong thời gian 6 tháng của các lô thử nghiệm
Lô Số chuột
thử nghiệm Hoạt tính AST (UI/L) Hoạt tính ALT (UI/L)
Chứng 18 154 13,48 193 7,430
3-MCPD 1 mg/kg 18 167 16,84 158 7,670 3-MCPD 10 mg/kg 11 126 10,31 188 7,600 3-MCPD 20 mg/kg 14 109 3,470 193 9,800
Biểu đồ 3.12. Hoạt tính AST và ALT trong huyết tương sau khi phơi nhiễm 3-MCPD trong thời gian 6 tháng của các lô thử nghiệm
3.3.2.2. Đánh giá tác động mạn tính 6 tháng của 3-MCPD trên mô học gan a. Đánh giá tác động của 3-MCPD lên tỷ số khối lượng gan / thể trọng chuột
Gan chuột được tách và cắt toàn bộ, sau đó bảo quản trong dung dịch formol 4%. Cân để xác định khối lượng gan và lập tỷ số khối lượng gan/thể trọng chuột, tính kết quả trung bình cho từng lô thí nghiệm. Kết quả được trình bày ở bảng 3.20 và biểu đồ 3.13.
Bảng 3.20. Tỷ số khối lượng gan/thể trọng chuột ở các lô thử nghiệm sau khi phơi nhiễm 3-MCPD trong 6 tháng
Lô Số chuột thử
nghiệm
Khối lượng gan (gam)
Tỷ số khối lượng gan/thể trọng chuột
Lô chứng 18 2,43 0,11 0,047 0,0016 Lô 3-MCPD 1 mg/kg 18 2,20 0,09 0,046 0,0013
Lô 3-MCPD 10 mg/kg 11 2,14 0,09* 0,042 0,0014* Lô 3-MCPD 20 mg/kg 14 2,16 0,11* 0,042 0,0014*
*P < 0,05 so với lô chứng (phép kiểm t-Student)
H o ạt tính A ST( U I/ L) H o ạt tính A L T(UI/ L)
91
Kết quả khảo sát cho thấy chỉ có sự thay đổi nhỏ về tỷ số khối lượng gan và thể trọng giữa lô chứng và các lô sử dụng 3-MCPD. Bên cạnh đó, trọng lượng thực của gan ở các lô có sử dụng 3-MCPD cũng giảm nhẹ so với lô chứng, như vậy 3-MCPD sử dụng ở liều cao nhất là 20 mg/kg trong 6 tháng liên tục không làm to gan hay teo gan xét trên mặt đại thể nhưng có khuynh hướng làm giảm trọng lượng gan.
Biểu đồ 3.13. Tỷ số khối lượng gan/thể trọng chuột ở các lô thử nghiệm sau khi phơi nhiễm 3-MCPD trong 6 tháng
b. Quan sát đại thể gan
Gan chuột ở lô chứng và các lô uống 3-MCPD có bề mặt nhẵn bóng, màu nâu đỏ đồng nhất, không xuất hiện những nốt trắng hay nốt tăng sản bất thường trên gan (hình 3.15).
Hình 3.15. Hình ảnh đại thể gan của các lô thử nghiệm sau khi phơi nhiễm 3-MCPD trong 6 tháng (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
c. Quan sát vi thể gan
Tiêu bản sinh thiết gan ở lô chứng, các lô sử dụng 3-MCPD đều thể hiện hình ảnh tĩnh mạch trung tâm và các xoang mao mạch với các tế bào gan xếp thành dãy tạo
92
nên cấu trúc nan hoa đặc trưng.
Bên cạnh đó, kết quả sinh thiết gan ở lô chứng và các lô uống 3-MCPD cho thấy tế bào gan có cấu trúc bình thường, không có thâm nhập tế bào viêm quanh khoảng cửa. Trên tất cả các mẫu sinh thiết không có hình ảnh xơ gan (hình 3.16).
Hình 3.16. Hình ảnh sinh thiết gan ở các lô thí nghiệm (x 400)
Như vậy, qua xét nghiệm sinh hóa các enzym ở gan (AST, ALT) và phân tích mô học, kết quả cho thấy 3-MCPD ở 3 liều lượng 1 mg/kg, 10 mg/kg và 20 mg/kg sử dụng liên tục trong 6 tháng không gây xuất hiện những bất thường trên cấu trúc và chức năng gan.
3.3.3. Đánh giá độc tính mạn tính của 3-MCPD trên gan sau 12 tháng phơi nhiễm
Do thử nghiệm trong thời gian dài gặp nhiều khó khăn nên thử nghiệm độc tính sau 12 tháng phơi nhiễm 3-MCPD chỉ thực hiện được 1 đợt (so với 2 đợt trong thử ngiệm 6 tháng), nên việc đánh giá chỉ tập trung vào khảo sát mô học tế bào gan, mà không thực hiện được việc đánh giá tác động của 3-MCPD lên hoạt tính AST, ALT (vì không đủ máu, do phải khảo sát công thức máu).
Sau 12 tháng thử nghiệm, kết quả về mặt đại thể gan tương tự như kết quả thu được trong 6 tháng, tuy nhiên kết quả vi phẫu gan thu được những kết quả rất khác biệt, được trình bày trong bảng 3.21.
93
Bảng 3.21. Kết quả vi phẫu gan ở các lô sau 12 tháng phơi nhiễm 3-MCPD
Chứng (n = 10) 3-MCPD 1 mg/kg (n = 7) 3-MCPD 10 mg/kg (n = 11)
Viêm quanh khoảng cửa 80% (8/10 mẫu) 57,14% (4/7 mẫu) 36,36% (4/11 mẫu)
Nghịch sản tế bào gan 10% (1/10 mẫu) Âm tính 45.45 % (5/11 mẫu)
Hoại tử đốm (điểm) 70% (7/10 mẫu) 42,86% (3/7 mẫu) 18,18% Hoại tử quanh tĩnh mạch
trung tâm. 10% (1/10 mẫu) Âm tính 9,09% Tế bào gan apoptosis 50% (5/10 mẫu) Âm tính Âm tính
- Trên nghịch sản tế bào gan: lô 3-MCPD 10 mg/kg có tỉ lệ nghịch sản tế bào gan là 45,45 % (5/11 mẫu gan) cao hơn 4 lần so với lô chứng , tuy sự sai khác này chưa có ý nghĩa thống kê (theo trắc nghiệm χ2) nhưng nó cũng cho thấy, việc sử dụng 3-MCPD ở liều 10 mg/kg có khuynh hướng làm tăng tỉ lệ nghịch sản tế bào gan (P = 0,07 so với chứng).
- Các tổn thương hoại tử đốm, hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm, hoại tử theo chu trình apoptosis đều xảy ra ở tất cả các lô thí nghiệm với các tỉ lệ khác nhau (lô chứng cao hơn 2 lô sử dụng 3-MCPD). Các tổn thương này đều có bản chất chung là hoại tử theo chu trình và có thể các tổn thương này không liên quan đến việc sử dụng 3-MCPD mà là quá trình tự phát khi chuột lão hóa
- Viêm quanh khoảng cửa: tỷ lệ có biến cố này xảy ra ở lô chứng cao hơn hẳn so với 2 lô sử dụng thuốc tuy nhiên giữa các lô cũng không có sự khác biệt thống kê. Theo chúng tôi, có thể đây cũng là một quá trình tự phát.
- Tóm tắt kết quả đánh giá độc tính mạn tính của 3-MCPD trên gan:
Chỉ tiêu đánh giá Tác động của 3-MCPD sau 6 tháng phơi nhiễm
Tác động của 3-MCPD sau 12 tháng phơi nhiễm
Hoạt tính AST, ALT Không thay đổi
Quan sát đại thể Không thay đổi Không thay đổi
Quan sát vi thể Không thay đổi Khuynh hướng gây nghịch
94
Hình 3.17. Mô gan bình thường và các trường hợp viêm, nghịch sản