Xây dựng phương pháp định lượng lanzoprazol trong huyết tương động vật thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGỌC THẮNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG LANSOPRAZOL TRONG HUYẾT TƯƠNG ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGỌC THẮNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG LANSOPRAZOL TRONG HUYẾT TƯƠNG ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC- ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60720410 Người hướng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Ngọc Chiến TS. Trần Nguyên Hà HÀ NỘI 2013 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, trước tiên tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy, cô hướng dẫn là TS. Nguyễn Ngọc Chiến và TS. Trần Nguyên Hà- Trường Đại học Dược Hà Nội, thầy cô đã hướng dẫn, chỉ bảo tận tình ngay từ khi tôi mới nhận đề tài. Tôi xin cảm ơn Đảng uỷ, chỉ huy trung tâm Kiểm nghiệm nghiên cứu Dược Quân đội- Cục Quân y đã quan tâm, tạo thời gian và mọi điều kiện thuận lợi nhất để tôi hoàn thành khoá học và luận văn. Xin chân thành cảm ơn Khoa kiểm nghiệm Hoá học, Khoa kiểm nghiệm Vật lý, Ban kế hoạch Vật tư thuộc trung tâm Kiểm nghiệm Nghiên cứu Dược Quân đội đã tạo điều kiện về hoá chất, trang thiết bị để tôi thực hiện luận văn này. Tôi xin cảm ơn viện công nghệ Dược phẩm Qu ốc gia, Bộ môn Dược lực- Trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn NCS Lương Quang Anh- Viện bỏng Quốc gia và gia đình, bạn bè, đồng nghiệp đã ủng hộ, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và tiến hành luận văn. Hà Nội, ngày 25 tháng 8 năm 2013 Học viên Vũ Ngọc Thắng MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1: TỔNG QUAN 3 1.1. TỔNG QUAN VỀ LANSOPRAZOL 3 1.1.1. Tính chất 3 1.1.2. Dược lý và cơ chế tác dụng 3 1.1.3. Các phương pháp định lượng Lansoprasol 5 1.1.3.1. Định lượng trong dịch hòa tan 5 1.1.3.2. Định lượng trong huyết tương 8 1.1.3.3. Một số phương pháp chiết LPZ trong huyết tương khác 11 1.1.4. Một số nghiên cứu về sinh khả dụng của LPZ 12 1.2. YÊU CẦU CƠ BẢN CỦA PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH MẪU SINH HỌ C 15 1.2.1. Tính đặc hiệu 15 1.2.2. Đường chuẩn và khoảng tuyến tính 15 1.2.3. Độ đúng và độ chính xác 16 1.2.4. Giới hạn định lượng (LLOQ) 16 1.2.5. Độ ổn định của mẫu thử 17 1.2.6. Tỷ lệ thu hồi 17 1.2.7. Mẫu chuẩn kiểm tra 17 1.2.8. Phân tích mẫu thử 17 1.3. SINH KHẢ DỤNG VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG 17 1.3.1. Phân tích dược động học 18 1.3.2. Tính toán sinh khả dụng 19 1.3.2.1. Dùng đơn liều 19 1.3.2.2. Dùng đa liều 19 Chương 2. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU21 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 21 2.1.1. Dược phẩm 21 2.1.2. Chất chuẩn, hóa chất, dung môi 21 2.1.3. Dụng cụ, máy móc 21 2.1.4. Đối tượng nghiên cứu 22 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1. Khảo sát điều kiện sắc ký 22 2.2.2. Dung dị ch chuẩn và chuẩn nội 23 2.2.3. Phương pháp chiết 24 2.2.4. Thẩm định phương pháp phân tích 24 2.2.4.1. Thẩm định tính đặc hiệu- chọn lọc 24 2.2.4.2. Thẩm định độ tuyến tính 24 2.2.4.3. Thẩm định độ đúng và độ lặp lại 25 2.2.4.4. Giới hạn định lượng (LLOQ) 26 2.2.4.5. Độ ổn định 26 2.2.4.6. Hiệu suất chiết (Tỷ lệ thu hồi) 26 2.2.5. Đánh giá sinh khả dụng của viên nang LPZ 30 mg 27 2.2.5.1. Thiết kế thí nghiệm 27 2.2.2.2. Phương pháp lấy mẫu 28 2.2.2.3. Phương pháp chiết và định lượng LPZ 28 2.2.2.4. Phương pháp xác định một số thông số dược động học 28 2.2.2.5. Phương pháp so sánh các thông số dược động học 29 2.2.7. Phương pháp xử lý số liệu 29 Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 3.1. ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ VÀ TÍNH TƯƠNG THÍCH CỦA HỆ THỒ NG 31 3.1.1. Khảo sát điều kiện sắc ký 31 3.1.2. Tính tương thích của hệ thống 36 3.2. PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẪU 37 3.2.1. Xử lý mẫu bằng cách tủa protein 37 3.2.2. Xử lý mẫu huyết tương bằng phương pháp chiết lỏng- lỏng 39 3.2.2.1. Chiết bằng hỗn hợp gồm dicloromethan và diethyl ether 39 3.2.2.2. Chiết bằng tert- butyl methyl ether 41 3.3. THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG LPZ TRONG HUYẾT TƯƠNG 42 3.3.1. Thẩm định tính chọn lọc, đặ c hiệu 42 3.3.2. Thẩm định độ tuyến tính 44 3.3.3. Thẩm định độ đúng, độ lặp lại 44 3.3.4. Giới hạn định lượng (LLOQ) 45 3.3.5. Độ ổn định của LPZ 47 3.3.5.1. Độ ổn định của dung dịch chuẩn gốc LPZ 47 3.3.5.2. Độ ổn định của LPZ trong huyết tương 47 3.3.6. Hiệu suất chiết 48 3.3.6.1. Hiệu suất chiết của LPZ 48 3.3.6.2. Hiệu suất chiết của chuẩn nội PPZ 49 3.3.7. Định lượng LPZ trong huyết tương chó được cho uống LPZ 49 3.4. NGHIÊN CỨU SKD VÀ CỦA VIÊN NANG LPZ 30 mg TRÊN CHÓ 50 3.4.1. Phân tích mẫu huyết tương chó được uống LPZ 50 3.4.2. Phân tích và so sánh các thông số dược động học 53 3.4.2.1. Phân tích và so sánh C max 55 3.4.2.2. Phân tích và so sánh AUC 0- t 56 3.4.2.3. Phân tích và so sánh AUC 0- ∞ 57 3.4.2.4. Phân tích và so sánh T max 58 Chương 4. BÀN LUẬN 60 4.1. PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG LPZ TRONG HUYẾT TƯƠNG 60 4.2. ĐÁNH GIÁ SKD CỦA LPZ TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM 64 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN : Acetonitril AUC : area under curve (Diện tích dưới đường cong) BP : British Pharmacopoeia (Dược điển Anh) C max : Nồng độ đỉnh ĐK : Điều kiện FDA : Food and Drug Administration (Cơ quan quản lý thực phẩm và thuốc Hoa Kỳ) HPLC : High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu năng cao) HPTLC : High performance thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao) HT : Huyết tương LC/MS : Liquid chromatography/Mass spectrometry (Sắc ký lỏng ghép nối khối phổ) LLOQ : Lower limit of quantification (Giới hạn định lượng dưới) LPZ : Lanzoprazol MeOH : Methanol MP : Mobile phase (Pha động) OPZ : Omeprazol PA : Purity analysis (Tinh khiết phân tích) PPI : Proton Pump Inhibitor (Ức chế bơm proton) PPZ : Pantoprazol RP- HPLC : Reverse phase high performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng pha đảo hiệu năng cao) RPZ : Rabeprazol RSD : Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) SKD : Sinh khả dụng SKĐ : Sắc ký đồ TBME : Tert- butyl methyl ether TĐSH : Tương đương sinh học T max : Thời gian đạt nồng độ đỉnh USP : The United states pharmacopeia (Dược điển Mỹ) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2. 1. Dãy nồng độ thẩm định độ tuyến tính 25 Bảng 2. 2. Bố trí thí nghiệm đánh giá SKD của viên nang LPZ 30 mg 27 Bảng 3. 1: Kết quả tính tương thích của hệ thống 37 Bảng 3. 2: Hiệu suất chiết LPZ khỏi HT khi xử lý mẫu bằng phương pháp tủa protein 39 Bảng 3. 3: Hiệu suất chiết của LPZ khi chiết bằng hỗn hợp diethylether- dicloromethan 41 Bảng 3. 4: Hiệu suất chiết củ a PPZ khi chiết bằng hỗn hợp diethylether- dicloromethan 41 Bảng 3. 5: Kết quả thẩm định độ tuyến tính (n = 6) 44 Bảng 3. 6: Kết quả độ đúng, độ lặp lại trong ngày 45 Bảng 3. 7: Kết quả độ đúng, độ lặp lại khác ngày (3 ngày) 45 Bảng 3. 8: Kết quả nghiên cứu độ ổn định của dung dịch chuẩn gốc 47 Bảng 3. 9: Kết quả nghiên cứu độ ổn định c ủa LPZ trong huyết tương 48 Bảng 3. 10: Hiệu suất chiết LPZ trong huyết tương (n = 6) 48 Bảng 3. 11: Hiệu suất chiết của LPZ trong huyết tương 49 Bảng 3. 12: Nồng độ LPZ (ng/ml) trong huyết tương chó sau khi uống viên đối chiếu 51 Bảng 3. 13: Nồng độ LPZ (ng/ml) trong huyết tương chó sau khi uống viên thử 52 Bảng 3. 14: Các thông số dược động học của thuốc thử và thuốc đối chiếu . 54 Bảng 3. 15: Kết quả phân tích phương sai C max 55 Bảng 3. 16: Kết quả phân tích phương sai AUC 0- t 56 Bảng 3. 17: Kết quả phân tích phương sai cho AUC 0-∞ 57 [...]... [39] 1.1.3 Các phương pháp định lượng Lansoprasol Nhiều phương pháp khác nhau định lượng LPZ trong dịch hòa tan và trong huyết tương đã được công bố 1.1.3.1 Định lượng trong dịch hòa tan 5 • Phương pháp điện di mao quản: Yi-Hui Lin và Shou-Mei Wu đã nghiên cứu định lượng LPZ trong viên nang LPZ 30 mg bằng phương pháp điện di mao quản Phương pháp có khoảng tuyến tính từ 5 - 100 mM với hệ số tương quan r... qui định liên quan đến đánh giá tương đương sinh học của các chế phẩm thuốc Trong đó phương pháp định lượng thuốc trong dịch sinh học là công cụ quan trọng trong đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học các chế phẩm bào chế Để góp phần nghiên cứu sinh khả dụng và đánh giá tương đương sinh học của các chế phẩm chứa Lansoprazol, đề tài: "Xây dựng phương pháp định lượng Lansoprazol trong huyết tương. .. định lượng bằng một số phương pháp khác: Phương pháp UV - VIS [21], [22], phương pháp cực phổ [12], phương pháp đo động học phản ứng [29] 1.1.3.2 Định lượng trong huyết tương - Maryam Noubarani và cộng sự đã nghiên cứu phương pháp định lượng các PPIs: Omeprazol (OPZ), PPZ, LPZ và RPZ trong huyết tương bằng HPLC với cột C18, 150 mm x 4,6 mm; 5 µm; pha động là hỗn hợp gồm đệm phosphat (Kali dihydrophosphat)... kiện sắc ký khác định lượng LPZ trong huyết tương: Cột pha đảo, 250mm x 4,6 mm Pha động: Dung dịch NaClO4 0,5 M- ACN- MeOH (6: 3: 1, tt/tt/tt) Sử dụng OPZ làm chuẩn nội [25] - LPZ cũng có thể định lượng trong huyết tương bằng phương pháp LC/MS, LC/MS/MS [10], [32], [38] 1.1.3.3 Một số phương pháp chiết LPZ trong huyết tương khác - Tủa protein bằng ACN [11], sau đó ly tâm 15000 vòng trong 10 phút ở 50C,... giá tương đương sinh học của các chế phẩm chứa Lansoprazol, đề tài: "Xây dựng phương pháp định lượng Lansoprazol trong huyết tương động vật thực nghiệm" được thực hiện với mục tiêu: 1 Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng Lansoprazol trong huyết tương chó bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao 2 Ứng dụng vào đánh giá sinh khả dụng của Lansoprazol trên chó 2 Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN... hiện trong huyết tương là 1,80 ng/ml, giới hạn định lượng là 5,60 ng/ml [11] Các phương pháp định lượng LPZ trong dịch hoà tan trên đều có giới hạn phát hiện (LLOD) và giới hạn định lượng (LLOQ) thấp (LLOD khoảng 7 từ 1,5 đến 3 ng/ml, LLOQ từ 5 đến 10 ng/ml) là do nền mẫu đơn giản, ít yếu tố ảnh hưởng đến sự tách LPZ qua cột sắc ký Ngoài ra, LPZ cũng được định lượng bằng một số phương pháp khác: Phương. .. 10 phút + Định lượng OPZ và LPZ thì PPZ được sử dụng làm chuẩn nội, trong định lượng PPZ và RPZ thì LPZ được dùng làm chuẩn nội + Phương pháp có khoảng tuyến tính với PPZ là 20- 4000 ng/ml và 20- 3000 ng/ml với LPZ Phần trăm tìm lại là ≥ 80%, giới hạn định lượng dưới là 20 ng/ml với cả PPZ và LPZ Sai số trong các ngày và trong một ngày nhỏ hơn 9,2% + Phương pháp chiết: Lấy 1ml mẫu huyết tương vào ống... PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Khảo sát điều kiện sắc ký Để xây dựng phương pháp định lượng LPZ trong huyết tương, các thông số về điều kiện sắc ký sau được khảo sát: Pha động (thành phần và tỷ lệ các thành phần trong pha động, pH của pha động) , bước sóng phát hiện, tốc độ dòng…Trên cơ sở tham khảo tài liệu, phân tích những ưu điểm, nhược điểm của các phương pháp phân tích trên, đề tài đã khảo sát một số điều... ether, lắc trong 3 phút sau đó ly tâm 3000 vòng/phút trong 3 phút Lớp dung môi hữu cơ được chuyển vào ống thủy tinh 6 ml và bốc hơi ở 370C dưới dòng khí nitơ , cắn được hòa tan trong 200 µl pha động, tiêm 50 µl dung dịch này vào hệ thống sắc ký [27] - H.A Dugger và cộng sự đã đánh giá tương đương sinh học giữa Lanfast® và Lansor®, sử dụng phương pháp định lượng LPZ trong huyết tương bằng phương pháp HPLC... độ thực nhất của chất phân tích trong mẫu sinh học được xác định bằng phương pháp đặc biệt Điều đó có thể được biểu thị bằng khả năng tìm lại tương đối, và phải nằm trong khoảng 85-115%, nhưng có thể chấp nhận 80-120% đối với điểm gần giới hạn định lượng [3], [16], [17] 1.2.4 Giới hạn định lượng (LLOQ) Giới hạn định lượng, hay còn gọi là độ nhạy, là nồng độ thấp nhất của đường chuẩn có thể xác định . " ;Xây dựng phương pháp định lượng Lansoprazol trong huyết tương động vật thực nghiệm& quot; được thực hiện với mục tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượ ng Lansoprazol trong huyết. 1.1.3. Các phương pháp định lượng Lansoprasol 5 1.1.3.1. Định lượng trong dịch hòa tan 5 1.1.3.2. Định lượng trong huyết tương 8 1.1.3.3. Một số phương pháp chiết LPZ trong huyết tương khác. Các phương pháp định lượng Lansoprasol Nhiều phương pháp khác nhau định lượng LPZ trong dịch hòa tan và trong huyết tương đã được công bố. 1.1.3.1. Định lượng trong dịch hòa tan 6 • Phương