1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng

85 809 1

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 85
Dung lượng 1,89 MB

Nội dung

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG VĂN MẠNH XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ GEN E6 VÀ L1 CỦA HPV VÀ GEN EBNA-1 CỦA EBV ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG CHUẨN ĐOÁN UNG THƯ CỔ TỬ CUNG VÀ VÒM MŨI HỌNG Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.80 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS. Lê Thanh Hoà Thái Nguyên - 2011 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ala Alanine bp Base pair BL Burkitt’s Lymphoma CTC Cổ tử cung E Early region EBV Epstein-Barr Virus Gly Glycine gs-PCR Group-specific PCR HPV Human papilloma virus HP6 Hải Phòng 6 (ký hiệu mẫu) L Late region LCL Lymphoblastoid LCR Long control region LMP Latent membrane protein MHC Major Histocompatibility Complex MT7 Miền trung 7 (ký hiệu mẫu) NPC Nasopharyngeal carcinoma p53 Protein 53 PV Papilloma virus RB Retinoblast TR Terminal repeat ts-PCR Type- specific PCR UICC Universal Integrated Circuit Card UTBM Carcinoma VCA Viral capsid antigen VMH Vòm mũi họng WHO World Health Organization Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng trong luận văn Trang Bảng 1.1 Tình hình ung thư CTC trên thế giới (không tính Châu Phi) 5 Bảng 2.1 Thành phần và số lượng từng thành phần tham gia phản ứng multiplex-PCR HPV-16/HPV-18 38 Bảng 2.2 Chu trình nhiệt độ trong phản ứng multiplex-PCR HPV16/HPV18 39 Bảng 2.3 Thành phần và số lượng từng thành phần tham gia phản ứng PCR gen E6 cua HPV-16 39 Bảng 2.4 Chu trình nhiệt độ trong phản ứng PCR của gen EBNA-1 40 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng nối sản phẩm PCR vào vector tách dòng (pCR2.1TOPO) 43 Bảng 2.6 Thành phần của phản ứng cắt plasmid tái tổ hợp bằ ng enzym EcoRI 47 Bảng 2.7 Thành phần phản ứng to DNA sợi đơn 49 Bảng 2.8 Chu trì nh nhiệ t củ a phả n ứ ng giả i trì nh tự 49 Bảng 3.1 Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi gen E6 của mẫu PK12 56 Bảng 3.2 Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi gen L1 của mẫu PS16 57 Bảng 3.3 Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi nucleotide gen EBNA-1 của EB17, EB18, EB19 và EB20 64 Bảng 3.4 Kết quả xác định phân týp của các chủng EBV qua phân tích acid amin ti vị trí 487 của EBNA-1 66 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình trong luận văn Trang Hình 1.1 Bản đồ phân bố dịch tễ theo độ tuổi của người có khả năng nhiễm ung thư cổ tử cung của các châu lục 4 Hình 1.2 Cơ chế nhiễm HPV (Human papilloma virus) trong ung thư cổ tử cung 9 Hình 1.3 Mối quan hệ phả hệ và nguồn gốc của 101 Papillomavirus dựa trên so sánh chuỗi nucleotid của gene capsid L1 11 Hình 1.4 Human Papillomavirus chụp dưới kính hiển vi điện tử 12 Hình 1.5 Cấu trúc phân tử của hệ gene HPV -16. 13 Hình 1.6 Quá trình nhân lên của HPV 15 Hình 1.7 Sơ đồ minh họa quá trình tiến triển của EBV trong cơ thể bị nhiễm 27 Hình 1.8 Cấu trúc hệ gene EBV dạng khép lại thành mạch vòng (a) và dạng mạch thẳng (b) 29 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình nghiên cứu phân tích gene EBNA-1 của virus EBV và E6 của virus HPV16 và L1 của HPV18 34 Hình 2.2 Cấ u trú c vector pCR2.1-TOPO® (Invitrogen) 43 Hình 3.1 Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm 51 Hình 3.2 Kiểm tra sản phẩm multiplex-PCR sử dụng cùng lúc 2 cặp mồi (E6F-E6R và HP18F-HP18R) với khuôn DNA tổng số của các mẫu PS16, PK12, PK11, PK10. 52 Hình 3.3 Kiểm tra sản phẩm tách dòng đoạn gen E6 của mẫu PK12 (bản A) và đoạn gen L1 của mẫu PS16 (bản B). 53 Hình 3.4 Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen E6 của mẫu PK12 (HPV-16). 54 Hình 3.5 Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen L1 của mẫu PS16 (HPV18). 54 Hình 3.6 Trình bày chuỗi gen E6 của typ HPV-16. 55 Hình 3.7 Trình bày chuỗi gen L1 của typ HPV-18 55 Hình 3.8 Kết quả bước đầu phát hiện HPV16/HPV18 bằng phương pháp đa mồi multiplex-PCR. 59 Hình 3.9 Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm EBV 61 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 3.10 Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di gen EBNA-1 61 Hình 3.11 Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen EBNA-1 63 Hình 3.12 Kết quả chuỗi gen EBNA-1 của EB17 được thu nhận sau giải trình tự 63 Hình 3.13 So sánh một phần trình tự acid amin EBNA-1 của 13 chủng nghiên cứu 65 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chƣơng 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1.1. UNG THƢ CỔ TỬ CUNG VÀ HUMAN PAPILLOMA VIRUS (HPV) 4 1.1.1 Dịch tễ học ung thư cổ tử cung 4 1.1.1.1. Trên thế giới 4 1.1.1.2. Tình hình ung thư cổ tử cung ở Việt Nam 6 1.1.1.3. Các yếu tố có nguy cơ đối với ung thư CTC 6 1.1.1.4. Human papilloma virus và bệnh ung thư cổ tử cung 6 1.1.2. Phân loại và đặc tính sinh học của Papilloma virus 9 1.1.2.1. Phân loại Papilloma virus 9 1.1.2.2. Đặc tính sinh học của Human Papillomavirus 12 1.1.2.3. Quá trình nhân lên của HPV 14 1.1.2.4. Cơ chế gây ung thư cổ tử cung của HPV 16 1.1.3. Chẩn đoán ung thư CTC 17 1.1.3.1. Chẩn đoán tế bào học 17 1.1.3.2. Chẩn đoán dựa trên phân tích mRNA 19 1.1.3.3. Định týp HPV bằng sinh học phân tử 19 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.1.4. Tầm quan trọng của việc nghiên cứu sinh học phân tử và xây dựng phương pháp PCR chẩn đoán nhanh HPV gây ung thư cổ tử cung ở Việt Nam 21 1.2. UNG THƢ VÒM MŨI HỌNG VÀ EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) 22 1.2.1. Dịch tễ học ung thư vòm mũi họng 22 1.2.1.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới 22 1.2.1.2 Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam 23 1.2.2. Đặc tính sinh học của Epstein-Bar virus (EBV) 24 1.2.2.1. Phát hiện virus Epstein - Barr và ung thư VMH 24 1.2.2.2. Đặc điểm phân loại và cấu trúc EBV 25 1.2.2.3. Sự nhân lên, tàng nhiễm và khả năng gây ung thư của EBV… 26 1.2.2.4. Sinh học phân tử và sắp xếp hệ gene của EBV 28 1.2.2.5. Gene và sản phẩm của gene EBNA-1 29 1.2.3. Tầm quan trọng của việc nghiên cứu sinh học phân tử và xây dựng phương pháp PCR chẩn đoán sớm EBV ung thư vòm mũi họng ở Việt Nam 30 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1. Đối tƣợng nghiên cứu 33 2.2. Dụng cụ, trang thiết bị nghiên cứu và hoá chất nghiên cứu 33 2.2.1. Dụng cụ, trang thiết bị 33 2.2.2. Hoá chất 33 2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu 34 2.4. Quy trình nghiên cứu 35 2.4.1. Lấy mẫu và bảo quản 35 2.4.2. Kỹ thuật tách chiết DNA tổng số 35 2.4.3. Quy trình phản ứng PCR và kiểm tra sản phẩm PCR 37 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.4.3.1. Thiết kế mồi………………………………………………. 37 2.4.3.2. Quy trình phản ứng PCR 38 2.4.3.3. Kỹ thuật phát hiện sản phẩm PCR 40 2.4.3.4. Tinh sạch sản phẩm PCR 41 2.4.4. Phương pháp tạo dòng sản phẩm PCR 42 2.4.4.1. Tạo vectơ tái tổ hợp 42 2.4.4.2. Chuyển nạp…………………………………… …………… 43 2.4.4.3. Chọn lọc vi khuẩn tái tổ hợp 44 2.4.4.4. Tách DNA plasmid tái tổ hợp 45 2.4.4.5. Kiểm tra DNA tái tổ hợp 47 2.4.5. Giải trình trình tự và xử lý số liệu 48 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 3.1. Kết quả thu nhận, giải trình trình tự và xác định gen E6 của HPV-16 và L1 của HPV-18 51 3.1.1. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm 51 3.1.2. Kết quả thực hiện phản ứng Multiplex-PCR phát hiện HPV-16 và HPV-18 52 3.1.3. Kết quả tách dòng và giải trình tự các sản phẩm HPV-16 và HPV-18 từ các mẫu kiểm tra 53 3.1.4. Kết quả giải trình tự và thu nhận chuỗi gen E6 của HPV-16 và chuỗi gen L1 của HPV-18 54 3.1.5. Kết quả truy cập Ngân hàng gen xác định chuỗi gen E6 của HPV16 và L1 của HPV18 56 3.1.6. Kết quả bước đầu phát hiện HPV-16 và HPV-18 bằng phương pháp đa mồi multiplex-PCR 59 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.2. Kết quả thu nhận, giải trình trình tự và xác định gen EBNA – 1 của EBV 60 3.2.1. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm 60 3.2.2. Kết quả thực hiện phản ứng PCR 61 3.2.3. Kết quả giải trình tự và thu nhận chuỗi gen EBNA-1 của EBV 62 3.2.4. Kết quả truy cập Ngân hàng gen xác định chuỗi gen EBNA-1 của EBV 63 3.2.5. Kết quả xác định phân týp EBV qua phân tích vị trí acid amin số 487 của EBNA-1 thu nhận với chuỗi gen tương ứng của các chủng Việt Nam và thế giới 64 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 4.1. KẾT LUẬN 69 4.2. KIẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, trên thế giới cũng như ở Việt Nam, ung thư (cancer) là một trong những nguyên nhân gây tỷ lệ tử vong cao nhất ở người, chiếm khoảng 12% trong tổng số trường hợp tử vong hàng năm trên thế giới, đứng thứ 2 sau tỷ lệ tử vong của các bệnh lí về tim - mạch và ngày càng có xu hướng gia tăng. Bệnh ung thư nếu không được phát hiện sớm và điều trị kịp thời sẽ dẫn đến nguyên nhân gây tử vong, do chưa có phương pháp điều trị đặc hiệu. Bệnh có thể xảy ra ở mọi lứa tuổi, ở cả hai giới (nam và nữ) và ở tất cả các mô, các cơ quan trong cơ thể. Đặc biệt, ung thư cổ tử cung (CTC) và ung thư vòm mũi họng (VMH) là hai trong số 5 loại ung thư có tỷ lệ tử vong cao nhất ở Việt Nam và các quốc gia đang phát triển trong khu vực. Trong đó, ung thư CTC đứng thứ 2 trong số các ung thư và là nguyên nhân gây tử vong cao nhất cho phụ nữ ở Việt Nam [1], [9]. Bên cạnh đó, ung thư VMH cũng là một trong 5 loại ung thư phổ biến nhất ở người và là loại hay gặp nhất trong ung thư vùng tai mũi họng ở các nước vùng Đông nam Á và phía nam Trung Quốc [23], [56]. Nguyên nhân gây ra ung thư rất phức tạp, liên quan đến thể địa, tập quán, thói quen và môi trường sống. Trong đó, một số yếu tố đã được coi là liên quan chặt chẽ với việc gây ra ung thư như: yếu tố vật lí (phóng xạ), hóa chất độc, các gốc tự do và đặc biệt ngày nay đã phát hiện ra vai trò của các virus trong tiến triển ung thư. Các công trình nghiên cứu gần đây đã chứng minh virus là nguyên nhân gây ra hai loại ung thư này ở người. Nhiều nghiên cứu đã phát hiện sự hiện diện của HPV (Human papilloma virus) trong hơn 95% các trường hợp ung thư cổ tử cung [62], do đó HPV được coi là nguyên nhân gây bệnh ung thư CTC [9]. Các nghiên cứu về mối liên quan giữa Epstein-Barr Virus (EBV) và ung thư VMH cũng đã cho thấy sự biểu hiện của kháng nguyên virus trong các giai đoạn của bệnh, vai trò quan trọng của EBV trong bệnh học cũng như trong quá trình sàng lọc chẩn đoán điều trị, theo dõi và tiên lượng bệnh [24]. [...]... những công trình nghiên cứu có liên quan, những kết quả mới nhất trong lĩnh vực nghiên cứu về Human papilloma virus (HPV) và Epstein-Barr Virus (EBV) , chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Xác định trình tự gen E6 và L1 của HPV và gen EBNA-1 của EBV để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng với mục tiêu nghiên cứu: 1 Thu nhận chuỗi gen E6 của HPV- 16 và chuỗi gen L1 của HPV- 18,... việc chẩn đoán phát hiện sớm HPV, bước đầu định hướng ứng dụng các phương pháp sinh học phân tử trong việc chẩn đoán ung thư CTC và xác định týp HPV hay gặp ở nước ta 1.2 UNG THƢ VÒM MŨI HỌNG VÀ EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) 1.2.1 Dịch tễ học ung thƣ vòm mũi họng Ung thư vòm mũi họng NPC (Nasopharyngeal carcinoma) là một khối u ác tính xuất phát từ lớp biểu mô phủ của vùng vòm mũi họng [53] Loại ung thư này... QUAN TÀI LIỆU 1.1 UNG THƢ CỔ TỬ CUNG VÀ HUMAN PAPILLOMA VIRUS (HPV) 1.1.1 Dịch tễ học ung thƣ cổ tử cung Ung thư cổ tử cung là bệnh ác tính thư ng gặp thứ hai ở phụ nữ trên toàn thế giới và là một trong số các nguyên nhân tử vong hàng đầu liên quan đến bệnh ung thư cho phụ nữ ở các nước đang phát triển với khoảng 500.000 ca mới và 250.000 ca chết mỗi năm Khoảng 80% số ca ung thư cổ tử cung xảy ra ở các... thƣ cổ tử cung của HPV Khái niệm về cơ chế gây ung thư cổ tử cung của HPV Cơ chế HPV gây ung thư CTC đã được Massimi và Banks (1997) giải thích như sau: ở người và động vật, có hai protein điều chỉnh sự phân chia và mức độ phát triển tế bào là RB (retinoblast) và p53 (protein điều hoà khối u) Khi hai gen E6 và E7 của HPV tổng hợp protein, làm cho tự nó tiếp xúc với RB và p53 sẽ gây cản trở quá trình. .. nhiễm tự nhiên HPV (Hình 1.2) Những nghiên cứu ở giai đoạn xâm lấn và giai đoạn trước xâm lấn là cần thiết để dự đoán tác động tương lai của loại vắc-xin HPV- 16 /HPV- 18 và xét nghiệm HPV Phân tích xác định các chủng HPV trong ung thư cổ tử cung giai đoạn xâm lấn (ICC) cho thấy HPV- 16 là phổ biến nhất và HPV- 18 loại thứ hai phổ biến, trong tất cả các châu lục Kết hợp giữa các trường hợp nhiễm HPV1 6 /HPV- 18,... học của Human Papillomavirus Năm 1974 - 1976, bắt đầu có sự nghiên cứu về HPV và chứng minh HPV là nguyên nhân gây ung thư CTC Nhưng đến những năm 1980, sự phát triển ứng dụng các kỹ thuật đã xác định DNA - HPV trong mô bệnh phẩm ung thư CTC [18], [19], [72] Những týp đầu tiên được phân lập là HPV- 16 và HPV- 18, và hệ gen của chúng chính là nguồn gen quan trọng trong nghiên cứu về HPV Virus Papilloma của. .. HPV và khi đã nhiễm thì tiến triển sẽ nhanh và nặng nề Bên cạnh đó, có sự gia tăng nồng độ kháng thể kháng HPV sau khi bị nhiễm tự nhiên, tuy nhiên nồng độ kháng thể này không đủ để gây đáp ứng miễn dịch bảo hộ cơ thể nhiễm Tổn thư ng dị sản hay ung thư cổ tử cung có một thời gian dài phát triển tại biểu mô và tại cổ tử cung Trung bình, khoảng 10- 20 năm cho sự tiến triển từ dị sản đến ung thư cổ tử. .. phân tử protein histon, các vùng gen HPV được định vị trên một sợi DNA Trong đó, L1 là gen mã hoá cho protein vỏ ngoài và cũng chính là thành phần kháng nguyên bề mặt của virus Gen E6 thuộc phân vùng gen thứ 2 (vùng sao chép sớm) của hệ gen HPV, tổng hợp protein E6 và các protein tương ứng, có vai trò quan trọng giúp cho sự nhân lên DNA của virus, tham gia cơ chế hình thành ung thư CTC Protein E6 của HPV. .. vòm mũi họng Các nghiên cứu này đã cho thấy sự biểu lộ của các kháng nguyên virus trong các giai đoạn của bệnh và vai trò quan trọng của virus Epstein-Barr trong bệnh học cũng như trong quá trình sàng lọc chẩn đoán, điều trị, theo dõi và tiên lượng bệnh [24], [30], [37], [40] 1.2.1.2 Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam Ở Việt Nam, ung thư vòm mũi họng ứng hàng đầu trong các ung thư Tai Mũi Họng và Đầu... hiệu theo týp hiện nay được sử dụng nhiều trong nghiên cứu, nhưng rất giới hạn trong sàng lọc bệnh phẩm đại trà, do chi phí còn rất cao 1.1.4 Tầm quan trọng của việc nghiên cứu sinh học phân tử và xây dựng phƣơng pháp PCR chẩn đoán nhanh HPV gây ung thƣ cổ tử cung ở Việt Nam Bệnh ung thư CTC là một bệnh phổ biến, có tỷ lệ tử vong cao trong các bệnh ung thư nói chung và ung thư đường sinh dục nữ nói riêng, . trình tự gen E6 và L1 của HPV và gen EBNA-1 của EBV để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng với mục tiêu nghiên cứu: 1. Thu nhận chuỗi gen E6 của HPV- 16 và chuỗi gen. chuỗi gen E6 của HPV- 16 và chuỗi gen L1 của HPV- 18 54 3.1.5. Kết quả truy cập Ngân hàng gen xác định chuỗi gen E6 của HPV1 6 và L1 của HPV1 8 56 3.1.6. Kết quả bước đầu phát hiện HPV- 16. phân tử và xây dựng phương pháp PCR chẩn đoán nhanh HPV gây ung thư cổ tử cung ở Việt Nam 21 1.2. UNG THƢ VÒM MŨI HỌNG VÀ EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV) 22 1.2.1. Dịch tễ học ung thư vòm mũi họng

Ngày đăng: 05/10/2014, 06:35

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
1. Phạm Thị Hoàng Anh, Nguyễn Mạnh Quốc, Nguyễn Bá Đức, Nguyễn Chấn Hùng (2001), “Tình hình bệnh ung thư ở Việt Nam năm 2000”, Tạp chí thông tin Y dược 2/2001, Bộ Y tế - Viện thông tin Y học Trung ương, tr. 3- 11 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tình hình bệnh ung thư ở Việt Nam năm 2000”, "Tạp chí thông tin Y dược 2/2001, Bộ Y tế - Viện thông tin Y học Trung ương
Tác giả: Phạm Thị Hoàng Anh, Nguyễn Mạnh Quốc, Nguyễn Bá Đức, Nguyễn Chấn Hùng
Năm: 2001
3. Trịnh Quang Diện (1995), Phát hiện các dị sản, loạn sản và ung thư cổ tử cung bằng phương phát tế bào học, Luận án Tiến sỹ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Phát hiện các dị sản, loạn sản và ung thư cổ tử cung bằng phương phát tế bào học
Tác giả: Trịnh Quang Diện
Năm: 1995
4. Trịnh Quang Diện (2002), Theo dõi bằng tế bào học và mô bệnh học các tế bào bào vẩy không điển hình ý nghĩa chưa xác định (ASCUS) gặp trong phát hiện tế học các tổn thương nội biểu mô và ung thư cổ tử cung, Chuyên đề ung thư học, Y học thực hành, Nhà xuất bản Y học, số 431, tr. 266- 269 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Chuyên đề ung thư học, Y học thực hành, Nhà xuất bản Y học, số 431
Tác giả: Trịnh Quang Diện
Nhà XB: Nhà xuất bản Y học
Năm: 2002
5. Đào Trung Dũng (2003), Chẩn đoán tế bào học ASCUS trong phát hiện sớm ung thư cổ tử cung, Luận văn Bác sỹ Y khoa, Trường Đại học Y Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Chẩn đoán tế bào học ASCUS trong phát hiện sớm ung thư cổ tử cung
Tác giả: Đào Trung Dũng
Năm: 2003
6. Phan Trường Duyệt, Đinh Thế Mỹ (2003), Lâm sàng sản phụ khoa, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr. 444- 448 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Lâm sàng sản phụ khoa
Tác giả: Phan Trường Duyệt, Đinh Thế Mỹ
Nhà XB: Nhà xuất bản Y học
Năm: 2003
7. Nguyễn Văn Đô, Phan Thị Phi Phi (2003), Xác định đột biến mất đoạn 30bp và đột biến điểm của gen EBV-LMP ở bệnh nhân ung thư vòm mũi họng Việt Nam, Hội nghị sinh học phân tử và hoá sinh toàn quốc, tr. 129-134 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Xác định đột biến mất đoạn 30bp và đột biến điểm của gen EBV-LMP ở bệnh nhân ung thư vòm mũi họng Việt Nam
Tác giả: Nguyễn Văn Đô, Phan Thị Phi Phi
Năm: 2003
8. Phạm Thị Hồng Hà (2000), Giá trị của phiến đồ âm đạo - cổ tử cung, soi cổ tử cung và mô bệnh học trong việc phát hiện sớm ung thư cổ tử cung, Luận văn Thạc sỹ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Giá trị của phiến đồ âm đạo - cổ tử cung, soi cổ tử cung và mô bệnh học trong việc phát hiện sớm ung thư cổ tử cung
Tác giả: Phạm Thị Hồng Hà
Năm: 2000
9. Lê Thanh Hoà (2006), Y - Sinh học phân tử, Quyển I, Nhà xuất bản y học, Hà Nội, tr. 64- 85 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Y - Sinh học phân tử, Quyển I
Tác giả: Lê Thanh Hoà
Nhà XB: Nhà xuất bản y học
Năm: 2006
10. Lê Thanh Hòa, Vũ Thị Tiến, Hoàng Thị Minh Châu, Lê Thanh Hà, Nguyễn Đình Phúc (2010), Xác định 3 phân typP-ala, P-thr và V-val của EBNA-1 ở EBV phân lập tại Việt Nam, Tạp chí Nghiên cứu Y học 70(5), tr. 8-12 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tạp chí Nghiên cứu Y học
Tác giả: Lê Thanh Hòa, Vũ Thị Tiến, Hoàng Thị Minh Châu, Lê Thanh Hà, Nguyễn Đình Phúc
Năm: 2010
11. Vương Tiến Hoà (2004), Một số vấn đề bệnh lý cổ tử cung, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Một số vấn đề bệnh lý cổ tử cung
Tác giả: Vương Tiến Hoà
Nhà XB: Nhà xuất bản Y học
Năm: 2004
12. Trần Phương Mai (1999), Nhận xét 89 trường hợp ung thư cổ tử cung tại Viện BVBM TSS trong 6 năm (1992- 1997), Tạp chí Y học thực hành số 1/1999, tr. 37- 39 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tạp chí Y học thực hành số 1/1999
Tác giả: Trần Phương Mai
Năm: 1999
13. Phan Thị Phi Phi (2005), Báo cáo tổng quan các đặc điểm sinh học chủ yếu gặp ở bệnh nhân ung thư vòm mũi họng Việt Nam và một số ứng dụng lâm sàng. Hội thảo chuyên đề ung thư vòm mũi họng, Hà Nội (07-09.11.2005) Sách, tạp chí
Tiêu đề: Hội thảo chuyên đề ung thư vòm mũi họng, Hà Nội
Tác giả: Phan Thị Phi Phi
Năm: 2005
14. Nguyễn Đình Phúc (2006), “Nghiên cứu chẩn đoán lâm sàng và gen virus Epstein – Barr trong ung thư vòm mũi họng’’, Luận án TS khoa học Y học – ĐHYHN Sách, tạp chí
Tiêu đề: “Nghiên cứu chẩn đoán lâm sàng và gen virus Epstein – Barr trong ung thư vòm mũi họng’’
Tác giả: Nguyễn Đình Phúc
Năm: 2006
15. Nguyễn Quốc Trực, Lê Văn Xuân (2000), Chẩn đoán và điều trị các thương tổn tiền ung thư cổ tử cung, Tạp chí thông tin Y - Dược 8/2000, Viện thông tin Y học Trung ương, tr. 220- 224.Tiếng Anh Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tạp chí thông tin Y - Dược 8/2000, Viện thông tin Y học Trung ương
Tác giả: Nguyễn Quốc Trực, Lê Văn Xuân
Năm: 2000
16. Apt D, Watts RM, Suske G, U Bernard U (1996), “High Sp1/Sp3 ratios in epithelial cells during epithelial differentiation and cellular transcription correlate with the activation of the HPV-16 promoter”, Virology, 224, pp. 281– 291 Sách, tạp chí
Tiêu đề: High Sp1/Sp3 ratios in epithelial cells during epithelial differentiation and cellular transcription correlate with the activation of the HPV-16 promoter”, "Virology
Tác giả: Apt D, Watts RM, Suske G, U Bernard U
Năm: 1996
17. Bosch F, Manos MM, Munoz N, Sherman M, Jansen AM, Peto J, Schiffman M H, Moreno V, Kurman R, Shah KV, International Biological Study on Cervical Cancer (IBSCC) Study Group (1995), “Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer: a worldwide perspective”,J. Natl.Cancer Inst, 87, pp. 796–802 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer: a worldwide perspective”,"J. Natl. "Cancer Inst
Tác giả: Bosch F, Manos MM, Munoz N, Sherman M, Jansen AM, Peto J, Schiffman M H, Moreno V, Kurman R, Shah KV, International Biological Study on Cervical Cancer (IBSCC) Study Group
Năm: 1995
18. Bosch FX, Munoz N (2002), “The viral etiology of cervical cancer”, Virus Res. 89, pp. 183-190 Sách, tạp chí
Tiêu đề: The viral etiology of cervical cancer”, "Virus Res
Tác giả: Bosch FX, Munoz N
Năm: 2002
19. Bosch FX, Lorincz A, Munoz N, Meijer CJ, Shah KV (2002), “The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer”, J. Clin.Pathol. 55, pp. 244-265 Sách, tạp chí
Tiêu đề: The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer”, "J. Clin. "Pathol. 55
Tác giả: Bosch FX, Lorincz A, Munoz N, Meijer CJ, Shah KV
Năm: 2002
20. Chan AT, Teo PM, Huang DP (2004), Pathogenesis and treatment of nasopharyngeal carcinoma. Semin Oncology, 31(6), pp. 794-801 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Semin Oncology, 31
Tác giả: Chan AT, Teo PM, Huang DP
Năm: 2004
21. Chan SY, Bernard HU, Ratterree M, Birkebak TA, Faras AJ, Ostrow RS (1997), “Genomic diversity and evolution of papillomaviruses in rhesus monkeys”, J. Virol. 71, pp. 4938- 4943 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Genomic diversity and evolution of papillomaviruses in rhesus monkeys”, "J. Virol. 71
Tác giả: Chan SY, Bernard HU, Ratterree M, Birkebak TA, Faras AJ, Ostrow RS
Năm: 1997

Xem thêm

HÌNH ẢNH LIÊN QUAN

Hình 3.10 Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di gen EBNA-1 61 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.10 Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di gen EBNA-1 61 (Trang 5)
Hình 1.1. Bản đồ phân bố dịch tễ theo độ tuổi của người có khả năng nhiễm ung thư của các châu lục [64]. - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.1. Bản đồ phân bố dịch tễ theo độ tuổi của người có khả năng nhiễm ung thư của các châu lục [64] (Trang 13)
Hình 1.2 . Cơ chế nhiễm HPV (Human papilloma virus) trong ung thư cổ tử cung [6]. - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.2 Cơ chế nhiễm HPV (Human papilloma virus) trong ung thư cổ tử cung [6] (Trang 18)
Hình 1.3. Mối quan hệ phả hệ và nguồn gốc của 101 Papillomavirus dựa trên so - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.3. Mối quan hệ phả hệ và nguồn gốc của 101 Papillomavirus dựa trên so (Trang 20)
Hình 1.4. Human Papillomavirus mô hình và ảnh chụp dưới kính hiển vi - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.4. Human Papillomavirus mô hình và ảnh chụp dưới kính hiển vi (Trang 21)
Hình 1.5. Cấu trúc phân tử của hệ gen HPV -16. - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.5. Cấu trúc phân tử của hệ gen HPV -16 (Trang 22)
Hình 1.6. Quá trình nhân lên của HPV [11]. - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.6. Quá trình nhân lên của HPV [11] (Trang 24)
Hình 1.7. Sơ đồ minh họa quá trình tiến triển của EBV - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.7. Sơ đồ minh họa quá trình tiến triển của EBV (Trang 36)
Hình 1.8. Cấu trúc hệ gen EBV dạng khép lại thành mạch vòng (a) và dạng mạch - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 1.8. Cấu trúc hệ gen EBV dạng khép lại thành mạch vòng (a) và dạng mạch (Trang 38)
Hình 2.1. Sơ đồ quy trình nghiên cứu phân tích gen EBNA-1 của EBV, - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 2.1. Sơ đồ quy trình nghiên cứu phân tích gen EBNA-1 của EBV, (Trang 43)
Bảng 2.1. Thành phần và số lượng từng thành phần tham gia phản ứng multiplex-PCR HPV-16/HPV-18 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
ng 2.1. Thành phần và số lượng từng thành phần tham gia phản ứng multiplex-PCR HPV-16/HPV-18 (Trang 47)
Bảng 2.2. Chu trình nhiệt độ trong phản ứng multiplex - PCR HPV16/HPV18 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 2.2. Chu trình nhiệt độ trong phản ứng multiplex - PCR HPV16/HPV18 (Trang 48)
Bảng 2.4. Chu trình nhiệt độ trong phản ứng PCR của gen EBNA-1 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 2.4. Chu trình nhiệt độ trong phản ứng PCR của gen EBNA-1 (Trang 49)
Bảng 2.6. Thành phần của phản ứng cắt plasmid tái tổ hợp bằng enzym EcoRI - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 2.6. Thành phần của phản ứng cắt plasmid tái tổ hợp bằng enzym EcoRI (Trang 56)
Bảng 2.7. Thành phần phản ứng tạo DNA sợi đơn - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 2.7. Thành phần phản ứng tạo DNA sợi đơn (Trang 58)
Hình 3.1. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.1. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm (Trang 60)
Hình 3.2. Kiểm tra sản phẩm multiplex-PCR sử dụng cùng lúc 2 cặp mồi (E6F- - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.2. Kiểm tra sản phẩm multiplex-PCR sử dụng cùng lúc 2 cặp mồi (E6F- (Trang 61)
Hình 3.4. Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen E6 của - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
nh 3.4. Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen E6 của (Trang 63)
Hình 3.6. Trình bày chuỗi gen E6 của typ HPV-16. Dòng trên là trình tự - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
nh 3.6. Trình bày chuỗi gen E6 của typ HPV-16. Dòng trên là trình tự (Trang 64)
Hình 3.4 và hình 3.5 cho thấy, mỗi màu đều xác nhận một loại nucleotide tương ứng, chứng tỏ các chuỗi gen E6 của HPV-16 và chuỗi gen L1 của HPV-18 thu nhận có chất lượng tốt, được giải trình trình tự hoàn chỉnh và không bị nhiễu trong quá trình gi - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.4 và hình 3.5 cho thấy, mỗi màu đều xác nhận một loại nucleotide tương ứng, chứng tỏ các chuỗi gen E6 của HPV-16 và chuỗi gen L1 của HPV-18 thu nhận có chất lượng tốt, được giải trình trình tự hoàn chỉnh và không bị nhiễu trong quá trình gi (Trang 64)
Hình 3.7. Trình bày chuỗi gen L1 của typ HPV-18. Dòng trên là trình tự - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
nh 3.7. Trình bày chuỗi gen L1 của typ HPV-18. Dòng trên là trình tự (Trang 65)
Bảng 3.2. Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi gen L1 của mẫu PS16 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 3.2. Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi gen L1 của mẫu PS16 (Trang 66)
Hình 3.8. Kết quả bước đầu phát hiện HPV-16/HPV-18 bằng phương pháp - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
nh 3.8. Kết quả bước đầu phát hiện HPV-16/HPV-18 bằng phương pháp (Trang 68)
Hình 3.9. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm EBV - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.9. Kết quả kiểm tra DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm EBV (Trang 69)
Hình 3.10. Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di gen EBNA-1 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.10. Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di gen EBNA-1 (Trang 70)
Hình 3.11. Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen EBNA-1 - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.11. Hình ảnh giản đồ (chromatogram) một phần trình tự gen EBNA-1 (Trang 71)
Bảng 3.3. Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi nucleotide gen - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 3.3. Kết quả truy cập Ngân hàng gen sử dụng chuỗi nucleotide gen (Trang 72)
Hình 3.12. Kết quả chuỗi gen EBNA-1 của EB17 được thu nhận sau giải trình tự. - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Hình 3.12. Kết quả chuỗi gen EBNA-1 của EB17 được thu nhận sau giải trình tự (Trang 72)
Bảng 3.3 cho thấy trình tự các chuỗi gen EBNA-1 của EB17 chúng tôi thu nhận đều có tỉ lệ tương đồng cao (từ 97% đến 99%) so với các gen EBNA-1 đã được đăng kí trong Ngân hàng gen của chủng EBV và các chủng EBV khác trên thế giới - xác định trình tự gen e6 và l1 của hpv và gen ebna-1 của ebv để ứng dụng trong chuẩn đoán ung thư cổ tử cung và vòm mũi họng
Bảng 3.3 cho thấy trình tự các chuỗi gen EBNA-1 của EB17 chúng tôi thu nhận đều có tỉ lệ tương đồng cao (từ 97% đến 99%) so với các gen EBNA-1 đã được đăng kí trong Ngân hàng gen của chủng EBV và các chủng EBV khác trên thế giới (Trang 73)

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TRÍCH ĐOẠN

Định týp HPV bằng sinh học phân tử

UNG THƢ VÒM MŨI HỌNG VÀ EPSTEIN-BARR VIRUS (EBV)

Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam

Đặc tính sinh học của Epstein-Bar virus (EBV) Kỹ thuật tách chiết DNA tổng số Kỹ thuật phát hiện sản phẩm PCR Tách DNA plasmid tái tổ hợp Kết quả truy cập Ngân hàng gen xác định chuỗi gen E6 của

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w