(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen ở cây đậu nho nhe (vigna umbellata)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM VŨ THU TRANG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Ở CÂY ĐẬU NHO NHE (VIGNA UMBELLATA) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM VŨ THU TRANG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Ở CÂY ĐẬU NHO NHE (VIGNA UMBELLATA) Ngành: Di truyền học Mã số: 8.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hồng Mậu Thái Ngun - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ ii thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan nội dung trình bày luận văn kết nghiên cứu hướng dẫn trực tiếp GS.TS Chu Hoàng Mậu Các số liệu, kết sử dụng luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Vũ Thu Trang Xác nhận BCN Khoa Xác nhận cán hướng dẫn Nguyễn Thị Tâm GS.TS Chu Hoàng Mậu Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới GS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện tốt giúp tơi thực nghiên cứu hồn thành luận văn thạc sĩ Tôi xin chân thành cảm ơn hỗ trợ Đề tài khoa học-công nghệ cấp Bộ Giáo dục & Đào tạo mang mã số B2017-TNA-38 GS.TS Chu Hồng Mậu làm chủ nhiệm Tơi xin cảm ơn thầy cô cán Bộ môn Sinh học đại & Giáo dục sinh học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện, giúp đỡ q trình học tập nghiên cứu để hồn thành khóa học Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Tác giả luận văn Vũ Thu Trang Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ ii thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC Tran g Lời cam đoan………………………………………………………… Lời cảm ơn…………………………………………………………… Mục Danh mục hình………………………………………………… mục bảng……………………………………………………… Danh mục chữ viết tắt……………………………………………… Mở ii iii lục………………………………………………………………… Danh i đầu ……………………………………………………………… iv v vi 1 Đặt vấn đề …………………………………………………… Mục tiêu nghiên cứu ……………………………………………… Nội dung nghiên cứu………………………………………… Chương Tổng quan tài liệu……………………………………… 1.1 Cây đậu Nho nhe………………………………………………… 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại, đặc điểm sinh học đậu Nho nhe…… 1.1.2 Giá trị dinh dưỡng giá trị sử dụng đậu Nho nhe 1.2 Nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học kỹ thuật nuôi cấy in vitro mô tế bào thực vật 1.2.2 Môi trường nuôi cấy tế bào thực vật……………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn 1.2.3 Các yếu tố đảm bảo thành cơng q trình ni cấy mơ tế bào thực 13 vật………………………………………………………………… 1.3 Hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen họ Đậu 15 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 18 2.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên 18 cứu……………………… 2.1.1 Vật liệu thực 18 vật………………………………………………… 2.1.2 Hóa chất, thiết bị……………………………………………… 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ iv thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com 18 19 http://lrc.tnu.edu.vn 2.2 Phương pháp nghiên cứu………………………………………… 19 2.2.1 Phương pháp khử trùng hạt, tạo nuôi cấy in vitro 19 2.2.2 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ mô sẹo………………… 20 2.2.3 Tái sinh đa chồi đậu Nho nhe từ mầm chồi ngọn… 21 2.2.4 Môi trường rễ……………………………………………… 22 2.2.5 Ra chế độ chăm sóc……………………………………… 23 2.2.6 Phương pháp xử lý kết tính tốn số liệu………………… 24 Chương Kết thảo luận……………………………… 25 3.1 Kết nghiên cứu khử trùng hạt đậu Nho nhe………………… 25 3.2 Tái sinh in vitro đậu Nho nhe…………………………………… 28 3.2.1 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ mô sẹo………………………… 28 3.2.2 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ nách mầm chồi ngọn… 29 3.2.3 Ảnh hưởng BAP đến tái sinh chồi từ chồi in vitro 33 3.2.4 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi in vitro……… 37 3.3 Chuyển in vitro môi trường tự nhiên……………………… 39 Kết luận đề nghị………………………………………………… 42 Kết luận…………………………………………………………… 42 Đề nghị…………………………………………………………… 42 Tài liệu tham khảo…………………………………………… 43 Phụ lục ……………………………………………………… 48 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC HÌNH Tran g Hình Cây 1.1 đậu Nho nhe…………………………………………… Hình 2.1 Sơ đồ thí nghiệm tổng quát Hình 3.1 Hạt đậu Nho nhe nảy mầm mơi trường GM…………… Hình 3.2 Hình ảnh mơ sẹo từ mảnh sau tuần nuôi cấy môi trường có bổ sung 2,4-D 1mg/l………………………………………… Hình 3.3 Mơ sẹo nuôi cấy môi trường SIM sau tuần…………… 19 27 29 29 Hình 3.4 Nách mầm nuôi cấy môi trường cảm ứng chồi SIM…………………………………………………………………… 30 Hình 3.5 Hình ảnh đa chồi từ chồi sau tuần ni cấy………… 31 Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ tạo đa chồi chồi tác động BAP kinetine sau 32 tuần………………………………… Hình 3.7 Tái sinh chồi từ chồi môi trường SIM sau tuần…………………………………………………………………… 33 … Hình 3.8 Hình ảnh chồi đậu Nho nhe mơi trường chứa BAP 1,5mg/l.……………………………………………………………… 34 … Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn Hình 3.9 Cụm chồi nuôi cấy môi trường tái sinh chồi với BAP 1,5mg/l sau tuần …………………………………………………… Hình 3.10 Cây đậu Nho nhe mơi trường chứa IBA 37 39 0,3mg/l………… Hình 3.11 Cây tái sinh in vitro hoàn chỉnh để bầu đất……………… 40 Hình 3.12 Cây tái sinh in vitro hoàn chỉnh trồng bầu đất chứa giá thể đất thịt, trấu hun tỷ lệ 2:1 sau 41 tuần…………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Thành phần loại môi trường nuôi cấy dùng cho hệ thống tái sinh từ chồi 23 ngọn………………………………………………… Bảng 2.2 Giá thể nuôi 24 Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ Javen thời gian khử trùng đến nảy mầm hạt đậu Nho nhe sau ngày nuôi cấy…………………… 26 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi đậu Nho nhe… 35 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ IBA tới khả tạo rễ chồi tái sinh……………………………………………………………………… 38 Bảng 3.4 Ảnh hưởng giá thể tới sức sống đậu Nho nhe tái sinh in vitro…………………………………………………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN download by : skknchat@gmail.com 40 http://lrc.tnu.edu.vn ... Kết nghiên cứu khử trùng hạt đậu Nho nhe? ??……………… 25 3.2 Tái sinh in vitro đậu Nho nhe? ??………………………………… 28 3.2.1 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ mô sẹo………………………… 28 3.2.2 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ... cho tái sinh đa chồi Đây câu hỏi đặt cho nghiên cứu Xuất phát từ lý xây dựng đề tài cho luận văn thạc sĩ là: ? ?Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe (Vigna umbellata)? ??... tiêu nghiên cứu Xác định hệ thống tái sinh đa chồi in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu điều kiện khử trùng hạt để tạo mẫu ống nghiệm - Nghiên cứu tái sinh