Tình hình nhiễm porcine circovirrus type 2(PCV2) ở đàn lợn nuôi tại một số tỉnh mièn bắc việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO ðINH ðỨC CẢNH TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - - ðINH ðỨC CẢNH LUẬN VĂN THẠC SĨ NƠNG NGHIỆP TÌNH HÌNH NHIỄM PORCINE CIRCOVIRUS TYPE (PCV2) Ở ðÀN LỢN NUÔI TẠI MỘT SỐ TỈNH MIỀN BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã Số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS HUỲNH THỊ MỸ LỆ HÀ NỘI - 2012 HÀ NỘI - 2012 LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tôi, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc hồn thành luận văn cám ơn thơng tin trích dẫn luận văn ñẫ ñược rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2012 Tác giả luận văn Học viên ðinh ðức Cảnh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập thực đề tài, ngồi nỗ lực thân tơi cịn nhận nhiều quan tâm, giúp ñỡ tập thể cá nhân Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội, Viện ðào tạo sau ñại học, Ban chủ nhiệm khoa Thú y ñã tạo ñiều kiện cho thời gian học tập làm luận văn tốt nghiệp ðặc biệt, bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Huỳnh Thị Mỹ Lệ - giảng viên Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm, khoa Thú y, trường ðại học Nơng Nghiệp Hà Nội dành nhiều thời gian dẫn giúp đỡ tận tình để tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ tận tình thầy cô Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành cơng việc q trình thực tập Tơi ln biết ơn tới gia đình, bạn bè, người ln động viên, giúp đỡ tơi suốt trình học tập trường trình thực đề tài Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2012 Tác giả luận văn Học viên ðinh ðức Cảnh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN ADN : Axit Deoxyribose Nucleotide ELISA : Enzym Linked Immunosorbent Assay nPCR : Nested Polymerase Chain Reaction ORF : Open Reading Frame PBS : Phosphate – Buffered - Saline PCR : Polymerase Chain Reaction PCV : Porcine CircoVirus PCV1 : Porcine CircoVirus type PCV2 : Porcine CircoVirus type PCVAD : Porcine CircoVirus Associated Disease PDNS : Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome PK15 : Pig Kidney 15 PMWS : Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome PNP : Proliferating Necrotizing Pneumonia PRDC : Porcine Respiratory Disease Complex PRRS : Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome TAE buffer : Tris-Acetate Etilendiamin Tetraaxetic Axit buffer Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN LỜI CẢM ƠN ii CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN iii MỤC LỤC .iv DANH MỤC BẢNG………………………… …………….……………vii DANH MỤC HÌNH………………………………………… .…… ….viii PHẦN : MỞ ðẦU PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU I GIỚI THIỆU VỀ PCV2 VÀ BỆNH DO PCV2 GÂY RA .4 1.1 Một vài nét PCV2 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Hình thái, cấu trúc 1.1.3 Tính chất ni cấy 1.1.4 Sức ñề kháng 1.2 Bệnh PCV2 gây 1.2.1 Loài vật mắc bệnh 1.2.2 Phương thức truyền lây 1.2.3 Cơ chế sinh bệnh 1.3 Triệu chứng bệnh tích 10 1.3.1 Hội chứng gầy còm lợn sau cai sữa (PMWS) 11 1.3.2 Hội chứng viêm da viêm thận (PDNS) 13 1.3.3 Hội chứng rối loạn sinh sản lợn (PCV2 – Associated Reproductive Failure) 15 1.3.4 Hội chứng rối loạn hô hấp lợn (PCV2 – Associated Respiratory Disease) 15 1.3.5 Hội chứng viêm ruột lợn (PCV2 – Associated Enteritis) 16 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 1.3.6 Hiện tượng nhiễm PCV2 thể cận lân sàng (PCV2 subclinical infection) 17 1.4 Chẩn đốn 17 1.4.1 Chẩn ñoán lâm sàng 17 1.4.2 Chẩn đốn khẳng định 18 1.5 Phòng bệnh 20 1.5.1 Vệ sinh phòng bệnh 20 1.5.2 Phòng bệnh vacxin 21 1.6 ðiều trị 23 II TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC VỀ PCV2 VÀ BỆNH DO PCV2 GÂY RA 23 2.1 Tình hình nghiên cứu nước 23 2.2 Tình hình nghiên cứu giới 25 PHẦN 3: NỘI DUNG – NGUYÊN LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 3.1 Nội dung nghiên cứu 30 3.2 ðịa ñiểm nghiên cứu 30 3.3 Nguyên liệu 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu 31 3.4.1 Phương pháp tính tốn dung lượng mẫu 31 3.4.2 Phương pháp thu thập mẫu huyết thanh, mẫu bệnh phẩm 31 3.4.3 Phương pháp huyết học phát kháng thể kháng PCV2 31 3.4.4 Phương pháp nested PCR chẩn đốn PCV2 bệnh phẩm 35 3.4.5 Phương pháp phân lập PCV2 môi trường tế bào PK15 37 3.4.6 Phương pháp miễn dịch huỳnh quang xác định PCV2 mơi trường tế bào 39 3.4.7 Phương pháp xử lý số liệu 40 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 4.1 Kết xác ñịnh tỷ lệ lưu hành huyết kháng PCV2 ñàn lợn nuôi số tỉnh miền Bắc Việt Nam 41 4.1.1 Kết xác ñịnh tỷ lệ lưu hành kháng thể kháng PCV2 đàn lợn ni địa phương 43 4.1.2 Kết xác ñịnh tỷ lệ lưu hành kháng thể kháng PCV2 đàn lợn có quy mơ khác 46 4.1.3 Kết xác ñịnh tỷ lệ lưu hành kháng thể kháng PCV2 ñàn lợn thuộc lứa tuổi 48 4.1.4 Kết xác ñịnh tỷ lệ lưu hành kháng thể kháng PCV2 đàn lợn có khơng có triệu chứng bệnh liên quan đến PCV2 51 4.2 Kết phân lập PCV2 đàn lợn ni số tỉnh miền Bắc Việt Nam 54 4.3 Kết chẩn đốn, xác định có mặt PCV2 đàn lợn ni số tỉnh miền Bắc Việt Nam 56 4.3.1 Kết xác ñịnh có mặt PCV2 mẫu bệnh phẩm 56 PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 61 4.1 Kết luận 61 4.2 ðề nghị 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Cấu trúc PCV2 Hình 2.2 Lợn mắc chứng gày còm 12 Hình 2.3 Hạch bẹn nơng sưng, xuất huyết 12 Hình 2.4 Viêm dính màng phổi với thành lồng ngực 12 Hình 2.5 Hạch màng treo ruột bị sưng, xuất huyết 12 Hình 2.6 Thận bị sưng, xuất huyết có điểm hoại tử 13 Hình 2.7 Phổi bị viêm mức ñộ khác 13 Hình 2.8 Lợn bị viêm da 14 Hình 2.9 Lợn mắc chứng gày còm bị viêm da 15 Hình 2.10 Lợn có triệu chứng rối loạn hơ hấp 16 Hình 2.11 Lợn bị gày còm, tiêu chảy 17 Hình 4.4 Máy đọc ELISA xác ñịnh kháng thể kháng PCV2 53 Hình 4.5 Phản ứng ELISA xác ñịnh kháng thể kháng PCV2 54 Hình 4.6 Kết nested PCR mẫu ADN dương chuẩn mẫu bệnh phẩm 56 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bảng so sánh khung ñọc mở PCV1 PCV2 .7 Bảng 2.2 Những nghiên cứu PCV2 giới 28 Bảng 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 32 Bảng 3.2 Trình tự cặp mồi dùng chẩn đốn xác định genotype PCV2 35 Bảng 3.3 Chu trình nhiệt phản ứng PCR chẩn đốn định type PCV2 37 Bảng 4.1 Tổng hợp tình hình thu thập mẫu huyết xác ñịnh kháng thể kháng PCV2 41 Bảng 4.2 Tổng hợp tình hình thu thập mẫu huyết xác định 42 Bảng 4.3 Tổng hợp tình hình thu thập mẫu huyết xác ñịnh 42 Bảng 4.4 Tổng hợp tình hình thu thập mẫu huyết xác định 42 Bảng 4.5 Tổng hợp tình hình thu thập mẫu huyết xác ñịnh 43 Bảng 4.6 Kết kiểm tra kháng thể kháng PCV2 ñàn lợn nuôi ñịa 44 Bảng 4.7 Kết kiểm tra kháng thể kháng PCV2 ñàn lợn có quy mơ khác 46 Bảng 4.8 Kết kiểm tra kháng thể kháng PCV2 lứa tuổi lợn 48 Bảng 4.9 Kết kiểm tra kháng thể kháng PCV2 đàn có khơng 51 Bảng 4.10 Kết phân lập PCV2 55 Bảng 4.11 Kết nested PCR xác định có mặt PCV2 mẫu 57 Bảng 4.12 So sánh tỷ lệ dương tính PCR nhóm lợn khỏe mạnh nhóm lợn có triệu chứng bệnh 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii PHẦN MỞ ðẦU ðối với ngành công nghiệp chăn nuôi lợn, Porcine circovirus type (PCV2) nguyên nhân khởi phát gây hội chứng liên quan tới PCV2 (Porcine circovirus type 2-associated disease, PCVAD) làm thiệt hại lớn kinh tế, đặc biệt chăn ni theo quy mơ cơng nghiệp với mật độ chăn ni dày, mơi trường khơng kiểm sốt tốt biện pháp quản lý phòng bệnh chưa hợp lý Nghiên cứu mẫu bệnh phẩm ñược thu thập từ 1970 có mặt PCV2 lưu hành ñàn lợn số nước Tuy nhiên, hội chứng bệnh PCV2 gây ñược xác ñịnh vào năm 90 kỷ XX PCV2 có liên quan đến Hội chứng gầy cịm lợn sau cai sữa (postweaning multisystemic wasting syndrome – PMWS); Hội chứng viêm da viêm thận (porcine dermatitis and nephropathy syndrome – PDNS); Hội chứng viêm đường hơ hấp (porcine respiratory diseases complex) Hội chứng rối loạn sinh sản lợn (porcine reproductive disorders); gây tác ñộng lớn tới sức sản xuất ñàn lợn Trong số bệnh circovirus gây ra, PMWS ñược coi nguyên nhân gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi lợn; danh từ Hội chứng 30kg (The 30kg syndrome) đơi dùng để bệnh lợn bệnh ñạt khối lượng khoảng 30kg lợn bình thường lứa tuổi đạt 100kg Thiệt hại kinh tế PCV2 gây ước tính khoảng 600 triệu Euro/năm ñối với khối EU (Segalés cộng sự, 2005) Tại Mỹ, người ta tính tốn cho biết PCVAD gây thiệt hại kinh tế trung bình - la/lợn, chí có đàn lên ñến 20 ñô la/lợn (Gillespie cộng sự, 2009) PCV2 ñược coi virus gây bệnh quan trọng ngành chăn nuôi (Opriessnig cộng sự, 2007) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… Kết áp dụng phản ứng nested PCR mẫu bệnh phẩm gồm huyết mẫu phủ tạng lợn có biểu triệu chứng hội chứng PCVAD ñược minh họa hình 4.6.B trình bày bảng 4.11 Bảng 4.11 Kết nested PCR xác định có mặt PCV2 mẫu thu thập ñược từ ñịa phương TT ðịa ñiểm Hà Nội Hòa Bình Bắc Giang Hải Dương Tổng hợp Huyết Số mẫu Dương tính kiểm tra (Tỷ lệ %) 129 (3,10) 43 102 (42,16) 10 123 (8,13) 26 99 (26,26) 83 453 (18,32) Phủ tạng Số mẫu Dương tính kiểm tra (Tỷ lệ %) 14 40 (35,00) 25 (24,00) 25 35 (71,43) 21 30 (70,00) 65 130 (50,00) So sánh với kết dương tính kháng thể kiểm tra huyết phản ứng ELISA (70,57%) tỷ lệ phát PCV2 huyết kỹ thuật nested PCR (18,32%) thấp ñáng kể với P