Nghiên cứu bào chế vi cầu amoxicilin kết dính sinh học tại dạ dày

Phương pháp đánh giá độ ổn định của amoxicilin trong các môi trường pH khác nhau………... Phân loại polyme kết dính sinh học Loại polyme Đặc điểm Ví dụ -Chitosan -Trimethyl chitosan -Amino

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

HÀ N ỘI - 2015

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ HOÀI THƯƠNG

L ỜI CẢM ƠN

TS Vũ Thị Thu Giang

Là người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo và động viên giúp đỡ

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Phạm Xuân Chung cùng

môn Đồng thời xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn

trung ương đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình làm đề tài

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu và Phòng sau đại học, các

người đã luôn ở bên tôi, chia sẻ động viên tôi trong suốt thời gian vừa qua

Nguy ễn Thị Hoài Thương

M ỤC LỤC

DANH M ỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT

DANH M ỤC CÁC BẢNG BIỂU

DANH M ỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ……… 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN……… 3

1.1 Sinh lý bệnh loét dạ dày – tá tràng liên quan đến Helicobacter pylori 3

1.2 T ổng quan về amoxicilin……… 4

1.2.1 Công thức hóa học……… 4

1.2.2 Tính chất lý, hóa học……… 4

1.2.3 Dược động học……… 5

1.2.4 Cơ chế tác dụng lên Helicobacter pylori……… 5

1.2.5 Chỉ định cho diệt Helicobacter pylori……… 6

1.2.6 Một số biệt dược chứa amoxicilin trên thị trường……… 6

1.3 H ệ thuốc kết dính sinh học……… 7

1.3.1 Khái niệm……… 7

1.3.2 Quá trình và cơ chế kết dính sinh học……… 7

1.3.3 Polyme kết dính sinh học……… 8

1.3.3.1 Yêu cầu đối với polyme kết dính sinh học……… 8

1.3.3.2 Phân loại polyme kết dính sinh học……… 8

1.3.4 Một số phương pháp đánh giá khả năng kết dính sinh học áp dụng đối với vi cầu……… 11

1.3.4.1 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vitro……… 11

1.3.4.2 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vivo……… 15

1.4 Một số nghiên cứu về các hệ kết dính sinh học……… ……… 15

1.4.1 Các nghiên c ứu trên thế giới……….……… 15

1.4.1.1 Nghiên cứu bào chế vi cầu amoxicilin kết dính sinh học……… 15

1.4.2 Nghiên cứu bào chế các hệ kết dính sinh học khác chứa amoxicilin…… 20

1.4.2 Các nghiên c ứu trong nước ……… 22

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU… 24

2.1 Nguyên liệu và phương tiện nghiên cứu……… 24

2.1.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu……… 24

2.1.2 Động vật thí nghiệm……… 25

2.1.3 Thiết bị nghiên cứu……… 25

2.2 Phương pháp nghiên cứu……… 25

2.2.1 Phương pháp bào chế……… 25

2.2.1.1 Bào ch ế vi cầu amoxicilin kết dính sinh học……… 25

2.2.1.2 Bào ch ế viên nang chứa vi cầu amoxicilin kết dính sinh học……… 26

2.2.2 Phương pháp đánh giá hiệu suất tạo vi cầu và tỷ lệ vi cầu hóa……… 27

2.2.3 Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng vi cầu……… 27

2.2.3.1 Xác định kích thước tiểu phân và chỉ tiêu mất khối lượng do làm khô… 27

2.2.3.2 Đánh giá khả năng trơn chảy của vi cầu……… 27

2.2.3.3 Định lượng……… 28

2.2.3.4 Đánh giá độ hòa tan của vi cầu amoxicilin kết dính sinh học………… 29

2.2.3.5 Đánh giá độ ổn định của dược chất trong các môi trường có pH khác nhau ……… 31

2.2.3.6 Đánh giá khả năng kết dính sinh học in vitro……… 31

2.2.3.7 Đánh giá khả năng kết dính sinh học in vivo……… 32

2.2.4 Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng viên nang……… 33

2.2.4.1 Đánh giá độ đồng đều khối lượng……… 33

2.2.4.2 Đánh giá khả năng giải phóng dược chất từ viên nang……… 33

2.2.4.3 Định lượng dược chất trong viên nang……… 33

2.2.4.4 Phương pháp đánh giá độ ổn định của chế phẩm……… 33

2.2.5 Phương pháp phân tích và xử lý số liệu……… 34

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT……… 35

3.1 Xây dựng đường chuẩn định lượng dược chất……… 35

3.1.1 Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại……… 35

3.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao……… 36

3.2 Nghiên cứu bào chế vi cầu amoxicilin kết dính sinh học……… 37

3.2.1 Khảo sát nhiệt độ sấy……… 37

3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ Aerosil.……… 39

3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ dược chất……… 41

3.2.4 Khảo sát ảnh hưởng của polyme phối hợp……… 43

3.2.5 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ calci clorid……… 46

3.2.6 Khảo sát ảnh hưởng của chitosan và thời gian ngâm vi cầu……… 48

3.2.7 Đánh giá độ ổn định dược chất của mẫu vi cầu F17 trong các môi trường pH khác nhau……… 52

3.3 Đánh giá khả năng kết dính sinh học in vivo trên chuột……… 53

3.4 Nghiên cứu bào chế và đánh giá độ ổn định của viên nang chứa vi cầu amoxicilin hàm lượng 250mg……… 55

3.4.1 Bào chế vi cầu amoxicilin kết dính sinh học theo công thức lựa chọn … 55

3.4.2 Bào chế viên nang chứa vi cầu amoxicilin hàm lượng 250mg……… 56

3.4.3 Đánh giá độ ổn định của viên nang amoxicilin bào chế ……….… 57

CHƯƠNG 4 BÀN LUẬN……… 59

4.1 Phương pháp bào chế vi cầu……… 59

4.2 Phương pháp đánh giá lực kết dính sinh học của vi cầu amoxicilin kết dính sinh học……….… 60

4.2.1 Thử nghiệm kết dính sinh học in vitro……….… 60

4.2.2 Thử nghiệm kết dính sinh học in vivo……… 60

4.3 Phương pháp đánh giá độ ổn định của amoxicilin trong các môi trường pH khác nhau……… 61

4.4 Nghiên cứu bào chế viên nang amoxicilin kết dính sinh học………… 62

4.5 Theo dõi độ ổn định của viên nang amoxicilin kết dính sinh học bào chế……… 63

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……… 64

TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH M ỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT

DANH M ỤC CÁC BẢNG BIỂU

3.11

B ảng Tên b ảng Trang

DANH M ỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình Tên hình v ẽ, đồ thị Trang

ĐẶT VẤN ĐỀ

Helicobacter pylori (H.P) là một xoắn khuẩn gram âm ưa khí có trong dạ dày

làm tăng 3 – 4 lần nguy cơ mắc bệnh loét dạ dày và 10-15% người bị nhiễm H.P sẽ

[32], [35]

Phác đồ điều trị để diệt trừ H.P được ưu tiên hàng đầu là kết hợp bộ ba gồm:

đến hiệu quả điều trị thấp [20] Do vậy cần thiết nghiên cứu bào chế một dạng thuốc

phóng dược chất [7] Nhờ kích thước nhỏ, vi cầu có khả năng bám dính và thâm

điều trị tại chỗ và tăng sinh khả dụng [13] Mặc dù vậy, cho đến nay ở Việt Nam

Xuất phát từ tình hình thực tế đó, chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu bào chế

vi c ầu amoxicilin kết dính sinh học tại dạ dày”với các mục tiêu sau:

dày

Để thực hiện các mục tiêu trên, đề tài đã tiến hành các nội dung:

phương pháp trao đổi ion cố định gel

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Sinh lý bệnh loét dạ dày – tá tràng liên quan đến Helicobacter pylori

pylori được cho là nguyên nhân chủ yếu gây viêm dạ dày mãn tính, viêm loét dạ dày, u và ung thư dạ dày Phần lớn người bị nhiễm (> 70%) không có triệu chứng, tỉ

các nước đang phát triển [13], [28] Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng tỉ lệ nhiễm H.P

người nhiễm H.P sẽ phát triển thành loét dạ dày tá tràng (tá tràng hoặc dạ dày) hoặc

(WHO) đã thống kê rằng nhiễm H.P có liên quan đến ung thư dạ dày là một trong

hình 1.1

Hình 1.1.Sinh lý b ệnh liên quan đến Helicobacter pylori [13]

Hình 1.2 Quá trình xâm nh ập của Helicobacter pyloritrong dạ dày [13]

Ban đầu, H.P bám dính vào lớp niêm mạc dạ dày, tiết ra enzym urease

- Amoxicilin (trihydrat) là dạng bột tinh thể màu trắng hoặc gần như trắng,

acid amin)

trường acid pH 1,0; pH 2,0 trong một giờ đầu lần lượt là 12,20% và 3,50% [26]

tăng tính thấm như natri laurylsulfat haychất mang như P - glycoprotein,…

1.2.3 Dược động học

hưởng đến hấp thu thuốc [3], [5]

phân [3], [4], [5]

1.2.4 Cơ chế tác dụng lên Helicobacter pylori

động lên thành của vi khuẩn làm phân giải quá trình tổng hợp thành tế bào Nghiên

1.2.5 Ch ỉ định cho diệt Helicobacter pylori

Điều trị tấn công 1-2 tuần và duy trì 4-6 tuần [1]

1.2.6 M ột số biệt dược chứa amoxicilin trên thị trường

B ảng 1.1 Một số biệt dược chứa amoxicilin trên thị trường [6]

STT Bi ệt dược Nhà s ản xuất D ạng bào chế Hàm lượng

875mg/125mg

1.3 H ệ thuốc kết dính sinh học

1.3.1 Khái ni ệm

1.3.2 Quá trình và cơ chế kết dính sinh học

Hình 1.3 Quá trình k ết dính sinh học [17], [30]

- Giai đoạn tiếp xúc: polyme thấm ướt, trương nở để tiếp xúc với biểu mô sinh

- Giai đoạn tiếp theo (còn gọi là giai đoạn củng cố): xảy ra các tương tác lý hóa

Các cơ chế kết dính sinh học gồm:

*Cơ chế tĩnh điện: Do lớp màng nhầy và hệ KDSH tích điện trái dấu nhau nên

khi tiếp xúc với nhau, sự chuyển điện tử giữa chúng sẽ hình thành lớp điện tích kép

ở bề mặt liên kết Lực hút tĩnh điện quyết định lực kết dính [11], [40]

Giai đoạn tiếp xúc (1) Giai đoạn hình thành liên kết (2)

Vị trí hình thành liên kết

D ạng thuốc (3)

Lớp màng nhầy

(4)

* Cơ chế thấm ướt: Áp dụng cho chất lỏng hoặc hệ KDSH có độ nhớt thấp

Theo đó, kết dính như một quá trình thấm, các chất kết dính xâm nhập vào bề mặt chất nền, đông cứng lại và lưu trên bề mặt sinh học Hệ polyme KDSH có khả năng hòa trộn lẫn với lớp màng nhầy tốt dẫn đến tỷ lệ lớn polyme trải rộng trên bề mặt

màng nhầy Góc tiếp xúc bề mặt sinh học càng nhỏ thì sự kết dính càng tốt [11]

*Cơ chế khuếch tán: Đây là quá trình khuếch tán hai chiều với tỷ lệ thâm nhập

phụ thuộc vào hệ số khuếch tán của các polyme tương tác Các yếu tố ảnh hưởng là: trọng lượng phân tử, mật độ liên kết ngang, tính linh động của chuỗi polyme, nhiệt

độ môi trường [11], [17]

* Cơ chế hấp phụ: Sự kết dính là kết quả của các liên kết sơ cấp và thứ cấp

giữa polyme kết dính và bề mặt màng nhầy Các liên kết sơ cấp như liên kết ion, cộng hóa trị… Liên kết thứ cấp chủ yếu do lực hút Vander Waal, liên kết hydro, lực hút tĩnh điện hay liên kết kỵ nước Những liên kết thứ cấp này có vai trò quan trọng nhất trong quá trình KDSH vì mặc dù mỗi liên kết riêng biệt là yếu nhưng với số lượng lớn các liên kết này có thể tạo ra tổng lực kết dính khá mạnh [11], [30]

1.3.3 Polyme kết dính sinh học

1.3.3.1 Yêu c ầu đối với polyme kết dính sinh học

hydroxyl, amid, sulfat)

1.3.3.2 Phân loại polyme KDSH

Phân loại polyme KDSH đươc tóm tắt trong bảng 1.2 [24], [25], [43], [50]

Bảng 1.2 Phân loại polyme kết dính sinh học

Loại polyme Đặc điểm Ví dụ

-Chitosan -Trimethyl chitosan -Aminodextran

Polyme

anion

Khả năng KDSH do nhóm carboxyl trong phân tử tạo liên kết hydro với nhóm hydroxyl trên chuỗi oligosaccarid của protein chất nhầy Các polyme anion kết dính hiệu quả hơn polyme cation và polyme không ion hóa

-Carbopol -Carboxymethyl cellulose

-NaCMC -Natri alginat -Pectin

-HPMC -Hydroxyethyl cellulose -Polyvinyl alcol -PVP

Polyme thế hệ 2

Kết dính trực tiếp với bề mặt tế bào hơn là lớp chất nhầy bằng receptor đặc hiệu hoặc liên kết cộng hóa trị thay vì các cơ chế không đặc hiệu như polyme thế hệ trước

-Chitosan thiol hóa -Lectin

[48], [53]

B ảng 1.3 Tính chất và đặc điểm của mộtsố loại polyme kết dính sinh học

aceton, chloroform, không tan trong hydrocarbon béo, ethylen glycol và hầu hết các alcol

phóng thuốc chậm

hình thành gel, pH trung tính, không độc hại, ảnh hưởng nhỏ trên các thông số sản xuất và công nghệ sản xuất tương đối đơn giản

vì vậy HPMC được sử dụng rộng rãi trong việc xây dựng các dạng bào chế

Loại polyme Đặc điểm, tính chất

Natri alginat

trong các dung môi hữu cơ và dung dịch acid có pH dưới 3,0

thành rẻ Thường được dùng làm chất nhũ hóa, chất ổn định, thành phần trong viên nén kết dính

Chitosan

có nhiều trong các loài giáp xác biển, côn trùng và nấm

nhanh trong các dung dịch đặc hoặc loãng của hầu hết các acid

đặc biệt là kết dính sinh học

1.3.4 M ột số phương pháp đánh giá khả năng kết dính sinh học áp dụng đối với

vi c ầu

phương pháp thử kết dính là một bước quan trọng để phát triển dạng bào chế này

đối với vi cầu được trình bày dưới đây:

1.3.4.1 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vitro

Ti ến hành:

sinh lý vào trong, khâu 2 đầu thành túi

+ Chuẩn bị 1 ống nghiệm chứa 1 lượng xác định vi cầu trong dung dịch muối sinh lý

+ Đặt túi ruột chuột vào ống nghiệm trên, lắc ống nghiệm với tần số xác định, trong thời gian xác định

+ Sau đó lấy túi ruột ra Xác định lượng vi cầu bám dính vào túi

(𝑁𝑜−𝑁)

Thi ết bị:

Phương pháp này chỉ áp dụng cho những vi cầu có kích thước > 300µm

Ti ến hành:

+ Sau đó buồng được nâng lên cho đến khi tiếp xúc với vi cầu, sau thời gian

được lực kết dính

Khi s ử dụng thiết bị là cân phân tích cải tiến, thí nghiệm được tiến hành như sau:

trên giá đỡ Phần giá đỡ này được đặt trong cốc thủy tinh chứa dung dịch đệm có

pH thích hợp và được duy trì nhiệt độ 37 ± 1oC, tuy nhiên dung dịch chỉ tiếp xúc

[23], [40]

Hình 1.4 Mô hình s ử dụng cân phân tích cải tiến

Môi trường: dung dịch đệm có pH thích hợp

Ti ến hành:

+ Thường tiến hành với ruột non chuột Phần ruột được tách ra và cắt theo

sinh lý

trường thử lên bề mặt niêm mạc, để trong thời gian nhất định (khoảng 15-20 phút)

động đường tiêu hóa

+ Cuối cùng đếm số lượng các vi cầu còn lại trên bề mặt niêm mạc Khả năng bám dính được tính bằng tỷ lệ vi cầu còn lại trên niêm mạc ruột chuột so với số lượng vi cầu ban đầu

Thi ết bị: Ống trụ quay tròn làm bằng thép không gỉ

T ốc độ quay: 125 vòng/phút

Môi trường: Dung dịch đệm có pH thích hợp

Ti ến hành:

+ Đặt ống trụ vào trong môi trường thử

dính được tính toán bằng tỷ lệ vi cầu còn lại so với số vi cầu ban đầu

Thi ết bị: máy thử độ rã viên nén tiêu chuẩn USP

Môi trường: dung dịch đệm có pH thích hợp

Ti ến hành:

theo kích thước xác định Cố định miếng niêm mạc trên phiến kính có kích thước

ướt bằng môi trường thử có pH thích hợp với vị trí niêm mạc sử dụng (môi trường

trương nở và kết dính ban đầu với đoạn niêm mạc trong một thời gian xác định

C

+ Cho thiết bị hoạt động Sau các khoảng thời gian nhất định, đếm số vi cầu

1.3.4.2 Các phương pháp thử kết dính sinh học in vivo

nước Sau khi uống một khoảng thời gian nhất định, gây chết chuột, phẫu thuật đường tiêu hóa, đếm số lượng vi cầu còn kết dính lại trên dạ dày và ruột non Khả năng KDSH của vi cầu được xác định dựa vào tỷ lệ vi cầu còn kết dính trên niêm

lượng phóng xạ còn lại [19]

+ Phương pháp X- quang: đây là phương pháp khá đơn giản, vi cầu được gắn

ảnh hưởng tới nhu động đường tiêu hóa Các đồng vị này có thể là: Cr-51, Tc-99m,

1.4 Một số nghiên cứu về các hệ kết dính sinh học

1.4.1 Các nghiên cứu trên thế giới

1.4.1.1 Nghiên c ứu bào chế vi cầu AMOX KDSH

Năm 2009, Singh J.K, Chidrawar V.R và cộng sự [52] đã tiến hành bào chế

aceton, HPMC K4M và dược chất được phân tán trong dung dịch polyme Hỗn hợp

C,

g/cm3, góc nghỉ < 400), kích thước vi cầu khoảng 533 – 588,02mm, hàm lượng dược

Năm 2009, Patel J K và cộng sự [41] đã tiến hành nghiên cứu bào chế vi

bơm nhu động (ống số 20) vào trong 500ml parafin lỏng (hỗn hợp tỷ trọng cao và

khô ở nhiệt độ phòng (25oC và 60% độ ẩm) trong 24 giờ Tối ưu hóa công thức vi

trơn chảy tốt, có tỷ lệ thuốc KDSH là tốt nhất (lớn hơn 56%) Thử nghiệm in vivo

Carbopol 934P là tá dược có thể lựa chọn để làm polyme KDSH tốt trong bào chế

Năm 2007, Patel M M, Patel J K [42] đã tiến hành nghiên cứu bào chế vi

Trong đợt thử nghiệm sơ bộ tỷ lệ polyme : dược chất được giữ ổn định là 3 : 1 Hỗn

Độ) tốc độ 1000 vòng/phút Sau 15 phút, thêm glutaraldehyd (25% tt/tt trong dung

tương ứng Trong lô thí nghiệm B1 đến B9, 40ml glutaraldehyd được sử dụng làm

được lọc và rửa sạch nhiều lần với ether dầu hỏa (80 : 20) để loại bỏ vết dầu sau đó được rửa sạch bằng nước để loại bỏ glutaraldehyd dư Các vi cầu sau đó được sấy

cầu được thiết kế theo mô hình 32 đầy đủ với các biến độc lập là tỷ lệ polyme và

năng trương nở, hiệu suất vi cầu hóa, khả năng KDSH, định lượng hàm lượng dược

và đa liều/ngày) Kết quả nghiên cứu cho thấy lô thử tốt nhất là lô B7 (với 1%

được tiến hành để đánh giá sự ổn định của thuốc kháng sinh như amoxicilin,

điều trị H.P Những tài liệu đó đã chỉ ra rằng các kháng sinh này không ổn định ở

Carbopol 934P, 1 lô không có) đã được bào chế bằng phương pháp bốc hơi dung môi nhũ tương Đầu tiên, 4,57g ethylcellulose (EC) được hòa tan trong 45,7 ml

lại của vi cầu AMOX KDSH trên niêm mạc tại thời điểm 4 giờ là 63,6% (n = 5) cao hơn gần 4 lần so với vi cầu không kết dính (16,2 %, n = 5), p < 0,01 Ngoài ra, vi

Năm 2010, Narkar và cộng sự [38] đã nghiên cứu bào chế hạt gellan kết

đến lúc tạo thành dung dịch đồng nhất Các dung dịch đồng nhất được ép đùn từng

5 phút để tăng độ bền cơ học cho hạt Các hạt thu được được rửa sạch bằng nước cất

được điều chỉnh bằng HCl loãng và dung dịch ethylamin 10% Hạt gellan thuốc tạo

(X1) và hàm lượng dược chất (X2) ở ba mức khác nhau Hiệu suất và khả năng vi

(40% đến 65% so với 70% đến 97% kl/kl và 32% đến 40% so với 60% đến 89% kl/kl tương ứng) Tỷ lệ trương nở của hạt gellan bao chitosan trong môi trường kiềm

(tương tự vi môi trường tại khu vực nhiễm H.P) tốt hơn môi trường acid (tương tự

như pH dạ dày) Khả năng kiểm soát giải phóng của hạt tạo liên kết ngang trong

được bao chitosan có khả năng kiểm soát giải phóng dược chất trong khoảng thời

có hơn 85% hạt được giữ lại trên niêm mạc dạ dày sau 7 giờ Kết quả nghiên cứu

Năm 2010, Venkateswaramurthy N cùng cộng sự [58] đã tiến hành bào chế

môi trường HCl 0,1N, hiệu suất tạo vi cầu, kích thước vi cầu tạo thành, đánh giá

tính tích điện dương của amoxicilin để diệt H.P Các vi cầu dùng gelatin đã được

chưa amin hóa Điều này là do sự tương tác tĩnh điện giữa nhóm amin trong gelatin

amin hay các nhóm cation trên polyme đóng một vai trò quan trọng trong khả năng

1.4.1.2 Nghiên c ứu bào chế các hệ KDSH khác chứa amoxicilin

Năm 2007, Sahasathian T và cộng sự [49] đã tiến hành nghiên cứu bào chế

viên nén AMOX KDSH đường uống bằng phương pháp dập thẳng với thành phần :

kính, lực gây vỡ viên) ; đánh giá sự phân hủy của AMOX trong môi trường dung

dịch HCl pH 1,2 ; đánh giá khả năng GPDC in vitro trong môi trường dung dịch

HCl pH 1,2 và môi trường dung dịch đệm phosphat pH 7,4 Kết quả nghiên cứu cho thấy các mẫu viên bào chế có độ dày 3,44 – 4,08 mm, đường kính 6,96 – 7,91 mm, lực gây vỡ viên 9,48 – 25,75N, lực gây vỡ viên của mẫu viên 3 (chứa chitosan với

dịch HCl pH 1,2 tuân theo mô hình động học bậc nhất Đánh giá sơ bộ khả năng GPDC nhận thấy các mẫu viên 1, 4, 5 không GPDC kéo dài nên nhóm tác giả lựa chọn mẫu viên 2 (chứa HPMC) và mẫu viên 3 (chứa chitosan kích thước hạt nhỏ hơn 75µm) để đánh giá khả năng GPDC trong môi trường dung dịch HCl pH 1,2 và môi trường dung dịch đệm phosphat pH 7,4 Kết quả cho thấy khả năng GPDC của

2 mẫu viên này trong môi trường dung dịch acid ở giờ đầu khoảng 15% chậm hơn

so với AMOX viên quy ước và có thể kéo dài GPDC đến 6 giờ trong khi viên quy ước GPDC hoàn toàn trong 1 – 2 giờ đầu, cả hai mẫu viên này đều có thể bảo vệ AMOX ít bị phân hủy trong môi trường acid ; khả năng GPDC trong môi trường dung dịch đệm tại thời điểm 8 giờ từ viên quy ước, mẫu viên 2 và mẫu viên 3 lần lượt là 90%, 40% và 70%, DC ở 3 mẫu viên không bị phân hủy trong môi trường dung dịch đệm phosphat pH 7,4 Kết quả này cho thấy viên nén sử dụng polyme

thiện đáng kể độ ổn định của DC trong môi trường dung dịch HCl pH 1,2 nên có

tiềm năng diệt trừ H.P

Năm 2013, Emara L H., Abdou A R và cộng sự [27] tiến hành nghiên cứu

thiết kế đánh giá khả năng GPDC in vitro viên nén KDSH nổi AMOX tại dạ dày sử

dụng hệ thống thông qua tế bào bằng cách bào chế viên nén KDSH nổi với thành phần: AMOX (bột), Polyox WSR 1105, calci carbonat, natri hydrocarbonat, lactose

giá độ ổn định của DC trong môi trường dung dịch HCl pH 1,2 bằng phương pháp

phương pháp hệ thống vòng mở qua tế bào (USP 4) và phương pháp hòa tan trong

GPDC đưa ra kết luận sử dụng hệ thống vòng mở qua tế bào có thể được áp dụng để

đánh giá khả năng GPDC của chế phẩm bào chế dạng viên nén KDSH nổi có chứa

Năm 2011, Arora và cộng sự [14] đã nghiên cứu bào chế hạt nano AMOX

Box

được lựa chọn có thành phần: chitosan (0,06%), AMOX (0,01%), Pluronic F-127

1.4.2 Các nghiên c ứu trong nước

Năm 2013, Vũ Thị Thúy [9] cùng cộng sự đã tiến hành bào chế vi cầu

đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng như chỉ tiêu mất khối lượng do làm khô, tỷ lệ VCH, hàm lượng dược chất, tỷ trọng biểu kiến, khả năng trương nở và thử nghiệm

đến 6 giờ (89,72%)

Năm 2014, Nguyễn Thị Huyền [8] cùng cộng sự đã nghiên cứu bào chế viên

Polyox WSR làm tá dược kết dính Với mục tiêu cải thiện độ ổn định của AMOX trong môi trường acid dịch vị nghiên cứu đã phối hợp thêm tá dược kiềm nhôm

giá độ ổn định của mẫu viên nén bào chế theo công thức tối ưu F15 cho thấy hằng

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu và phương tiện nghiên cứu

2.1.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu

Bảng 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu

STT Nguyên liệu Nguồn gốc TCCL

(PEO 5.000.000)

Mỹ

2.1.2 Động vật thí nghiệm

điều kiện có kiểm soát và chế độ ăn đầy đủ Trước khi thí nghiệm để thỏ nhịn đói

2.1.3 Thi ết bị nghiên cứu

- Máy siêu âm ULTRASONIC LC 60H

- Cân phân tích SARTORIUS

- Rây 180, 250 µm

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp bào chế

2.2.1.1 Bào ch ế vi cầu amoxicilin kết dính sinh học

các bước sau:

Chu ẩn bị dung dịch polyme:

Ph ối hợp AMOX vào dung dịch polyme:

ml nước rồi phối hợp với dung dịch polyme đã chuẩn bị, tráng sạch cốc, gộp dịch tráng

Chu ẩn bị môi trường nhỏ giọt:

Môi trường nhỏ giọt không có chitosan (1): 300 ml dung dịch calci clorid 10% (kl/tt)

Môi trường nhỏ giọt có phối hợp thêm chitosan (2):

T ạo vi cầu:

2.2.1.2 Bào ch ế viên nang chứa vi cầu amoxicilin kết dính sinh học

dược chất 250 mg sử dụng phương pháp đóng khối lượng

mvc = 250

C: hàm lượng AMOX trong vi cầu

2.2.2 Phương pháp đánh giá hiệu suất tạo vi cầu và tỷ lệ vi cầu hóa

- Hi ệu suất của quá trình bào chế vi cầu được tính theo công thức:

Trong đó: H: Hiệu suất tạo vi cầu (%)

- T ỷ lệ vi cầu hóa: là tỷ lệ giữa lượng dược chất có trong vi cầu với lượng dược

Trong đó:

2.2.3 Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng vi cầu

2.2.3 .1 Xác định kích thước tiểu phân và chỉ tiêu mất khối lượng do làm khô

1,4mm

2.2.3 2 Đánh giá khả năng trơn chảy của vi cầu

đều đặn 10 nhịp ghi thể tích thô, gõ đều đặn đến thể tích không đổi ghi thể tích biểu

2.2.3 3 Định lượng

Để định lượng hàm lượng DC trong vi cầu bào chế nghiên cứu đã sử dụng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại ở bước sóng 272 nm và phương pháp HPLC Trong đó, phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại được dùng để định lượng DC trong môi trường nước trong thử nghiệm hòa tan; phương pháp HPLC được dùng để đánh giá độ ổn định của DC trong các môi trường có pH khác nhau

- Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại: Hàm lượng AMOX trong

viên được xác định bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại ở bước sóng

272 nm

- Phương pháp HPLC:

+ Cột sắc ký: Cột ZORBAX Eclipse XDB - CN kích thước cột 4,6 × 150

mm, đường kính hạt nhồi 5 µm, bảo vệ cột ZORBAX XDB - CN (4,6×12,5

Cân chính xác 120 mg bột AMOX, hòa tan hoàn toàn bằng dung dịch đệm phosphat pH 5,0 trong bình định mức 100 mL, bổ sung vừa đủ thể tích, thu được

để thu được mẫu chuẩn có nồng độ 60 µg/mL Lọc qua màng lọc 0,45 µm Sau đó

 Mẫu thử

30 phút Trong quá trình siêu âm, dùng đá lạnh để duy trì nhiệt độ trong bể siêu âm dưới 40°C Dùng dung dịch đệm phosphat pH 5,0 tráng cốc dồn tất cả dịch và cắn vào bình định mức ở trên, thêm dung dịch phosphat pH 5,0 vừa đủ đến vạch Hút chính xác 2,0 ml vào bình định mức 50 ml rồi thêm dung dịch đệm phosphat pH 5,0 vừa đủ đến

𝑺𝒄𝒉 𝒎𝒕𝒉 𝑭𝒄𝒉Trong đó:

2.2.3 4 Đánh giá độ hòa tan của vi cầu amoxicilin kết dính sinh học

theo điều kiện và yêu cầu trong chuyên luận viên nén amoxicilin giải phóng kéo dài

- Tiến hành thử nghiệm trong 5 giờ, lấy mẫu ở các khoảng thời gian 1 giờ, 3

hoàn toàn trong 200ml nước cất

α: Độ pha loãng

sau:

m: Lượng AMOX trong vi cầu bào chế (mg)