Nghiên cứu một số yếu tố nuôi cấy in vitro ảnh hưởng tới quá trình nảy mầm phôi dừa Sáp

Dừa sáp là một giống dừa đột biến tự nhiên, có đặc tính khác với dừa thường là phôi dừa Sáp không nảy mầm trong điều kiện bình thường mà chỉ nảy mầm trong môi trường in vitro. Bài viết trình bày nghiên cứu một số yếu tố nuôi cấy in vitro ảnh hưởng tới quá trình nảy mầm phôi dừa sáp.

KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ NI CẤY IN VITRO ẢNH HƯỞNG TỚI Q TRÌNH NẢY MẦM PHÔI DỪA SÁP Võ Minh Hải1, Phạm Thị Phương Thuý2, Trần Thị Thảo Đang2 Lê Vĩnh Thúc3, Nguyễn Bảo Tồn4 TĨM TẮT Dừa sáp giống dừa đột biến tự nhiên, có đặc tính khác với dừa thường phôi dừa sáp không nảy mầm điều kiện bình thường mà nảy mầm mơi trường in vitro Nhằm nâng cao tỷ lệ nảy mầm phôi dừa sáp tiến hành thí nghiệm nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ nảy mầm phôi dừa sáp Kết nghiên cứu xác định, môi trường Y3 cải tiến (Y3 chuẩn bổ sung 0,2 ppm NAA ppm BAP) cho tỷ lệ nảy mầm tốt đạt 88,9%, dừa sáp cho tỷ lệ nảy mầm tốt từ 12,5 - 13 tháng tuổi, phôi dừa ni điều kiện tối hồn tồn (0 lux) cho hiệu tốt chiếu sáng Môi trường Y3 cải tiến không bổ sung agar (môi trường lỏng) giúp phôi nảy mầm nhanh tuần thứ phôi không nảy mầm sau 30 - 45 nuôi phôi môi trường Y3 cải tiến, tiếp tục áp dụng kỹ thuật cắt màng phôi giúp phôi tiếp tục nảy mầm thêm 66,7% Khuyến nghị ứng dụng kết nghiên cứu vào sản xuất giống dừa Sáp cấy phôi Việt Nam Từ khóa: Phơi dừa sáp, tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp, yếu tố ảnh hưởng ĐẶT VẤN ĐỀ Dừa sáp giống dừa đột biến tự nhiên với nội nhũ rắn tăng sinh mức, phát Laguna, Philippines Java, Indonesia (Copeland, 1931), nội nhũ rắn dày mịn gần lấp đầy toàn khoảng trống trái, thường có khơng có nước bên (Gonzales, 1914) Do dừa sáp có kiểu gen đồng hợp tử lặn (mm) không tồn tự nhiên phải nuôi cấy thông qua nuôi cấy mô (De Guzman et al., 1964 De Guzman and Manuel, 1977) Công nghệ nuôi cấy phôi De Guzman phát triển thành công vào năm 1960 sau thập kỷ thử nghiệm (De Guzman et al., 1964) Công nghệ De Guzman cải tiến Trung tâm Nghiên cứu Dừa Philippines (De Guzman Manuel, 1977) mở đường cho việc sản xuất thương mại giống phôi Philippines (Rillo, 1999) Ở Sri Lanka, nhà khoa học nhân giống dừa sáp phương pháp nuôi cấy phôi cho thấy tỷ lệ phôi chuyển đổi sang thấp, có khoảng 10 - 20% phôi chuyển thành (Deva Kumar et al., 2014) Ở Việt Nam, giai đoạn 2001-2005, tỷ lệ thành cơng quy trình ni cấy NCS Khoa học trồng khóa 2017, Khoa Nơng nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ Khoa Nông nghiệp – Thủy sản, Trường Đại học Trà Vinh Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ Hội Sinh vật cảnh thành phố Cần Thơ Email: haitvu@gmail.com 34 phôi đạt 19,2%, thời gian phát triển hồn thiện từ phơi hữu tính thành đủ tiêu chuẩn xuất vườn 24 tháng (Trần Thị Ngọc Thảo, 2010) Năm 2010 – 2014, Viện Nghiên cứu Dầu có dầu tiếp tục nghiên cứu cải tiến qui trình cơng nghệ ni cấy phơi giai đoạn phịng thí nghiệm vườn ươm nhằm gia tăng tỷ lệ thành cơng qui trình đạt 47,3%, thời gian phát triển hồn thiện từ phơi thành đủ tiêu chuẩn xuất vườn 12 – 14 tháng (Ngô Thị Kiều Dương, 2013) Theo Eeuwens (1976) Rillo Paloma (1992) phơi dừa sáp phát triển tốt mơi trường Y3 mà khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng thực vật Một nghiên cứu khác Việt Nam cho kết tương tự (Trương Quốc Ánh ctv., 2012) Bên cạnh đó, nghiên cứu Erlinda (1997) cho thấy rút ngắn thời gian nảy mầm phơi xuống cịn tuần Thí nghiệm thực nhằm “Nghiên cứu số yếu tố nuôi cấy in vitro ảnh hưởng tới trình nảy mầm phôi dừa Sáp” PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Phương tiện điều kiện thí nghiệm 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu Thí nghiệm bố trí phịng thí nghiệm với nhiệt độ phịng 28 ± 20 C Ánh sáng lux (che tối) cho giai đoạn phôi nảy mầm chiếu sáng với cường độ 2.000 – 2.500 lux giai đoạn tạo rễ phát triển thân trước vườn ươm 2.1.2 Chuẩn bị phơi dừa Sáp thí nghiệm Thí nghiệm phơi dừa có độ tuổi 11-13 tháng (tính từ lúc đậu trái n thu hoch), cỏc nghim thc Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 1/2021 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ cịn lại (thí nghiệm 1, 3, 4, 5) phơi dừa có độ tuổi từ 12,5 -13 tháng lấy khỏi trái máy khoan sử dụng mũi khoan kính đường kính 27 mm Phơi sau lấy khỏi trái có lớp cơm dừa bao xung quanh phần gáo dừa bên cho vào beaker (cốc) thủy tinh khử trùng Giai đoạn tách vỏ dừa, khoan lấy phôi thực điều kiện phịng thí nghiệm thơng thường Phơi dừa đựng beaker sau tách khỏi trái mang vào tủ cấy vô trùng Khử trùng phôi dừa cách cho cồn 70% vào beaker chứa phôi dừa cho cồn 70% ngập tất phôi Thời gian khử trùng 15 phút Rót phần cồn sau khử trùng vào cốc khác Dùng nhíp y tế gắp phơi dừa đĩa petri vô trùng, dùng dao mổ tách bỏ phần gáo dừa cơm dừa bao quanh phôi, cho phôi vào ống nghiệm chứa mơi trường thí nghiệm hấp khử trùng trước 2.1.3 Mơi trường ni cấy phơi Bao gồm mơi trường thí nghiệm có bổ sung 60 g/l succrose, g/l than hoạt tính, điều chỉnh pH = 5,6, ống nghiệm chứa 25 ml môi trường mang hấp khử trùng nhiệt độ 1210C thời gian 20 phút - Cơng thức tính tỷ lệ nảy mầm: 2.2 Phương pháp thí nghiệm - Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng loại môi trường đến tỷ lệ nảy mầm phơi dừa Sáp Thí nghiệm bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại phôi Nghiệm thức (NT) (đối chứng): Môi trường Y3 chuẩn NT 2: Môi trường Y3 chuẩn + mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA (Y3 cải tiến) NT 3: Môi trường MS NT 4: Môi trường MS cải tiến NT 5: Môi trường VW (Vacin Went, 1949) Bảng Thành phần mơi trường thí nghiệm Nồng độ (mg/l) Thành phần môi trường Y3 chuẩn MS cải MS (Eeuwens, 1976) tiến NH4Cl 535 NH4NO3 1.650 (NH4)2SO4 493 KNO3 2.020 1.900 530 MgSO4,7H2O 247 180,5 247 Đa lượng CaCl2.2H2O 294 332 Ca(PO4)2 201,6 Ca(NO3)2 KCl 1.492 NaH2PO4.2H2O 312 170 250,4 KH2PO4 KI 8,3 0,83 0,83 H3BO3 3,1 6,2 6,18 MnSO4.7H2O 11,2 16,9 MnSO4.4H2O 30,3 ZnSO4.7H2 O 7,2 8,6 7,01 Vi lượng CuCl2.5H2 O 0,25 0,025 0,25 CuSO4.5H2 O CoCl2.6H2O 0,24 ,025 Co(NO2)2 0,02 Na2MoO4.2H2O 0,24 0,25 NiCl.6H2O 0,024 (NH4)2M2O7.4H2O 0,41 Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 1/2021 VW (Vacin v Went, 1949) 500 524 122 200 250 0,83 6,2 16,9 8,6 0,025 0,025 0,25 - 35 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ Pyridoxine HCl 0,05 0,5 0,5 0,5 Thiamine HCl 0,05 0,1 0,1 0,1 Vitamins Amino acid Nicotinic acid 0,05 Ca-D-pantothenate 0,05 Biotin 0,05 Inositol 100 Folic acid 0,05 Glycine FeSO4.7H2 O 41,7 Fe-EDTA Na2EDTA 55,8 Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ nảy mầm phôi sau 1, 2, 3, tuần ni phơi - Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng tuổi dừa thu hoạch đến tỷ lệ nảy mầm phơi dừa Sáp Thí nghiệm bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại phôi NT 1: Dừa hái 11 tháng tuổi NT 2: Dừa hái 11,5 tháng tuổi NT 3: Dừa hái 12 tháng tuổi NT 4: Dừa hái 12,5 tháng tuổi NT 5: Dừa hái 13 tháng tuổi Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho nghiệm thức: Là mơi trường Y3 cải tiến trình bày thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ nảy mầm phôi dừa sau 1, 2, 3, tuần ni phơi - Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng ánh sáng lên độ nảy mầm phôi dừa Thí nghiệm bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại mầm - NT 1: Phơi dừa ni phịng có chiếu sáng với cường độ 2.000 - 2.500 lux - NT 2: Phôi dừa ni điều kiện tối hồn tồn (0 lux) Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho nghiệm thức: Là mơi trường Y3 cải tiến trình bày thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ nảy mầm phôi sau 1, 2, 3, tuần ni phơi - Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng dạng môi trường lên tỉ lệ nảy mầm phơi dừa sáp Thí nghiệm bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại phôi môi trường Y3 cải tiến với dạng 36 5,05 5,05 100 100 2 27,8 27,8 37,2 37,2 NT 1: Môi trường lỏng NT 2: Môi trường đặc 5,05 100 27,8 37,2 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho nghiệm thức: môi trường Y3 cải tiến trình bày thí nghiệm nghiệm thức 2: Mơi trường nghiệm thức có bổ sung gam agar/lít mơi trường Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ nảy mầm phôi sau 1, 2, 3, tuần ni phơi - Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng (BAP: Benzylaminopurine) lên tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên nhân tố (BAP: Benzylaminopurine) gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại phôi cấy vào ống nghiệm chứa nồng độ BAP tương ứng với nghiệm thức sau: NT (Đối chứng): Y3 chuẩn + 0,2 ppm NAA NT (Y3 cải tiến): Y3 chuẩn + ppm BAP + 0,2 ppm NAA NT 3: Y3 chuẩn + ppm BAP + 0,2 ppm NAA NT 4: Y3 chuẩn + 10 ppm BAP + 0,2 ppm NAA Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho nghiệm thức: Là môi trường Y3 chuẩn NAA trình bày thí nghiệm kết hợp bổ sung BAP theo nồng độ thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi: Tỉ lệ nảy mầm phôi sau: 1, 2, 3, tuần nuôi phôi - Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng tách màng bao phôi lên tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí theo thể thức khối hoàn toàn ngẫu nhiên gồm nghiệm thức, lần lặp lại với lần lặp lại phôi NT 1: Môi trường Y3 cải tiến (đối chứng) NT 2: Môi trường Y3 cải tiến + cắt màng bao phôi NT 3: Môi trường Y3 cải tin + ppm Kinetin Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 1/2021 KHOA HC CƠNG NGHỆ NT 4: Mơi trường Y3 cải tiến + ppm Kinetin NT 5: Môi trường Y3 cải tiến + ppm Kinetin Chuẩn bị mẫu thí nghiệm: mẫu thí nghiệm phơi ni tuần môi trường Y3 cải tiến chưa nảy mầm Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho nghiệm thức: Là môi trường Y3 cải tiến (môi trường đặc) trình bày thí nghiệm bổ sung vào môi trường tương ứng nồng độ với nghiệm thức 3, Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ (%) phôi nảy mầm sau 1, 2, 3, 4, tuần nuôi phôi dừa Sáp 2.3 Phương pháp xử lý số liệu Các tiêu theo dõi lưu giữ tính tốn phần mềm Excel phân tích thống kê phần mềm Minitab version 16 KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng loại môi trường đến tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp Kết trình bày bảng cho thấy, sau tuần mơi trường Y3 chuẩn có tỷ lệ phơi dừa nảy mầm đạt 20,2% đạt cao tuần thứ 44,4% Nghiệm thức có tỷ lệ nảy mầm cao NT (Y3 cải tiến), có 55,6% phơi nảy mầm sau tuần đạt cao 88,9% tuần thứ Các phôi nảy mầm thường có đặc điểm phơi lớn nhanh, nhẵn có đỉnh sinh trưởng thường có màu ửng hồng đầu phơi Riêng nghiệm thức cịn lại, phơi có dấu khơng phát triển, đầu phơi có vết đen khơng nảy mầm đến tuần thứ Bảng Tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp Tỷ lệ nảy mầm (%) Nghiệm thức Sau Sau Sau Sau tuần tuần tuần tuần NT 1: Môi trường Y3 chuẩn 0 20,2b 33,3b NT 2: Môi trường Y3 cải tiến 0 55,6a 88,9a NT 3: Môi trường MS 0 0c 0c NT 4: Môi trường MS cải tiến 0 0c 0c NT 5: Môi trường VW 0 0c 0c CV(%) 19,3 18,4 Hình Sự hình thành mầm phơi nghiệm thức (môi trường Y3 cải tiến) sau tuần Kết nghiên cứu cho thấy, việc bổ sung thêm ppm BAP 0,2 ppm NAA làm tăng tỷ lệ nảy mầm lên gấp đơi có khác biệt có ý nghĩa thống kê 3.2 Ảnh hưởng tuổi dừa thu hoạch đến tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp Kết bảng cho thấy, nghiệm thức (12,5 13 tháng tuổi) có tỷ lệ nảy mầm cao đạt 86,7% Tuy nhiên, nghiệm thức có tỷ lệ nhiễm nấm Sau tuần 44,4b 88,9a 0c 0c 0c 18,4 Hình Các phôi không nảy mầm nghiệm thức (MS cải tiến) sau tuần bệnh cao lên đến 13,3% Ở giai đoạn tuổi dừa này, vỏ trái già chuyển sang màu nâu sẫm cuống trái rụng đen lại có xâm nhập nấm nên tỷ lệ nhiễm cao Qua cho thấy, trái chọn vơ mẫu có độ tuổi 12,5 tháng thích hợp so với kết Trương Quốc Ánh ctv (2012) 12 tháng tuổi N«ng nghiệp phát triển nông thôn - K - TH¸NG 1/2021 37 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ Bảng Ảnh hưởng tuổi dừa thu hoạch đến tỷ lệ nảy mầm phôi dừa Sáp Tỷ lệ nảy mầm (%) Nghiệm thức Sau Sau Sau Sau Sau tuần tuần tuần tuần tuần NT 1: Dừa hái 11 tháng tuổi 0 33,3c 40c 40b NT 2: Dừa hái 11,5 tháng tuổi 0 40b 53,3b 53,3ab NT 3: Dừa hái 12 tháng tuổi 0 40b 53,3b 66,7ab a ab NT 4: Dừa hái 12,5 tháng tuổi 0 73,3 73,3 86,7a NT 5: Dừa hái 13 tháng tuổi 0 66,7ab 80a 86,7a CV(%) 14,5 22,3 20,8 đạt 47,6% có khác biệt ý nghĩa thống kê với t = Trong nghiên cứu sử dụng trái 0,035 12-12,5 tháng tuổi, tỷ lệ trái sử dụng để lấy phôi đạt 85% A B Hình Phơi nảy mầm nghiệm thức (dừa 12,5 tháng tuổi) (dừa 13 tháng tuổi) tỷ lệ nhiễm nấm bệnh nghiệm thức cao (A) 3.3 Ảnh hưởng ánh sáng lên độ nảy mầm phôi dừa A B Hình Ảnh hưởng ánh sáng đến nảy mầm phôi dừa sáp 3.4 Ảnh hưởng dạng môi trường lên tỉ lệ nảy mầm phôi dừa sáp A Hình Tỷ lệ nảy mầm phơi ni điều kiện tối hồn tồn (A) cao so với phơi ni có chiếu sáng (B) Kết hình cho thấy, phôi bắt đầu nảy mầm tuần thứ sau cấy tỷ lệ 28,6%, nghiệm thức có chiếu sáng 38,1% nghiệm thức không chiếu sáng (tối), đến tuần thứ 4, nghiệm thức chiếu sáng đạt 38,1% không chiếu sáng đạt 71,4% Ở tuần thứ 5, nghiệm thức chiếu sáng đạt 47,6% không chiếu sáng đạt 85,7% Qua kết cho thấy, phơi dừa sáp thích hợp nảy mầm điều kiện bóng tối đạt 85,7% sau tuần có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với chiếu đèn phơi nảy mầm 38 B Hình Tỷ lệ nảy mầm phôi dừa sáp môi trường lỏng cao so với môi trường đặc (A Nghiệm thức 1; B Nghiệm thức 2) Từ kết nghiên cứu cho thấy mơi trường lỏng thích hợp cho giai đoạn tiền nảy mầm phôi dừa sáp với tỷ lệ nảy mầm đạt 90% mơi trường đặc đạt 19% có khác biệt ý nghĩa thống kê với t = -0,620 Kết phù hợp với nghiên cứu trước (Hình 7) Mơi trường lỏng sửa đổi từ môi trường nảy mầm dạng loại trừ chất keo (Assy Bah, 1986) Nông nghiệp phát triển nông thôn - KỲ - TH¸NG 1/2021 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ 100 % MT ĐẶC MT LỎNG 76.2 80 60 90.5 42.9 40 19 20 4.8 0 0 TUẦN TUẦN TUẦN TUẦN TUẦN Hình Ảnh hưởng dạng môi trường lên khả nảy mầm phôi dừa sáp 3.5 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng (BAP: Benzylaminopurine) lên khả nảy mầm phơi 100 % Kết trình bày hình 10 cho thấy, sau tuần quan sát, phơi chưa có dấu hiệu nảy mầm tuần thứ 2, nghiệm thức (tách màng bao phôi) có tỉ lệ nảy mầm cao đạt 66,67% trì đến tuần thứ mà khơng có thêm phôi nảy mầm Ở nghiệm thức (Y3 cải tiến + ppm Kinetin), có 7,55% phơi nảy mầm trì hết tuần Nghiệm thức (Y3 cải tiến + ppm Kinetin), tỉ lệ nảy mầm thấp đạt 3,78% nảy mầm sau tuần Nghiệm thức (Y3 cải tiến + ppm Kinetin) có tỉ lệ nảy mầm cao, 48,2% sau tuần Riêng nghiệm thức đối chứng khơng có phôi nảy mầm sau tuần Y3 chuẩn + 0,2ppm NAA 88,9a Y3 chuẩn + 2ppm BAP + 0,2 NAA 77,8a 44,4a 38,9b 27,7b 3.6 Ảnh hưởng tách màng bao phôi lên tỷ lệ nảy mầm phôi dừa sáp 00 00 11,1b 5,6b TUẦN TUẦN TUẦN 33,3b 27,8b 11,1b TUẦN TUẦN Hình Ảnh hưởng chất điều hồ sinh trưởng lên khả nảy mầm phôi dừa sáp A B Hình 10 Biểu đồ tỉ lệ nảy chồi nghiệm thức qua tuần thí nghiệm A Hình Sự hình thành chồi nghiệm thức (Y3 chuẩn + ppm BAP + 0,2 ppm NAA) (A) khơng hình thành chồi nghiệm thức (Y3 chuẩn + 10 ppm BAP + 0,2 ppm NAA) (B) Kết nghiên cứu trình bày hình cho thấy, nghiệm thức Y3 + ppm BAP giai đoạn hình thành chồi cho hiệu tốt đạt 88,9% khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức cịn lại Trong đó, nghiên cứu khác Trương Quốc Ánh (2012) cho thấy nồng độ BAP thích hợp cho giai đoạn 0,5 ppm B Hình 11 Sự hình thành chồi nghiệm thức (Y3 cải tiến + cắt màng bao phơi) (A,B) phơi khơng hình thành chồi nghiệm thức (Y3 cải tiến + ppm Kinetin) Theo Cueto et al (2012) phôi sau – tháng khơng nảy mầm tách màng bao phơi để phơi phát triển tốt Tuy có độ nảy mầm cao nghiệm thức (Y3 cải tiến kết hp vi ct mng bao Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 1/2021 39 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ phơi) có tỷ lệ nhiễm cao nghiệm thức 11,11% nghiệm thức lại khơng có phơi nhiễm De Guzman, E.V and G.C Manuel, 1977 Improved root growth in embryo and seedlings culture of coconut ‘Makapuno’ by the incorporation of charcoal in the growth medium PJCS: 11, 35–39 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ De Guzman, E.V., and A.G Del Rosario, 4.1 Kết luận Kết nghiên cứu xác định, môi trường Y3 cải tiến (Y3 chuẩn bổ sung 0,2 ppm NAA ppm BAP) cho tỷ lệ nảy mầm tốt đạt 88,9% phôi dừa sáp 12,5 - 13 tháng tuổi; phôi dừa nuôi điều kiện tối hoàn toàn (0 lux) cho hiệu tốt chiếu 1964 The growth and development in soil of makapuno seedlings cultured in vitro National Research Council of the Philippines, Research Bulletin 29:1-16 Deva Kumar, K., R K Gautam, A Sharma and S Dam Roy, 2014 High frequency occurrence of sáng Môi trường Y3 cải tiến không bổ sung agar (môi trường lỏng) giúp phôi nảy mầm nhanh tuần thứ phôi không nảy mầm sau 30 - 45 nuôi phôi môi trường Y3 cải tiến, tiếp tục áp dụng kỹ thuật cắt màng phôi giúp soft endosperm mutant Macapuno coconuts in Andaman Islands and their embryo culture In: Indian Journal of Breeding 74(4):532-535 Genetics and Plant Eeuwens, C.J 1976 Mineral requirements for growth and callus initiation of tissue explants phôi tiếp tục nảy mầm thêm 66,7% excised from mature coconut palms (Cocos nucifera 4.2 Kiến nghị L.) and cultured in vitro Physiol Plant., 36:23-28 Tiếp tục nghiên cứu yếu tố nuôi cấy invitro ảnh hưởng khả tạo rễ, thứ cấp, thời gian quy trình dưỡng chuyển vườn ươm Khuyến nghị ứng dụng kết nghiên cứu vào sản xuất giống dừa sáp cấy phôi Erlinda P Rillo, 1997 PCA embryo culture technique in mass production of Makapuno coconut 10 Gonzales, B 1914 The Makapuno coconut Philipp Agric For.3, 31–32 11 International Coconut Genebank for Latin Việt Nam America and the Caribbean TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngô Thị Kiều Dương, 2013 Báo cáo kết thực nhiệm vụ "Khai thác phát triển nguồn gen dừa" Assy – Bah, B., 1986 In vitro culture of 12 Kennedy Mkumbo, Salustia Tembo and Reminister Marealle 1997 Status of research on coconut embryo culture and acclimatization techniques in Tanzania 13 RilIo, E.P., and Paloma, M.B.F 1992a In coconut zygotic embryos Oléagineux 47, 321-328 Cueto, C.A., V.B Johnson, F Engelmann, A Kembu, J.L Konan, M Kouassi Kan, R.L Rivera, V vitro culture of macapuno coconut embryos Coconuts Today, June, 90-101 Vidhanaarachchi, R Bourdeix, and S.F Weise, 2012 14 Rillo, E.P and Paloma M.B.F 1992b In vitro Technical guidelines for the safe movement and culture of Macapuno coconut embryos Coconuts duplication Today, 9, 90-108 of Coconut (Cocos nucifera L.) germplasm using embryo culture transfer protocols 15 Rillo, E.P., 1999 Coconut embryo culture In Cogent; Bioversity International, Mintpellier, France Current pp: 37 Oropeza, C., Verdeil, J.L., Ashburner, G.R., Cardeña, Copeland, E.B., 1931 The Coconut (3rd ed.) Lodon: Macmillian and Company 40 Advances in Coconut Biotechnology; R., Santamaría, J.M., Eds.; Springer: Dordrecht, The Netherlands, pp 279288 ISBN 978-94-015-9283-3 Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 1/2021 KHOA HC CễNG NGHỆ STUDYING SOME IN VITRO CULTURE FACTORS AFFECTING THE GERMINATION OF COCONUT SAP EMBRYOS Vo Minh Hai, Pham Thi Phuong Thuy, Tran Thi Thao Dang, Le Vinh Thuc, Nguyen Bao Toan Summary Sap coconut is a naturally mutation coconut variety, which has different characteristics from normal coconut, Sap coconut embryos not germinate in natural environment but germinate in invitro medium only In order to improve the germination rate of Sap coconut embryos, the thesis had conducted experiments to study the factors affecting the germination rate of Sap coconut embryos The research results had identified, improved Y3 medium (Y3 were added 0.2 ppm NAA and ppm BAP) for the best germination rate reached 88.9%, Sap coconut fruits had age from 12.5 to 13 months gives the best germination rate, Sap coconut embryos were reared in complete darkness (0 lux) for germination rate higher than in the light condition Improved Y3 medium without agar (liquid medium) helped embryos germinated at 3th week sooner than semi-solid medium and for embryos that did not germinate after 30 - 45 days after reared in improved Y3 medium, continuing to apply the cutting technology of the sheet cap cover the shoot tip helped the embryos to germinate an additional 66.7% Recommendation to apply this research result to embryo cultured Sap coconut seedling production in Vietnam Keywords: Sap coconut, intestinal thick coconut, cream coconut, embryo cultured Sap coconut Người phản biện: PGS.TS Nguyễn Văn Đồng Ngày nhận bài: 02/6/2020 Ngày thông qua phản biện: 3/7/2020 Ngy duyt ng: 10/7/2020 Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 1/2021 41 ... (A) 3.3 Ảnh hưởng ánh sáng lên độ nảy mầm phôi dừa A B Hình Ảnh hưởng ánh sáng đến nảy mầm phôi dừa sáp 3.4 Ảnh hưởng dạng môi trường lên tỉ lệ nảy mầm phơi dừa sáp A Hình Tỷ lệ nảy mầm phơi... TUẦN TUẦN TUẦN Hình Ảnh hưởng dạng môi trường lên khả nảy mầm phôi dừa sáp 3.5 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng (BAP: Benzylaminopurine) lên khả nảy mầm phơi 100 % Kết trình bày hình 10 cho... cultured in vitro Physiol Plant., 36:23-28 Tiếp tục nghiên cứu yếu tố nuôi cấy invitro ảnh hưởng khả tạo rễ, thứ cấp, thời gian quy trình dưỡng chuyển vườn ươm Khuyến nghị ứng dụng kết nghiên cứu