II. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC VỀ PC
2.2. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
Hiện nay, PCV2 ựược ghi nhận ở rất nhiều nước trên thế giới. Các kết quả nghiên cứu ựã xác ựịnh ựược sự lưu hành, phân lập cũng như ựánh giá ựược ựặc tắnh di truyền của PCV2. Một số nghiên cứu có thể ựược thống kê như sau:
Nhật Bản: Shibahara T và cộng sự, năm 2000 ựã chứng minh rằng sự suy giảm tế bào bạch huyết với cơ chế apoptotic tế bào lympho B là do PCV2. Họ cho rằng một số cơ quan dung giải tế bào là do cơ chế này. Như vậy, PCV2 kắch thắch sự phát triển hội chứng gầy mòn trên lợn con sau cai sữa (PMWS) bằng cơ chế gây suy giảm hệ thống miễn dịch.
Thái Lan: Những trường hợp ựầu tiên của PMWS ựược mô tả ở Thái Lan vào năm 1998 nhưng có nghiên cứu chỉ ra ựã phát hiện PMWS trên lợn từ năm 1993. Dựa vào phương pháp PCR khảo sát sơ bộ tỷ lệ nhiễm PCV2 ở Thái Lan là 10%. Phân loại các chủng PCV2 dựa trên nucleotide 262-267 của các trình tự ORF2 phát hiện tại Thái Lan PCV2 ựang tồn tại một subtype mới là PCV2e. Trong ựó dường như hai subtype PCV2b và PCV2e (PCV2b chiếm ưu thế) ựang tồn tại trong ựàn lợn của Thái Lan.
Trung Quốc: Từ tháng 5-2003 ựến tháng 8-2005 Zong Z.Y. và cộng sự ựã tiến hành thu thập ngẫu nhiên 1250 mẫu huyết thanh và các mẫu mô lợn nghi nhiễm PCV2 bao gồm: lách, gan, hạch bạch huyết từ 6 quận huyện ở Hàng Châu, tỉnh Chiết Giang. Sử dụng phương pháp ELISA ựã phát hiện thấy 40% mẫu huyết thanh dương tắnh với PCV2. đồng thời, bằng phương pháp PCR trên các mẫu mô cho thấy tại Hàng Châu ựang lưu hành ngoài chủng PCV2 Trung Quốc còn lưu hành rộng rãi các chủng PCV2 khác trên thế giới như: Hà Lan, Canada, Mỹ, đức và Vương Quốc Anh.
Jun L. cùng một nhóm tác giả năm 2010 ựã gây nhiễm trên 48 chuột chủng Côn Minh cho thấy virus nhân lên trong chuột, chuột chết sau 7, 14, 28 và
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 26
42 ngày gây nhiễm tương ứng. Bằng phương pháp PCR tìm thấy kháng thể trong huyết thanh chuột gây nhiễm, virus PCV2 trong mô bạch huyết chuột. Tổn thương vi thể do PCV2 tập trung và gây suy giảm chức năng các hạch bạch huyết, thỉnh thoảng thấy hoại tử tế bào lympho, vỏ não và hành tủy ở những con chuột ựược gây nhiễm.
Hàn Quốc: Theo Kwang S.L. năm 2009 phương pháp nested-PCR
(nPCR) nhạy hơn phương pháp PCR thông thường gấp 104. nPCR ngoài giúp phân biệt 2 loại virus PCV1 và PCV2 còn giúp phân biệt trong trường hợp nhiễm kép khác.
Từ năm 2008, Hàn Quốc bắt ựầu sử dụng vacxin phòng circovirus. đến nay, kết quả cho thấy ựã giảm về số lợn nái phải loại bỏ cũng như lượng kháng sinh phải dùng. Ước tắnh giúp tăng khoảng 518 triệu USD hàng năm cho tổng số lợn ở các trang trại của Hàn Quốc.
Hoa Kỳ: Theo tiến sĩ Thomas G tại Mỹ việc tiêm phòng vacxin giảm tỷ lệ tử vong của lợn từ 9% xuống 2,4%, giúp tăng chất lượng thịt và số lượng lợn ựạt tiêu chuẩn cao cung cấp cho thị trường, giảm việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi lợn.
Pallares F.J. và cộng sự năm 2002 phân tắch hồi cứu các trường hợp PMWS tại Mỹ cho biết chỉ 1,9% nhiễm PCV2 trong tổng số các ca khảo sát ở lợn còi cọc sau cai sữa. Các trường hợp khác phát hiện có 35,5% PCV2 nhiễm kèm
Mycoplasma hyopneumoniae, 51,9% trường hợp PCV2 nhiễm kèm PRRSV. Khi tiến hành kiểm tra lợn 1-2 ngày tuổi tại 4 trại miền Trung- Tây Hoa Kỳ cho thấy lợn chỉ nhiễm PCV loại 2. PCV2 nhiễm hầu hết trong các mô bào nhưng tập trung nhiều nhất trong gan và hệ thống thần kinh trung ương. Não và tủy nhiễm nhiều hơn mô thần kinh khác.
Mexico: Từ năm 1972-2000, một nghiên cứu tại Mexico khi các tác giả thu thập 659 mẫu huyết thanh, sử dụng kỹ thuật miễn dịch peroxidase trên tế bào một lớp (IPMA) ựã phát hiện kháng thể PCV2 trong 59% (387/659) số mẫu.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 27
Trong ựó 27% (24/90) mẫu trong giai ựoạn 1972-1979, 44% (74/169) mẫu trong giai ựoạn 1980-1989 và 72% (289/400) mẫu trong giai ựoạn 1990-2000. Bằng chứng này chỉ ra rằng PCV2 có từ trước khi người ta phát hiện ra virus tại Mexico.
Phân tắch tắch trình tự PCV2 từ các vùng khác nhau, kết quả cho thấy tại Mexico tồn tại 2 subgenotypes a và b, các virus này tương ựồng 89-99% .
Ireland: Allan G.M. và cộng sự ựã phát hiện ra PCV2 từ mẫu phân từ các trại lợn ở Bắc Ireland tháng 8 năm 2005. Bằng phương pháp PCR cho thấy ở ựảo Ireland lưu hành ắt nhất hai nhóm PCV2. Không thấy xuất hiện mối quan hệ giữa nhiễm trùng hai nhóm PCV2 trong tiến triển bệnh PMWS.
Canada: John C.S.H. năm 1998 ựã xác ựịnh dịch tễ học và triệu chứng lâm sàng của lợn mắc PMWS: Ở lợn sau cai sữa tỷ lệ tử vong ựạt mức cao nhất vào tháng 9 của dịch (7,67%), sau ựó trở lại 16 tháng sau với tỷ lệ 2,1% -2,5%. Các nguyên nhân gây tử vong nhiều nhất là còi cọc (giảm cân, hốc hác), vàng da (bệnh gan) và khó thở (bệnh ựường hô hấp).
Bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào thận lợn PK- 15 nhiễm PCV, trên tế bào PK-15 nhiễm PCV1 và PCV2. Kết quả thu ựược sau 3 năm nghiên cứu là tỷ lệ huyết thanh dương tắnh với PCV2 nhiều hơn PCV1, PCV2 là loại PCV lưu hành chắnh và lưu hành ắt nhất trong 10 ựàn lợn tại Canada trước khi hội chứng PMWS ựược báo cáo.
Thụy điển: Năm 2008 Per Wallgren ựã tiến hành nghiên cứu 40 lợn trung bình 37,5 ngày tuổi, theo dõi trong 55 ngày; trong huyết thanh lợn bệnh không có kháng thể ựủ ựể chống lại mầm bệnh. Số lượng PCV2 lớn hơn trong lợn mắc bệnh nặng và trong giai ựoạn ựầu so với lợn khỏe mạnh. Ở 18/34 lợn
không có dấu hiệu lâm sàng PMWS có 107 ADN PCV2/ml huyết thanh, có thể
chúng mới bắt ựầu sinh miễn dịch chống lại mầm bệnh.
Ngoài ra còn rất nhiều các công trình nghiên cứu của các nước khác thuộc Châu Á (Malaysia, đài Loan, PhilipinẦ), Châu Âu (Áo, Bỉ, PhápẦ), Nam Mỹ (Achentina, BrazilẦ).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 28
Theo thống kê của Patterson và Opiessnig, tắnh ựến năm 2010, các nước trên thế giới ựã có công trình nghiên cứu về PCV2 bằng kỹ thuật huyết thanh học hoặc sinh học phân tử như sau (bảng 2.2).
Bảng 2.2. Những nghiên cứu về PCV2 trên thế giới
Châu lục Nước Năm
công bố Châu lục Nước
Năm công bố
Trung Quốc 2005 Áo 2002
Indonesia 2008 Bỉ 2000
Nhật 1999 Bulgaria 2004
Hàn Quốc 2000 Croatia 2004
Philippine 2004 Cộng hòa Sec 2002
đài loan 2002 đan Mạch 1999
Châu Á
Thai Lan 1999 Pháp 1997
Canada 1998 đức 1999
Costa Rica 2002 Hy-Lap 2001
Cuba 2010 Hungary 2000
Mexico 2001 Ireland 1998
Bắc Mỹ
Mỹ 1996 Hà-Lan 2000
Úc 2006 Ba Lan 2009
Châu đại dương
New Zealand 2003 Rumani 2006
Brazil 2003 Scotland 2000
Venezuela 2005 Slovakia 2009
Argentina 2000 Tây Ban Nha 1997
Thụy điển 2002
Thụy Sĩ 2001
Nam Mỹ
Châu Âu
Anh 2001
Căn cứ vào kết quả giải trình tự gen, người ta chia PCV2 thành 5 genotype, ký hiệu từ PCV2a-2e; trong ựó PCV2a và PCV2b là hai genotype lưu hành phổ biến nhất, ựã ựược ghi nhận ở nhiều nơi trên thế giới; PCV2c ựược phát hiện ở đan Mạch (Dupont và cộng sự, 2008), PCV2d và PCV2e mới ựược thông báo ở Trung Quốc (Wang và cộng sự, 2009; Guo và cộng sự, 2010).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 29
Sự phân bố của PCV2 có sự khác nhau giữ các vùng ựịa lý:
- Châu Á: lần ựầu tiên một vụ dịch gần giống PMWS ựược mô tả tại đài Loan năm 1995; từ ựó ựến nay nhiều vụ dịch PMWS ựã ựược ghi nhận ở Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bản, Philippine, đài Loan và Thái Lan (trắch theo Hinton, 2003). PCV2 và PCVAD ựã ựược xác ựịnh lưu hành trong ựàn: ở Nhật Bản năm 1997 (Takahagi và cộng sự, 2008), ở Hàn Quốc năm 1999 (An và cộng sự, 2007), ở Thái Lan năm 1998 (Jantafong và cộng sự, 2011), Malaysia năm 2004 (Jaganathan và cộng sự, 2011)...
Wang và cộng sự (2009) tiến hành giải trình tự 49 chủng phân lập từ một số tỉnh của Trung Quốc, và ựã xác ựịnh thuộc genotype PCV2a, PCV2b, PCV2d và PCV2e; trong khi ựó tại Hàn Quốc và Nhật Bản chỉ phát hiện ựược PCV2a và PCV2b (Chae và Choi, 2010; Takahagi và cộng sự, 2008), tại Thái Lan phát hiện ựược PCV2b và PCV2e (Jantafong và cộng sự, 2011).
- Châu Âu: hầu hết các nước xác ựịnh sự có mặt của PCV2b, là nguyên nhân gây thiệt hại kinh tế do PCVAD; ngoài ra, Allan và cộng sự (2007) còn phát hiện ựược PCV2a ở ựàn lợn nuôi tại Ireland.
- Bắc Mỹ: lần ựầu tiên PCV2b ựược xác nhận ở Canada vào năm 2005. Các nghiên cứu sau này ựã cho thấy sự lưu hành của PCV2a và PCV2b trong khu vực (Olvera và cộng sự, 2007; Gagnon và cộng sự, 2007).
- Châu đại Dương: hiện tại chỉ có hai công bố của Muhling và cộng sự (2006) về sự lưu hành PCV2 tại Úc; nghiên cứu của Neumann và cộng sự (2007) về PCV2 phân lập ựược tại New Zealand. Tuy nhiên, cả hai nghiên cứu ựều chưa chỉ ra genotype lưu hành trong khu vực.
- Nam Mỹ: không có nhiều nghiên cứu về PCV2, ựã xác ựịnh genotype phổ biến là PCV2b (Chiarelli Neto và cộng sự, 2009); cần có các nghiên cứu tiếp theo ựể khẳng ựịnh sự có mặt của genotype PCV1/2a (Gagnon và cộng sự, 2010).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 30
PHẦN 3
NỘI DUNG Ờ NGUYÊN LIỆU Ờ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU