Nghiên cứu bào chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học theo phương pháp cố định gel bằng ion

DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Độ tan của acyclovir trong các môi trường pH khác nhau 2 Bảng 3.3 Độ hấp thụ mật độ quang của dung dịch acyclovir ở các nồng độ khác nhau 25 Bảng 3.4 Đánh giá

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

VŨ THỊ THÚY

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VI CẦU ACYCLOVIR KẾT DÍNH SINH HỌC THEO PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH GEL

BẰNG ION

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2013

BẰNG ION

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn:TS Vũ Thị Thu Giang

Nơi thực hiện: Bộ môn bào chế

HÀ NỘI – 2013

Lời đầu tiên tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới:

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo, cán bộ, nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy dỗ và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập tại trường

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè – những người

đã luôn ở bên tôi, chia sẻ động viên tôi trong suốt thời gian vừa qua

Hà Nội, ngày 22 tháng 5 năm 2013

Sinh viên

Vũ Thị Thúy

MỤC LỤC

DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮVIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN……… 2

1.1 Acyclovir 2

1.1.1 Công thức hóa học 2

1.1.3 Dược động học 2

1.1.4 Dược lý và cơ chế tác dụng 3

1.1.5 Chỉ định 3

1.1.6 Một số dạng bào chế chứa acyclovir hiện có trên thị trường 4

1.2 Hệ kết dính sinh học 4

1.2.1 Khái niệm 4

1.2.3 Polyme kết dính sinh học 7

1.2.4 Một số phương pháp đánh giá khả năng kết dính sinh học áp dụng đối với vi cầu 9

1.2.4.1 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vitro 9

1.2.4.2 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vivo 13

1.3 Một số nghiên cứu bào chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học 13

1.3.1 Các nghiên cứu nước ngoài 13

1.3.2 Các nghiên cứu trong nước 15

Chương 2 NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ , NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị 17

2.1.1 Nguyên vật liệu 17

2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 17

2.2 Phương pháp nghiên cứu 18

2.2.1 Phương pháp xây dựng đường chuẩn định lượng acyclovir 18

2.2.2 Phương pháp bào chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học 18

2.2.3 Phương pháp đánh giá hiệu suất tạo vi cầu và tỷ lệ vi cầu hóa 19

2.2.4 Phương pháp đánh giá chất lượng vi cầu 20

Chương 3 KẾT QUẢ, THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN……… 25

3.1 Xây dựng đường chuẩn định lượng acyclovir trong môi trường dung dịch acid hydroclorid 0,1N 25

3.2 Nghiên cứu bào chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học 26

3.2.1 Nghiên cứu nâng hàm lượng dược chất trong vi cầu 28

3.2.2 Nghiên cứu cải thiện khả năng kết dính sinh học của vi cầu 32

3.2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng của loại tá dược kiềm 32

3.2.2.2 Nghiên cứu chọn tỷ lệ magnesi carbonat thích hợp 33

3.2.3 Nghiên cứu cải thiện khả năng kéo dài giải phóng dược chất của vi cầu 39

3.2.3.1 Khảo sát ảnh hưởng của chitosan và thời gian ngâm vi cầu 39

3.2.3.2 Nghiên cứu bào chế vi cầu đa lớp 53

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 57

TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮVIẾT TẮT

BP DượcđiểnAnh(Bristish Pharmacopoeia) USP Dược điển Mỹ (United States Pharmacopeia)

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Độ tan của acyclovir trong các môi trường pH khác nhau 2

Bảng 3.3 Độ hấp thụ mật độ quang của dung dịch acyclovir ở các nồng độ

khác nhau

25

Bảng 3.4 Đánh giá ảnh hưởng của tá dược tới kết quả định lượng bằng

Bảng 3.5 Một số chỉ tiêu chất lượng của mẫu vi cầu bào chế 27 Bảng 3.6 Thành phần công thức của các mẫu vi cầu có nồng độ ayclovir

khác nhau

28

Bảng 3.7 Hiệu suất tạo vi cầu, tỷ lệ vi cầu hóa và một số đặc tính của các

mẫu vi cầu có nồng độ ayclovir khác nhau 29

Bảng 3.8 Khả năng trương nở của các mẫu vi cầu có nồng độ ayclovir

Bảng 3.10 Khả năng kết dính trên niêm mạc dạ dày và ruột non của các

mẫu vi cầu có nồng độ ayclovir khác nhau 31

Bảng 3.11 Tính chất và kích thước của các mẫu vi cầu có tỷ lệ magnesi

carbonat khác nhau

33

Bảng 3.12 Hiệu suất tạo vi cầu, tỷ lệ vi cầu hóa và một số đặc tính của các

mẫu vi cầu có tỷ lệ magnesi carbonat khác nhau 34 Bảng 3.13 Khả năng trương nở của các mẫu vi cầu có tỷ lệ magnesi

carbonat khác nhau

35

Bảng 3.14 Phần trăm acyclovir giải phóng từ các mẫu vi cầu có tỷ lệ

magnesi carbonat khác nhau

37

Bảng 3.15 Khả năng kết dính trên niêm mạc dạ dày và ruột non của các

mẫu vi cầu có tỷ lệ magnesi carbonat khác nhau 38

Bảng 3.16 Thành phần môi trường nhỏ giọt và thời gian ngâm 40

Bảng 3.17 Tính chất và kích thước của các mẫu vi cầu có môi trường nhỏ

Bảng 3.18 Hiệu suất tạo vi cầu, tỷ lệ vi cầu hóa và một số đặc tính của các

mẫu vi cầu có môi trường nhỏ giọt và thời gian ngâm khác nhau 43

Bảng 3.19 Khả năng trương nở của các mẫu vi cầu được ngâm trong dung

Bảng 3.20 Khả năng trương nở của các mẫu vi cầu có thời gian ngâm khác nhau 47 Bảng 3.21 Phần trăm acyclovir giải phóng từ mẫu vi cầu có môi trường nhỏ

Bảng 3.22 Khả năng kết dính trên niêm mạc dạ dày và ruột non của các mẫu vi

cầu có môi trường nhỏ giọt và thời gian ngâm khác nhau

51

Bảng 3.23 Hiệu suất tạo vi cầu, tỷ lệ vi cầu hóa và một số chỉ tiêu chất

lượng của vi cầu đa lớp và đơn lớp

Bảng 3.26 Khả năng kết dính sinh học của các mẫu vi cầu đa lớp và đơn

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ

Hình 2.3 Thiết bị đánh giá khả năng kết dính sinh học được cải tiến từ cân

Hình 3.4 Đường chuẩn của dung dịch acyclovir trong môi trường acid

hydroclorid 0,1N

25

Hình 3.5 Đồ thị thể hiện khả năng trương nở của các mẫu vi cầu có tỷ lệ

magnesi carbonat khác nhau

36

Hình 3.7 Đồ thị thể hiện khả năng trương nở của các mẫu vi cầu được ngâm

Hình 3.8 Đồ thị thể hiện khả năng trương nở của các mẫu vi cầu có thời gian

ngâm khác nhau

47

Hình 3.9 Đồ thị thể hiện khả năng giải phóng dược chất từ các mẫu có nồng

Hình 3.10 Đồ thị thể hiện khả năng giải phóng dược chất từ các mẫu vi cầu

Hình 3.11 Đồ thị thể hiện khả năng giải phóng dược chấttừ các mẫu vi cầu

đơn lớp và đa lớp

55

ĐẶT VẤN ĐỀ

Ngày nay, các dạng bào chế kết dính sinh học đã chứng minh được khả năng cải thiện hấp thu ưu làm tăng sinh khả dụng đường uống của nhiều thuốc, đặc biệt là những thuốc có đích tác dụng tại đường tiêu hóa như nhóm thuốc ức chế bơm proton hoặc những thuốc có tính thấm kém, cửa sổ hấp thu hẹp, chỉ được hấp thu ở phần đầu đường tiêu hóa như acyclovir

Acyclovir (ACV) là thuốc kháng virus Herpes đang được sử dụng rất rộng rãi

Tuy nhiên, thuốc có tính thấm kém, SKD đường uống thấp (15-30%), chỉ được hấp thu ở phần đầu đường tiêu hóa và thời gian bán thải ngắn (t1/2 = 1,5-2 giờ) [1] nên nếu dùng dạng viên qui ước hiệu quả điều trị thường không cao, người bệnh phải uống nhiều lần trong ngày (5 – 6 lần/ngày).Vì vậy, việc kéo dài thời gian lưu giữ thuốc ở vùng hấp thu tối ưu trên đường tiêu hóa là một trong những biện pháp cải thiện hấp thu và tăng SKD đường uống của ACV

Tại trường Đại học Dược Hà Nội đã có một vài nghiên cứu về hệ KDSH của ACV như: viên nén đặt phụ khoa [7], vi cầu [5],[6] Trong đó, dạng vi cầu mới bước đầu được bào chế sử dụng 2 phương pháp: bốc hơi dung môi hữu cơ và cố định gel bằng ion Phương pháp cố định gel bằng ion (ionotropic gelation) thể hiện điểm thuận lợi hơn cả: tiến hành đơn giản, không phải sử dụng dung môi hữu cơ, chi phí thấp

Năm 2012, tác giả Phạm Thị Thảo đã tiến hành nghiên cứu bào chế vi cầu ACV KDSH sử dụng phương pháp cố định gel bằng ion với polyme natri alginat, tuy nhiên vi cầu bào chế được có hàm lượng dược chất chưa cao, khả năng KDSH trên niêm mạc dạ dày còn thấp và chưa khảo sát khả năng KSGP trong môi trường

acid Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiếp tục thực hiện đề tài: “Nghiên cứu bào

chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học theo phương pháp cố định gel bằng ion”

với mục tiêu: Xây dựng được công thức bào chế vi cầu acyclovir sử dụng phương

pháp cố định gel bằng ion có khả năng kéo dài giải phóng trong môi trường acid và cải thiện khả năng kết dính sinh học trên niêm mạc đường tiêu hóa

Chương I TỔNG QUAN

1.1 Acyclovir

Công thức phân tử: C18H11N5O3

Khối lượng phân tử: 225,2

Tên khoa học: 2-amino- 9[(2-hydroxy ethoxy)-methyl]- 1,9-dihydro-6H- purin-6-on [3],[23]

Acyclovir là bột kết tinh màu trắng, ít tan trong nước (1,3 mg/ml ở 25o

C [3]), rất khó tan trong alcol, thực tế không tan trong dung môi hữu cơ, tan trong dung dịch kiềm và acid loãng [3],[23]

 Nhiệt độ nóng chảy: 230oC, sau đó bị phân hủy

 Trong môi trường kiềm ổn định hơn trong môi trường acid

Theo hệ thống phân loại sinh dược học (BCS) acyclovir thuộc nhóm 3: là dược chất

- Phân bố:

ACV phân bố rộng và các cơ quan và các dịch cơ thể như: não, thận, phổi, ruột, gan, lách, cơ, tử cung, niêm mạc, dịch âm đạo, nước mắt, thủy dịch, tinh dịch, dịch não tủy… Liên kết với protein thấp (9-33%) [1],[23]

- Chuyển hóa và thải trừ:

+ Một lượng nhỏ thuốc được chuyển hóa qua gan còn phần lớn (30-90% liều) được đào thải qua thận dưới dạng không biến đổi [1],[23]

+ Thời gian bán thải: Người lớn khoảng 3 giờ, trẻ em là 2-3 giờ, trẻ sơ sinh là 4 giờ,

ở bệnh nhân suy thận mạn: 19,5 giờ [1],[23]

Acyclovir là một chất tương tự nucleosid, có tác dụng chọn lọc trên tế bào nhiễm virus Herpes Tác dụng của ACV mạnh nhất trên virus Herpes simplex typ 1 (HSV-1) và kém hơn ở Herpes simplex typ 2 (HSV-2) và virus Varicella Zoster (VZV) [1],[23]

Cơ chế tác dụng:

Khi vào cơ thể ACV phải được phosphoryl hóa thành dạng có hoạt tính là acylovir triphosphat Chặng đầu: ACV được chuyển thành ACV monophosphat nhờ enzym của virus là thymidinkinase, sau đó chuyển thành dẫn xuất diphosphat

và triphosphat do các enzym khác của tế bào vật chủ Acyclovir triphosphat ức chế tổng hợp DNA của virus và sự nhân lên của virus mà không ảnh hưởng gì đến chuyển hóa của tế bào bình thường [1],[23]

1.1.5 Chỉ định

ACV được chỉ định điều trị trong các trường hợp sau [1],[2],[23]:

- Ðiều trị khởi đầu và dự phòng tái nhiễm virus Herpes simplex typ 1 và 2 ở da,

niêm mạc, thần kinh và sinh dục, viêm não do HSV

- Ðiều trị nhiễm Herpes zoster (bệnh zona) cấp tính ở mắt, phổi, thần kinh

- Ðiều trị nhiễm khởi đầu và tái phát nhiễm Herpes sinh dục

- Dự phòng và điều trị nhiễm virus ở người suy giảm miễn dịch, cấy ghép cơ quan, bệnh thủy đậu

- Viên nén: Apo – Acyclovir, Cyclovir, Herpevir, Herpex, Medovir, Vacrax

200mg, Acyclovir Stada, Zovirax 200mg, 400mg, 800mg

- Lọ bột pha tiêm: Zovirax 200mg/5ml

- Thuốc mỡ dùng ngoài: Zovirax 5%, thuốc mỡ tra mắt Zovirax 3% w/w

- Dịch truyền: Zovirax tiêm tĩnh mạch

- Kem bôi ngoài da: Acyclovir Stada 5%

- Viên phân tán: Zovirax 200mg, 400mg, 800mg

Vẫn chưa có dạng bào chế kết dính sinh học của acyclovir trên thị trường

1.2 Hệ kết dính sinh học

Kết dính sinh học là trạng thái gồm hai bề mặt được gắn kết với nhau trong 1 thời gian dài nhờ lực liên kết bề mặt, trong đó có ít nhất một bề mặt có nguồn gốc sinh học [19] hoặc là sự gắn kết của một polyme (tổng hợp hoặc tự nhiên) với một lớp mô sinh học nhằm kéo dài thời gian lưu giữ giữa chúng [16] Các bề mặt sinh học này có thể là lớp tế bào biểu mô, lớp màng nhầy hoặc niêm mạc

Vi cầu kết dính sinh học có nhiều ưu điểm: làm tăng khả năng hấp thu và tăng sinh khả dụng của thuốc do có diện tích bề mặt lớn, thời gian tiếp xúc với niêm mạc nhiều hơn, hệ vận chuyển thuốc đến vị trí hấp thu tối ưu và có khả năng giải phóng thuốc kéo dài và ổn định [21],[30]

1.2.2 Cơ chế và quá trình kết dính sinh học

Quá trình kết dính có thể được chia thành 2 giai đoạn:

- G iai đoạn tiếp xúc: polyme thấm ướt, trương nở để tiếp xúc với biểu mô sinh

có thể giải thích được một phần các tương tác tạo nên sự KDSH [10] Nội dung của các lý thuyết về KDSH được trình bày như sau:

- Thuyết thấm ướt:

Đây là lý thuyết được biết đến đầu tiên, áp dụng tốt nhất cho các chất lỏng hoặc chất KDSH có độ nhớt thấp Theo đó, kết dính như một quá trình thấm, các tác nhân kết dính thấm vào bề mặt chất nền và hình thành liên kết Cơ chế thấm ướt dựa trên góc tiếp xúc và động học tạo ra sự kết dính [10]

Giai đoạn tiếp xúc (1) Giai đoạn hình thành liên kết (2)

Vị trí hình thành liên kết Dạng thuốc (3)

Lớp màng nhầy (4)

- Thuyết điện tử:

Theo thuyết này do sự vận chuyển điện tử xảy ra trên bề mặt tiếp xúc giữa polyme kết dính và lớp glycoprotein của lớp màng nhầy do sự khác biệt về cấu trúc điện tử của hai bề mặt Kết quả là tạo ra lớp điện tích kép giữa bề mặt tiếp xúc [10],[32]

- Thuyết hấp phụ:

Theo thuyết này sau khi hai bề mặt tiếp xúc nhau thì sự kết dính xảy ra do một lực hấp dẫn bề mặt giữa các nguyên tử của hai bề mặt Có hai loại liên kết hóa học tham gia vào việc hình thành liên kết: liên kết chính là các liên kết cộng hóa trị, liên kết thứ cấp là các liên kết tĩnh điện, lực valder waal, liên kết hydro, các tương tác kỵ nước [10],[32]

- Thuyết khuếch tán:

Chuỗi polyme sẽ thâm nhập đủ sâu vào lớp chất nhầy để hình thành liên kết, kết dính bán vĩnh viễn Sự thâm nhập này phụ thuộc vào hệ số khuếch tán và thời gian tiếp xúc Hệ số kết dính phụ thuộc vào khối lượng phân tử, mật độ liên kết chéo Cấu trúc càng tương đồng thì sự kết dính càng lớn Để liên kết có hiệu quả thì lớp thâm nhập này phải dày từ 0,2 – 0,5 µm.Quá trình này chịu ảnh hưởng của gradien nồng độ [10],[13]

- Thuyết bám dính:

Hiện tượng KDSH chủ yếu là do sự tương tác giữa các phân tử tương tự nhau

Để tách hai bề mặt sau khi kết dính cần một lực nhất định [32]

- Thuyết cơ học:

Sự kết dính được hình thành do sự khuếch tán các chất kết dính lỏng vào các vết nứt vi sinh học hiện diện trên bề mặt chất nền sinh học, do đó tạo thành một cấu trúc khóa tăng cường cho sự bám dính [10],[26]

1.2.3 Polyme kết dính sinh học

1.2.3.1 Yêu cầu đối với polyme kết dính sinh học

Một polyme lý tưởng cho sự KDSH cần có những đặc điểm sau: [34]

- Không độc hại và không hấp thu

- Không phân hủy trong thời gian bảo quản và trong quá trình sử dụng dạng bào chế

- Có các nhóm chức hóa học có khả năng tạo liên kết hydro (carboxylic, hydroxyl, amid, sulfat)

- Các chuỗi polyme có trọng lượng phân tử lớn, tính linh hoạt cao và mang điện tích bề mặt

- Sức căng bề mặt cho phép trải rộng bề mặt tiếp xúc với màng sinh học

- Chi phí thấp

1.2.3.2 Polyme kết dính sinh học và một số ứng dụng trong phương pháp cố định

gel bằng ion để tạo vi cầu

- Các polyme thế hệ 1

+ Polyme nhóm anion: Khả năng KDSH do nhóm carboxyl trong phân tử tạo liên kết hydro với nhóm hydroxyl trên chuỗi oligosaccarid của protein chất nhầy Các polyme anion kết dính hiệu quả hơn polyme cation và polyme không ion hóa Một

số polyme thường gặp như:

Alginat: là polysaccharid mạch thẳng, phân tử lượng trung bình khoảng 200.000 Dalton, được chiết từ tảo nâu, dễ kiếm và dẻ tiền Thành phần chính của alginat là acid alginic cấu tạo bởi các đơn vị acid α- D - gluronic và acid 1,4 – β- D- mannuronic [20],[43].Alginat được sử dụng trong phương pháp cố định gel bằng ion nhờ khả năng tạo gel không tan trong nước với các cation đa hóa trị (thường là ion Ca++), đây là phản ứng của thành phần oligogluronic với ion Ca++ tạo thành cấu trúc dạng hộp trứng [31],[33]

Carboxymethyl Cellulose: là sản phẩm methyl hóa của cellllose Phân tử có nhóm carboxylic và hydroxyl có thể tạo liên kết với các kim loại đa hóa trị bằng các tương

tác tĩnh điện tạo thành gel không tan trong nước nên được sử dụng tạo vi cầu bằng phương pháp cố định gel bằng ion Muối của sắt và nhôm thường được sử dụng để làm tác nhân liên kết chéo trong trường hợp này [31]

chức mang điện tích dương trong phân tử với acid sialic tích điện âm của

glycoprotein màng nhầy Chitosan là polyme điển hình thuộc nhóm này

Chitosan:

Là amino polysaccarid, sản phẩm deacetyl hóa một phần của chitin, mức độ

deacetyl hóa từ 2- 60%, khối lượng phân tử từ 50- 2000 kDa

Là một polyme mạch thẳng, là heterosarcharid chứa 2 phân tử : 1- 4 - 2 - acetamid -2 – deoxy – β – D - glucose và 2 – amino – 2 – deoxy – β – D - glucose được sắp

xếp một cách ngẫu nhiên

Có tính base yếu, pKa 6,2 - 7, độ tan phụ thuộc vào pH: tan dễ trong pH thấp và ít

tan ở pH cao, ít tan trong nước và tan dễ trong các acid hữu cơ

Có khả năng cải thiện hấp thu qua khe hở liên bào do nới lỏng liên kết giữa các tế bào nhờ tương tác tĩnh điện giữa nhóm amin mang điện tích dương của chitosan và

các protein bề mặt mang điện tích âm ở khe liên bào [42]

Thường được phối hợp với các polyme anion khác: natri alginat, gôm xanthan…do tương tác tĩnh điện giữa chúng tạo thành phức hợp không tan được sử dụng để tạo VC[31] Để làm tăng độ ổn định của phức hợp này các cation có thể được đưa vào (ion Ca++)

+Polyme kết dính sinh học không ion hóa:

Sự kết dính của các polyme thuộc nhóm này với chất nhầy không phụ thuộc vào

pH hay sự có mặt của các ion trong môi trường Nhìn chung kết dính kém hơn các polyme anion và cation [13] Các dẫn chất cellulose như: hydroxypropylmethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose…là những polyme được ứng dụng nhiều trong

dạng thuốc KDSH Khả năng KDSH do chứa các nhóm hydroxyl hình thành liên kết hydro với lớp chất nhầy

- Các polyme thế hệ thứ 2: ít nhạy cảm với sự luân chuyển của lớp màng nhầy hơn các polyme thế hệ trước do khả năng kết dính trực tiếp với các nhóm chức đặc hiệu

trên bề mặt tế bào “cytoadhension” hoặc lớp màng nhầy Ví dụ như: Lecithin,

alginate-polyethylene glycol acrylat, invasin, fimbrial, dẫn chất thiol chitosan và một số polyme thiol hóa [13]

1.2.4 Một số phương pháp đánh giá khả năng kết dính sinh học áp dụng đối với

vi cầu

Các hệ KDSH giữ vai trò quan trọng trong việc tăng SKD của thuốc thông qua việc tăng thời gian lưu giữ của thuốc tại vị trí hấp thu tối ưu Vì vậy, các phương pháp thử kết dính là một bước quan trọng để phát triển dạng bào chế này Có rất

nhiều phương pháp thử kết dính in vitro và in vivo đã được đưa ra để nghiên cứu

khả năng KDSH Một số phương pháp đánh giá khả năng KDSH được áp dụng đối với vi cầu được trình bày dưới đây:

1.2.4.1 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vitro

- Kỹ thuật sử dụng túi ruột chuột

Thiết kế mô hình thí nghiệm như sau [8],[15],[46]:

Tiến hành:

+ Một đoạn ruột của chuột được lấy ra, lộn mặt trong ra, bơm đầy nước muối sinh

lý vào trong, khâu 2 đầu thành túi

+ Chuẩn bị 1 ống nghiệm chứa 1 lượng xác định vi cầu trong dung dịch muối sinh

lý

+ Đặt túi ruột chuột vào ống nghiệm trên, lắc ống nghiệm với tần số xác định, trong thời gian xác định

+ Sau đó lấy túi ruột ra Xác định lượng vi cầu bám dính vào túi

+ Tỷ lệ % bám dính được tính theo công thức:

×100

No: Số lượng vi cầu ban đầu

N: Số lượng vi cầu còn lại trong ống nghiệm

- Phương pháp sử dụng cân đo vi lực

Thiết kế mô hình thí nghiệm như sau[8],[15]:

Thiết bị:

+ Thiết bị phân tích góc tiếp xúc động học Cahn, sử dụng mô hình DCA-322 Mô hình này bao gồm 1 cân đo vi lực, một máy tính Cahn DACS IBM tương thích Thiết bị này có độ nhạy lên tới 1×10-5

mN [14]

+ Thiết bị khác: cân phân tích cải tiến (hình 1.2)

Phương pháp này chỉ áp dụng cho những vi cầu có kích thước >300µm

Tiến hành:

+1 vi cầu được gắn cố định vào 1 sợi dây

+ Màng sinh học được đặt trong 1 buồng di động có pH và nhiệt độ đều được kiểm soát

+ Sau đó buồng được nâng lên cho đến khi tiếp xúc với vi cầu, sau thời gian tiếp xúc xác định (7 phút) buồng được hạ xuống về vị trí ban đầu

+ Quỹ đạo lực thu được nhờ trợ giúp của phần mềm máy tính sẽ xác định được lực kết dính

Khi sử dụng thiết bị là cân phân tích cải tiến được tiến hành như sau:

Hai miếng niêm mạc được gắn với 2 lam kính, một lam kính sẽ được cố định trên giá đỡ Phần giá đỡ này được đặt trong cốc thủy tinh chứa dung dịch đệm có

pH thích hợp và được duy trì nhiệt độ 37 ± 1oC, tuy nhiên dung dịch chỉ tiếp xúc với lớp niêm mạc để giữ cho nó ẩm để không làm ảnh hưởng tới kết quả Lam kính còn lại sẽ được gắn với đĩa cân của thiết bị thử Polyme kết dính được gắn vào một trong hai lớp niêm mạc Sau đó tác dụng một lực khoảng 1 - 2N để nén 2 lớp niêm mạc lại trong một khoảng thời gian thích hợp Sau khi ngừng tác dụng lực, đĩa cân bên kia sẽ được thêm dần 200 mg/ phút cho đến khi hai lớp niêm mạc tách ra [17],[32]

- Mô hình máng rửa trôi

Thiết kế mô hình thí nghiệm [8],[12],[15],[46]:

Môi trường: dung dịch đệm có pH thích hợp

Tiến hành:

+ Thường tiến hành với ruột non chuột Phần ruột được tách ra và cắt theo chiều dọc Sau đó được đặt trên các bán trụ đã được tráng bề mặt bằng nước muối sinh lý + Phân tán một số lượng chính xác vi cầu đã được hydrat hóa với một ít môi trường thử lên bề mặt niêm mạc, để trong thời gian nhất định (khoảng 15-20 phút) Toàn bộ

hệ thống được đặt trong một buồng có độ ẩm tương đối 90%

+ Tiếp đó, cho môi trường chảy qua hệ thống với tốc độ thích hợp gần nhu động đường tiêu hóa

+ Cuối cùng đếm số lượng các vi cầu còn lại trên bề mặt niêm mạc Khả năng bám dính được tính bằng tỷ lệ vi cầu còn lại trên niêm mạc ruột chuột so với số lượng vi cầu ban đầu

- Phương pháp sử dụng ống trụ quay tròn

Thiết kế mô hình thí nghiệm như sau [12]:

Thiết bị:Ống trụ quay tròn làm bằng thép không gỉ

- Thử nghiệm rửa trôi

Thiết kế mô hình thí nghiệm như sau [8] [32] [48]:

Thiết bị: máy thử độ rã viên nén tiêu chuẩn USP

Môi trường: dung dịch đệm có pH thích hợp

+ Phiến kính gắn niêm mạc được treo trên giá treo của máy thử độ rã, trong môi trường có pH thích hợp, duy trì nhiệt độ ở 37o

C

+ Cho thiết bị hoạt động Sau các khoảng thời gian nhất định, đếm số vi cầu còn dính trên niêm mạc Khả năng bám dính được tính bằng tỷ lệ vi cầu còn lại so với

số vi cầu ban đầu

1.2.4.2 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vivo

+ Cho chuột uống một lượng chính xác vi cầu bằng ống xông và chiêu với nước Sau khi uống một khoảng thời gian nhất định, gây chết chuột, phẫu thuật đường tiêu hóa, đếm số lượng vi cầu còn kết dính lại trên dạ dày và ruột non Khả năng KDSH của vi cầu được xác định dựa vào tỷ lệ vi cầu còn kết dính trên niêm mạc dạ dày và ruột non so với lượng vi cầu ban đầu [12][16]

+ Vi cầu cũng có thể được gắn đồng vị phóng xạ Sau đó cho chuột uống, gây chết chuột ở những thời gian khác nhau, phẫu thuật đường tiêu hóa và xác định lượng phóng xạ còn lại [15]

+ Phương pháp X- quang: đây là phương pháp khá đơn giản, vi cầu được gắn với

đồng vị phóng xạ mờ, sau đó tín hiệu được theo dõi bằng X- quang mà không ảnh hưởng tới nhu động đường tiêu hóa Các đồng vị này có thể là: Cr-51, Tc-99m, In-113m, hoặc I-123 [15]

+ Nhấp nháy đồ Gamma: hệ vận chuyển được gắn với nucleotid phát xạ gamma

Nhấp nháy đồ cho phép thấy rõ đường đi của thuốc trong cơ thể [15]

1.3 Một số nghiên cứu bào chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học

1.3.1 Các nghiên cứu nước ngoài

Shadab M.D và cộng sự [39] đã nghiên cứu bào chế vi cầu alginat và chitosan KDSH chứa ACV bằng phương pháp trao đổi ion cố định gel Đối với các mẫu vi cầu alginat, kết quả cho thấy các vi cầu có kích thước trung bình 70,60 ± 2,44 µm,

tỷ lệ vi cầu hóa đạt từ 51,42 – 80,46% Tỷ lệ vi cầu hóa cao nhất và khả năng kiểm soát giải phóng tốt nhất khi nồng độ calci clorid là 10% (kl/tt) và tỷ lệ thuốc : polyme là 1:4 Với các mẫu vi cầu chitosan, kích thước trung bình 31,62 ± 4,64 µm,

tỷ lệ VCH đạt từ 40,24 – 67,29% Mẫu VC chitosan được bào chế với tỷ lệ tác nhân liên kết chéo là 2 ml dung dịch glutaraldehyd 25% (kl/tt) và tỷ lệ ACV : chitosan là

1 : 2 cho tỷ lệ VCH và khả năng KSGP tốt nhất Các mẫu vi cầu tối ưu đều có khả năng kết dính khá tốt 66,42 ± 1,01% đối với vi cầu alginat và 79,89% ± 1,01 đối với vi cầu chitosan Kỹ thuật phát xạ Grama được áp dụng để đánh giá khả năng lưu trú của vi cầu tại dạ dày thỏ cho thấy thời gian lưu trú của vi cầu alginat là 4 giờ, và

6 giờ đối với vi cầu chitosan

Giri I Cvà các cộng sự [18] đã nghiên cứu bào chế vi cầu ACV KDSH với chất mang là alginat và các polyme kết dính niêm mạc là NaCMC và MC bằng kỹ thuật cố định gel bằng ion Vi cầu tạo thành có độ trơn chảy tốt, hình cầu hoặc gần cầu, không dính nhau Kích thước hạt trung bình trong khoảng 409,25 – 725 µm Tỷ

lệ VCH đạt từ 38,60 – 70,35% Mẫu vi cầu được bào chế với alginat và Na CMC có

khả năng kết dính tốt nhất trong thử nghiệm rửa trôi in vitro, trong đó công thức bào

chế với tỷ lệ alginat : NaCMC là 1 : 1 thể hiện khả năng kết dính tốt nhất Các mẫu

vi cầu đều có khả năng giải phóng dược chất chậm và kéo dài trên 8 giờ trong môi trường acid hydroclorid 0,1 N

Dhaliwal S.và các cộng [16] sự đã nghiên cứu bào chế vi cầu acyclovir KDSH với các polyme kết dính là: chitosan, thiolat chitosan, Carbopol 71G và Methocel K15M sử dụng 2 phương pháp bào chế: tạo liên kết chéo bằng glutarandehyd đối với chitosan và thiolat chitosan, Carbopol 71G và Methocel K15M sử dụng phương pháp phun sấy Các vi cầu bào chế đều thể hiện khả năng kiểm soát giải phóng trong vòng

12 giờ Nghiên cứu sử dụng mô hình máng rửa trôi để đánh giá khả năng KDSH của các mẫu vi cầu, kết quả cho thấy vi cầu thiolat chitosan có khả năng lưu giữ lâu nhất

trên niêm mạc ruột (8 giờ ± 0,8) Các thử nghiệm invivo cũng cho thấy các mẫu vi

cầu đều lưu giữ tốt ở đoạn đầu đường tiêu hóa Nghiên cứu dược động học cho thấy các VC KDSH có thể duy trì nồng độ ACV trong huyết tương ở mức có thể định lượng được trong vòng 24 giờ Mẫu vi cầu thiolat chitosan đạt AUC0-24 (1,090 ± 51

ng giờ/ml) cao hơn 4 lần so với dạng dung dịch ACV (281 ± 28 ng h/ml)

Vishnu A Patelcùng các cộng sự [29] đã nghiên cứu tối ưu hóa công thức bào chế vi cầu chitosan chứa ACV bằng phương pháp cố định gel 27 công thức bào chế

được thiết kế nhằm đánh giá ảnh hưởng của các biến phụ thuộc như: nồng độ chitosan (X1), nồng độ glutaraldehyd (X2), nồng độ tripolyphosphat (X3) lên tỷ lệ

vi cầu hóa, hàm lượng dược chất trong vi cầu và t50 (thời gian để 50% thuốc được giải phóng) Các vi cầu tạo thành đều có hình cầu, bề mặt nhẵn mịn, kích thước trung bình từ 16 – 95 µm, tỷ lệ vi cầu hóa từ 20% – 40%, hàm lượng dược chất trong VC từ 3% -7% và t50 nằm trong khoảng 65 – 330 phút Kết quả phân tích bằng phần mềm ANOVA cho thấy khả năng kiểm soát giải phóng của vi cầu tốt hơn khi tăng nồng độ của chitosan, tripolyphosphat, glutaraldehyd sử dụng

1.3.2 Các nghiên cứu trong nước

Gần đây, tại trường ĐH Dược Hà Nội, đã có công trình nghiên cứu về dạng vi cầu ACV KDSH:

Nguyễn Thị Hiền [5] đã tiến hành bào chế vi cầu ACV KDSH bằng phương

pháp bốc hơi dung môi với chất mang là EC và polyme KDSH là Cb 934P theo 12 công thức khác nhau Kết quả cho thấy các mẫu vi cầu đều kích thước phân bố khá đồng đều Các công thức bào chế đều cho hiệu suất tạo vi cầu cao và tỷ lệ vi cầu hóa trên 60% 12 mẫu vi cầu đều có khả nằng giải phóng dược chất kéo dài trên 8 giờ Kết quả nghiên cứu khả năng KDSH đường tiêu hóa trên chuột của 4 mẫu vi cầu bào chế so sánh với mẫu vi cầu ACV – ms (không KDSH, bào chế cùng phương pháp) cho thấy sau 2 giờ uống thuốc, các mẫu vi cầu nghiên cứu đều kết dính hầu hết ở dạ dày (trên 60%), tỷ lệ vi cầu xuống ruột non rất thấp Cho tới tận thời điểm 6 giờ sau khi uống vẫn còn trên 26% lượng vi cầu còn được kết dính trên niêm mạc dạ dày

Phạm Thị Thảo [6] đã tiến hành nghiên cứu bào chế vi cầu ACV KDSH với

chất mang là alginat và một số polyme KDSH như Cb 934, HPMC K4M, HPMC K100M bằng phương pháp trao đổi ion cố định gel Nghiên cứu đã tiến hành khảo sát và lựa chọn được các yếu tố thuộc thành phần và quá trình bào chế ảnh hưởng đến chất lượng của vi cầu bào chế Sơ bộ lựa chọn được công thức thích hợp bào chế vi cầu acyclovir KDSH gồm: 2% (kl/tt) ACV, 1%(kl/tt) natri alginat, 1% (kl/tt)

Carbopol 934, 0,4% (kl/tt) Aerosil; lựa chọn nồng độ dung dịch calci clorid là 5% (kl/tt) và thời gian ngâm vi cầu trong dung dịch calci clorid là 0,5giờ Mẫu vi cầu được bào chế theo công thức trên có những ưu điểm nổi bật so với các mẫu vi cầu khác: hiệu suất tạo vi cầu đạt 87,23%, tỷ lệ vi cầu hóa cao nhất (75,11%), có khả năng KSGP trong môi trường nước (sau 8 giờ giải phóng được 80,16%) Thử

nghiệm rửa trôi in vitro đánh giá khả năng KDSH cho thấy mẫu vi cầu đã chọn có

khả năng KDSH tốt nhất trên cả niêm mạc dạ dày và niêm mạc ruột non thỏ

Tuy nhiên nghiên cứu vẫn còn một số hạn chế sau:

+ Hàm lượng dược chất trong VC chưa cao nên gặp khó khăn khi đưa vào dạng bào chế cụ thể

+ Phương pháp đánh giá khả năng giải phóng trong MT nước chưa phản ánh đúng môi trường acid dịch vị trong dạ dày, nơi mà VC lưu giữ chủ yếu

+ Thời gian lưu giữ của mẫu VC đã chọn trên niêm mạc dạ dày vẫn chưa cao: sau 2 giờ chỉ còn 4% vi cầu còn lưu giữ

Vì vậy, cần tiếp tục nghiên cứu cải thiện hàm lượng dược chất trong VC, đánh giá khả năng KSGP trong MT acid và cải thiện khả năng KDSH trên niêm mạc dạ dày

Chương 2 NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ , NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG

PHÁP NGHIÊNCỨU 2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị

Bảng 2.2 Các nguyên liệu và hóa chất

Động vật thí nghiệm:

Thỏ trắng, trưởng thành, giống đực, cân nặng 2 – 2,5kg, được nuôi trong điều kiện có kiểm soát và chế độ ăn đầy đủ Trước khi thí nghiệm để thỏ nhịn đói qua ngày và cho uống nước tự do

- Máy khuấy từ: IKA – WERK (Đức)

- Bơm nhu động: IKA – WERK (Đức)

- Máy siêu âm: UTRASONIC

- Tủ sấy Memmert: ULM 200

- Hệ thống đo độ hòa tan: ERWERKA DT 600

- Máy đo quang phổ: UV – VIS HITACHI U – 1800

- Máy đo: pH EUTECH 550

- Cân xác định hàm ẩm: SARTORIUS MA30

- Máy đo thể tích biểu kiến của hạt: ERWEKA SVM (Đức)

- Cân kỹ thuật cải tiến

- Cần phân tích, cân kỹ thuật, tủ lạnh và các dụng cụ thủy tinh

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Cân chính xác 100mg ACV hòa tan bằng dung dịch acid hydroclorid 0,1 N, cho vào bình định mức 100ml, thêm dung dịch acid hydroclorid 0,1N vừa đủ đến vạch, lắc kỹ Sau đó pha loãng bằng dung dịch acid hydroclorid 0,1N để được các dung dịch có nồng độ lần lượt là 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 µg/ml Tiến hành đo mật độ quang các dung dịch trên ở bước sóng 252 nm

Từ kết quả thu được, xây dựng phương trình hồi quy thực nghiệm, vẽ đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dược chất

Bào chế vi cầu ACV KDSH bằng phương pháp cố định gel bằng ion theo các bước sau:

Chuẩn bị dung dịch polyme:

+ Natri alginat và Carbopol 934 được ngâm trương nở trong 70 ml nước RO, khuấy từ qua đêm để tạo thành dung dịch polyme đồng nhất

Phối hợp ACV vào dung dịch polyme:

+ Tạo hỗn hợp bột kép của ACV và các tá dược khác (Aerosil, magnesi carbonat), sau

đó phân tán trong khoảng 10 ml nước rồi phối hợp với dung dịch polyme đã chuẩn bị, tráng sạch cốc, gộp dịch tráng và bổ sung nước vừa đủ 100 ml Khuấy trộn bằng máy khuấy từ trong 1 giờ để tạo thành hỗn dịch đồng nhất

Chuẩn bị môi trường nhỏ giọt:

MT nhỏ giọt không có chitosan (1): 300 ml dung dịch calci clorid 5% (kl/tt)

MT nhỏ giọt có phối hợp thêm chitosan (2):

+ Dung dịch chitosan được chuẩn bị 1 giờ trước khi bào chế bằng cách: phân tán chitosan trong 200 ml dung dịch acid acetic 1,5% (tt/tt) để trương nở hoàn toàn

+ Chuẩn bị 100 ml dung dịch calci clorid 15% (kl/tt)

+ Phối hợp hai dung dịch trên với nhau, khuấy trộn 15 phút để tạo thành một dung dịch đồng nhất

+ Điều chỉnh pH bằng dung dịch natri hydroxyd 0,4N và dung dịch acid hydroclorid 0,1N về pH = 3

Tạo vi cầu:

+ Sử dụng bơm nhu động bơm hỗn dịch dược chất đã chuẩn bị qua kim phun cỡ 18 (tốc độ 3,3 ml/phút) vào 300 ml môi trường nhỏ giọt đã chuẩn bị trước đó Tiếp tục khuấy từ dung dịch chứa vi cầu mới tạo thành trong thời gian thích hợp với tốc độ 200 vòng/phút đối với MT (1) và 600 vòng/phút đối với MT (2)

+ Gạn rửa vi cầu bằng nước RO (50ml × 3 lần), sấy ở nhiệt độ 50oC đến khi vi cầu đạt

độ ẩm < 3%

- Hiệu suất của quá trình bào chế vi cầu được tính theo công thức:

H % = × 100

Trong đó: H: Hiệu suất tạo vi cầu (%)

: Khối lượng vi cầu thu được (g)

mo: Khối lượng nguyên liệu rắn đầu vào (g)

- Tỷ lệ vi cầu hóa: là tỷ lệ giữa lượng dược chất có trong vi cầu với lượng dược

chất đưa vào ban đầu

Từ kết quả định lượng ACV trong vi cầu, tỷ lệ vi cầu hóa được xác định theo công thức:

%VCH = × 100 Trong đó:

% VCH: Tỷ lệ ACV được vi cầu hóa

No: Lượng ACV đưa vào ban đầu (g)

Nt: Lượng ACV định lượng được trong vi cầu thu được (g)

2.2.4.1 Xác định kích thước tiểu phân và chỉ tiêu mất khối lượng do làm khô

+ Xác định kích thước tiểu phân: sử dụng bộ cỡ rây: 0,8 mm, 1 mm, 1,2 mm, 1,4 mm + Tiến hành trên cân xác định độ ẩm nhanh SARTORIUS MA30

2.2.4.2 Đánh giá khả năng trơn chảy của vi cầu

+ Thiết bị: Sử dụng máy đo tỷ trọng biểu kiến ERWEKA SVM

+ Tiến hành: Cân khoảng 5,0 g mẫu vi cầu cho vào ống đong 10 ml, gõ đều đặn 10 nhịp ghi thể tích thô, gõ đều đặn đến thể tích không đổi ghi thể tích biểu kiến

Tỷ trọng biểu kiến và tỷ trọng thô của mẫu vi cầu được tính theo công thức:

Dt =

Db = Khả năng trơn chảy của vi cầu được đánh giá thông qua chỉ số Carr:

% Carr = × 100 Trong đó:

db: Tỷ trọng biểu kiến (g/ml)

dt: Tỷ trọng thô (g/ml)

Vt: Thể tích thô của vi cầu (ml)

Vb: Thể tích biểu kiến của vi cầu (ml)

mc: Khối lượng vi cầu (g)

2.2.4.3 Đánh giá khả năng trương nở của vi cầu

Khả năng trương nở của vi cầu được đánh giá thông qua xác định lượng nước được hấp thụ vào vi cầu bằng phương pháp phân tích trọng lượng [6],[7]

2.2.4.4 Phương pháp định lượng acyclovir trong vi cầu

Tiến hành theo phương pháp đo độ hấp thụ tử ngoại

- Mẫu thử:

+ Nghiền mịn vi cầu, cân chính xác 1 lượng bột VC chứa khoảng 100mg ACV + Thêm 60ml dung dịch acid hydroclorid 0,1N và siêu âm 1 giờ, cho vào bình định mức 100ml, phần cắn còn lại thêm tiếp 20ml dung dịch acid hydroclorid 0,1N vào siêu âm tiếp 30 phút, rồi cho toàn bộ vào bình định mức, tráng sạch cốc và bổ sung dung dịch acid hydroclorid 0,1N tới vạch, lắc kỹ Lọc qua giấy lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu, hút chính xác 1ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml, thêm dung dịch acid hydroclorid 0,1N vừa đủ đến vạch, lắc kỹ Đem đo quang ở bước sóng 252

nm, dung dịch acid hydroclorid 0,1N là mẫu trắng Song song tiến hành mẫu chuẩn

- Mẫu chuẩn: Cân chính xác 100mg ACV, thêm 60ml dung dịch acid hydroclorid

0,1N Tiến hành tương tự mẫu thử

- Mẫu placebo: tiến hành tương tự mẫu thử với vi cầu không chứa DC, để xác định

ảnh hưởng của các tá dược đến khả năng hấp thụ quang học của DC

Hàm lượng ACV trong vi cầu được tính theo CT:

C% = × 100 (1)

Trong đó:

C: Hàm lượng ACV trong vi cầu (%)

Dt: Mật độ quang của dung dịch thử

Dc: Mật độ quang của dung dịch chuẩn

mc: Khối lượng của bột mẫu chuẩn (mg)

mt: Khối lượng của bột mẫu thử (mg)

2.2.4.5 Đánh giá khả năng giải phóng acyclovir in vitro

Sử dụng thiết bị thử hòa tan ERWEKA DT600 với các điều kiện tiến hành sau:

- Thiết bị khuấy: cánh khuấy

- Môi trường hòa tan: 900 ml dung dịch acid hydroclorid 0,1N

- Nhiệt độ: 37 ± 1o

C

- Tốc độ khuấy: 50 ± 0,5 vòng/phút

- Thời gian thử: 6 giờ

- Lấy mẫu vào các thời điểm: 0,5 ; 1; 2; 3 ; 4 ; 5; 6 giờ

- Mỗi mẫu thử: cân chính xác lượng vi cầu tương ứng với 200 mg ACV

- Định lượng acyclovir giải phóng bằng phương pháp đo mật độ quang ở bước sóng 252 nm

Ct: Nồng độ hiệu chỉnh ở thời điểm thứ t của dung dịch thử (µg/ml)

Co: Nồng độ của dung dịch chuẩn (µg/ml)

Vo: Thể tích dịch hòa tan đã hút (Vo = 10 ml)

V: Thể tích môi trường hòa tan (V = 900 ml)

Ct - 1 : Nồng độ hiệu chỉnh ở lần lấy mẫu thứ t - 1 (µg/ml)

α: Độ pha loãng

- Phần trăm ACV (C%) hòa tan tại thời điểm thứ t được tính theo công thức:

Trong đó:

Ct: Nồng độ hiệu chỉnh ở thời điểm t (µg/ml)

m: Lượng ACV trong vi cầu (mg)

2.2.4.6 Phương pháp đánh giá khả năng kết dính sinh học

Đánh giá bằng phương pháp sử dụng cân kỹ thuật cải tiến:

Thiết bị: Được mô tả trong hình 2.3

Hình 2.3 Thiết bị đánh giá khả năng kết dính sinh học được cải tiến

từ cân kỹ thuật

+ Niêm mạc: niêm mạc đường tiêu hóa thỏ

+ Dung dịch thấm ướt:

Dung dịch dung dịch acid hydroclorid 0,1N khi thử trên niêm mạc dạ dày

Dung dịch đệm phosphat pH 6,8 khi thử trên niêm mạc ruột non

Tiến hành:

+ Gây chết thỏ bằng cách bơm không khí vào tĩnh mạch tai Ngay lập tức phẫu thuật cắt lấy phần dạ dày và đầu ruột non đem xử lý bằng cách rửa sạch thức ăn trên

bề mặt niêm mạc với nước muối sinh lý sao cho không làm mất lớp dịch nhầy trên

bề mặt Làm thí nghiệm ngay sau khi xử lý

+ Gắn một lớp niêm mạc lên phần giá đỡ Lấy 50 hạt VC rải lên bề mặt niêm mạc này

có diện tích 4 cm2 (2×2 cm) đã được thấm ướt bằng một thể tích chính xác môi trường thử (0,1 ml)

+ Một miếng niêm mạc khác được cố định lên đĩa cân

+ Tác động một lực bằng 100 mg lên đĩa cân để hai lớp niêm mạc tiếp xúc nhau trong vòng 2 phút Sau khi ngừng tác dụng lực điều chỉnh để buret nhỏ nước xuống cốc với tốc độ 3 ml/phút cho đến khi hai lớp niêm mạc tách ra dưới tác động của trọng lượng nước nhỏ xuống, ghi lại khối lượng nước đã nhỏ xuống (chính là thể tích nước do tỷ trọng của nước bằng 1 g/cm3) Khi đó lực kết dính sinh học được tính theo công thức:

F (N) = 0,00981 × m

m: khối lượng nước đã nhỏ xuống (g)

Chương 3.THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Xây dựng đường chuẩn định lượng acyclovir trong môi trường dung dịch acid hydroclorid 0,1N

Tiến hành pha 1 dãy dung dịch acyclovir có nồng độ từ 4 – 16 µg/ml trong môi trường dung dịch acid hydroclorid 0,1N theo phương pháp ghi ở mục 2.2.1 Kết quả thể hiện ở bảng 3.3:

Bảng 3.3 Độ hấp thụ mật độ quang của dung dịch acyclovir ở các nồng độ

hydroclorid 0,1N tại bước sóng 252 nm

Nhận xét: giá trị R2 xấp xỉ bằng 1, chứng tỏ trong môi trường acid hydroclorid 0,1N, mật độ quang phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ ACV trong khoảng khảo sát + Dung dịch mẫu thử và mẫu placebo được chuẩn bị theo phương pháp mô tả ở mục 2.2.4.4 và tiến hành đo quang tại bước sóng 252 nm Kết quả mật độ quang của

dung dịch thử và dung dịch mẫu placebo trong môi trường acid hydroclorid 0,1N tại bước sóng 252 nm trên 6 mẫu độc lập được thể hiện trong bảng 3.4:

Bảng 3.4 Đánh giá ảnh hưởng của tá dược tới kết quả định lượng bằng phương

pháp đo quang

dd th ử (Dt) Mật độ quang của dd placebo (Dp)

Tỷ lệ đáp ứng Dp/Dt (%)

Kết quả từ bảng cho thấy:

Độ hấp thụ mật độ quang của tất cả 6 mẫu dung dịch placebo đánh giá đều nhỏ hơn 1% so với độ hấp thụ của dung dịch mẫu thử pha loãng cùng tỷ lệ, chứng tỏ các

tá dược khác không làm ảnh hưởng đến độ hấp thụ mật độ quang tại bước sóng 252

nm của ACV trong khoảng khảo sát

Do đó có thể sử dụng phương pháp đo quang ở bước sóng 252 trong khoảng nồng

độ trên để định lượng ACV trong mẫu thử và môi trường hòa tan

3.2 Nghiên cứu bào chế vi cầu acyclovir kết dính sinh học

Trên cơ sở tham khảo kết quả nghiên cứu của Phạm Thị Thảo bào chế vi cầu với thành phần công thức như sau: