(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của bệnh ornithobacterium rhinotracheale (ORT) trên đàn gà thả vườn tại tỉnh ninh bình

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỖ THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA BỆNH ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE (ORT) TRÊN ĐÀN GÀ THẢ VƯỜN TẠI TỈNH NINH BÌNH Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Bùi Trần Anh Đào NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc./ Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Thị Bích Ngọc i download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Trần Anh Đào tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý Thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hoàn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Thị Bích Ngọc ii download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan i Mục lục iii Danh mục từ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis abstract x Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Lịch sử tình hình nghiên cứu bệnh ORT 2.1.1 Tình hình nghiên cứu ORT giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu ORT Việt Nam 2.2 Căn bệnh 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Hình thái cấu trúc vi khuẩn 2.2.3 Tính chất ni cấy đặc điểm khuẩn lạc 2.2.4 Đặc tính sinh hóa 2.2.5 Định serotype phân loại chủng 11 2.2.6 Khả miễn dịch 11 2.2.7 Sức đề kháng 11 2.2.8 Khả gây bệnh 12 2.3 Truyền nhiễm học 12 2.3.1 Loài vật mắc bệnh 12 2.3.2 Lứa tuổi mắc bệnh 13 2.3.3 Mùa vụ phát bệnh 13 2.3.4 Chất chứa mầm bệnh 13 2.3.5 Phương thức truyền lây 14 2.4 Triệu chứng bệnh tích 14 2.4.1 Triệu chứng gà mắc ORT 14 iii download by : skknchat@gmail.com 2.4.2 Bệnh tích gà mắc ORT 15 2.5 Chẩn đoán 16 2.5.1 Chẩn đoán lâm sàng 16 2.5.2 Chẩn đốn phịng thí nghiệm 17 2.6 Biện pháp phòng trị bệnh 20 2.6.1 Phòng bệnh 20 2.6.2 Điều trị 20 2.6.3 Chẩn đốn phân biệt số bệnh đường hơ hấp gà 21 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 24 3.1 Địa điểm nghiên cứu 24 3.2 Thời gian nghiên cứu 24 3.3 Đối tượng nghiên cứu 24 3.4 Nội dung nghiên cứu 24 3.5 Phương pháp nghiên cứu 24 3.5.1 Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng 24 3.5.2 Phương pháp mổ khám 24 3.5.3 Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu làm tiêu 25 3.5.4 Phương pháp PCR 25 3.5.5 Phương pháp làm nhuộm tiêu vi thể 27 3.5.6 Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn 29 3.5.7 Phương pháp thử đặc tính sinh hóa 32 3.5.8 Phương pháp phân tích số liệu 32 Phần Kết thảo luận 33 4.1 Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn 33 4.2 Xác định số đặc điểm sinh hóa vi khuẩn gây bệnh 37 4.3 Giám định vi khuẩn PCR 38 4.4 Xác định triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh ORT 39 4.5 Xác định tổn thương đại thể gà mắc bệnh 42 4.6 Xác định bệnh tích vi thể gà mắc bệnh 46 Phần Kết luận kiến nghị 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 Tài liệu tham khảo 53 iv download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa đầy đủ AMC Amoxcicilin/ Clavulanic acid AMP Ampicilline BEAs Boiled extract antigens BHB Brain heart infusion broth CFU Colony Forming units CRD Chronic Respiratory Disease DO Doxycilin E Erythromycin GAP Agar gel precipitation H High: Mẫn cảm cao I Intermediate: Mẫn cảm trung bình IB Infectious bronchitis IC Infectious Coryza-IC ILT InfectiousLaryngo Tracheitis L Lincomycin ORT Ornithobacterium rhinotracheale PAP Peroxidase – anti peroxidase PB Pasteurella broth PCR Polymerase chain reaction PGNR Pleomorphic Gram Negative Rod R Resistan: Kháng SBA Sheep blood agar SXT Sulfamethoxazol-Trimethoprin TE Tetracycline TSA Tryptic soy agar v download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Phản ứng enzyme O Rhinotracheale (Richard P Chin, PaulC.M.van Empel, and Hafez M Hafez) Bảng 2.2: Sự khác biệt O.rhinotracheale với Kingella spp vi khuẩn gram âm hình que họ Pasteurellaceae có khả gây bệnh cho gia cầm (Paul van Empel, Han Van Den Bosch, Peter Loeffen, and Paul Storm Identification and Serotyping of Orithobacterium rhinotracheale, 1996) Bảng 3.1 Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động gồm 12 bình 27 Bảng 4.1: Kết phân lập vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm 34 Bảng 4.2: Kết phân lập ORT từ mẫu bệnh phẩm 35 Bảng 4.3: Kết số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ORT 37 Bảng 4.4: Triệu chứng lâm sàng gà mắc ORT 40 Bảng 4.5: Kết biến đổi bệnh tích đại thể gà mắc ORT 42 Bảng 4.6: Mức độ tổn thương đại thể quan gà mắc ORT 44 Bảng 4.7 Biến đổi bệnh tích vi thể số quan gà mắc ORT 47 Bảng 4.8: Bảng tổng hợp biến đổi bệnh lý gà mắc ORT 49 vi download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Hình thái vi khuẩn ORT kính hiển vi Hình 3.1: Thạch máu có bổ sung gentamycin 30 Hình 3.2: Sơ đồ phân lập vi khuẩn ORT 31 Hình 4.1: Khuẩn lạc ORT ni cấy mơi trường thạch máu sau 24 33 Hình 4.2: Tỷ lệ phân lập vi khuẩn ORT 35 Hình 4.3: Tỷ lệ phân lập ORT từ mẫu bệnh phẩm 36 Hình 4.4: Kết số đặc tính sinh hóa ORT 38 Hình 4.5: Kiểm tra sản phẩm PCR ORT 39 Hình 4.6: Gà mệt mỏi, ủ rũ 41 Hình 4.7: Gà khó thở thường há mồm để thở 41 Hình 4.8: Phân gà màu cà phê (có thể màu trắng) 41 Hình 4.9: Gà ủ rũ, xã cánh 41 Hình 4.10: Phổi viêm, xuất huyết 45 Hình 4.11: Xuất huyết khí quản, có bã đậu 45 Hình 4.12: Túi khí viêm dày lên, đục, có bã đậu 45 Hình 4.13: Viêm bao tim, tim xuất huyết 46 Hình 4.14: Gan xuất huyết 46 Hình 4.15: Lách, thận xuất huyết 46 Hình 4.16 Tổn thương vi thể gà mắc ORT 50 vii download by : skknchat@gmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Đỗ Thị Bích Ngọc Tên Luận văn: “Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý bệnh Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) đàn gà thả vườn tỉnh Ninh Bình.” Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu biểu triệu chứng lâm sàng, tổn thương đại thể, vi thể đàn gà mắc ORT từ có phương pháp chẩn đốn bệnh nhanh, xác phân biệt với bệnh khác Phương pháp nghiên cứu • Nội dung : - Phân lập vi khuẩn gây bệnh - Xác định số đặc điểm sinh vật, hóa học vi khuẩn gây bệnh - Giám định vi khuẩn PCR - Nghiên cứu triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh - Nghiên cứu tổn thương đại thể vi thể • Phương pháp nghiên cứu : - Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng - Phương pháp mổ khám - Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu làm tiêu - Phương pháp PCR - Phương pháp làm nhuộm tiêu vi thể - Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn - Phương pháp thử đặc tính sinh hóa - Phương pháp phân tích số liệu Kết kết luận • Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn: - Khuẩn lạc ORT có đặc điểm: khuẩn lạc nhỏ, không dung huyết xung quanh, màu xám tới xám trắng đơi có màu đỏ hung, bờ mặt lồi với bờ rìa rõ ràng Ở viii download by : skknchat@gmail.com lần ni cấy khuẩn lạc có kích thước lớn khoảng – mm sau khoảng 48 nuôi cấy lần sau thường khuẩn lạc nhỏ biến dạng không đồng - Tỷ lệ phân lập vi khuẩn ORT cao phận đường hô hấp dịch khí quản, phổi, túi khí, dịch ngốy lên đến 100 % thấp quan khác gan, lách, tuyến tụy, thận, tim, ruột • Một số đặc điểm sinh vật, hóa học vi khuẩn gây bệnh - Phản ứng Catalase âm tính (Khơng có tượng sủi bọt) - Phản ứng Oxidase dương tính (xuất màu tím đen hay giấy đổi thành màu xanh) - Phản ứng Indol cho kết âm tính (khơng xuất vịng trịn đỏ) • Giám định vi khuẩn PCR - So với thang chuẩn DNA(100bp ladder) giếng đối chứng dương (+) cho vạch DNA tương ứng 784bp (theo thiết kế mồi) giếng đối chứng âm không cho vạch hay sản phẩm PCR, đối chứng dương cho vạch Các đối chứng dương đối chứng âm thí nghiệm cho kết kết phản ứng đáng tin cậy • Triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh - Các triệu chứng quan sát thấy là: Ủ rũ, mệt mỏi, xã cánh, khó thở, số có tượng sốt, tiến hành kiểm tra kĩ thấy số có tượng chảy dịch mũi, dịch miệng Gà bỏ ăn giảm ăn, giảm tăng trọng, gà đẻ giảm đẻ, trứng méo mó…Hầu hết, đàn gà mắc ORT thấy gà tiêu chảy, phân lỏng màu cà phê màu trắng, số có tượng sưng, phù mặt • Bệnh tích đại thể - Bệnh tích đại thể chủ yếu gà mắc ORT tập trung phần lớn quan hơ hấp phổi xuất huyết, viêm có mủ tơ huyết, khí quản xuất huyết, lịng khí quản bã đậu, túi khí xuất huyết, viêm dày lên, đục, có dịch tiết bọt xoang bụng,dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu Các quan khác tim, tuyến tụy, gan, lách, thận, ruột, não… có tổn thương khơng nhiều • Bệnh tích vi thể - Các biến đổi bệnh tích vi thể gan chủ yếu thối hóa tế bào, xuất huyết chiếm cao 55% tượng biến đổi bệnh lý khác Các tương thâm nhiễm tế bào, sung huyết hay hoại tử tế bào chiếm 30% Ngồi bệnh tích tập trung nhiều quan/bộ phận: tuyến tụy xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm; tim, gan, thận, lách bị xuất huyết ix download by : skknchat@gmail.com kích thước trứng tỉ lệ đẻ giảm (72,72%) Riêng gà ni theo hướng thương phẩm có nhiều triệu chứng điển hình như: tăng tiết dịch, giảm ăn, giảm tăng trọng vật gầy gò (85,45%) Tuy nhiên, cá thể gà lại có triệu chứng lâm sàng khác phụ thuộc vào chế độ chăm sóc, ni dưỡng, khả miễn dịch thể, hay nhiễm vi khuẩn kế phát Nghiên cứu cho kết phù hợp với kết nghiên cứu số nhà khoa học P Vandamme Cs năm 1994, Hafz HM Cs năm 1994 Với gà từ 3-6 tuần tuổi có tỷ lệ mắc ORT cao với triệu chứng lâm sàng: bỏ ăn, mệt mỏi, gầy còm, dịch mũi, dịch miệng chảy nhiều, vật khó thở MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG Hình 4.6: Gà mệt mỏi, ủ rũ Hình 4.7: Gà khó thở thường há mồm để thở Hình 4.8: Phân gà màu cà phê (có thể màu trắng) Hình 4.9: Gà ủ rũ, xã cánh 41 download by : skknchat@gmail.com 4.5 XÁC ĐỊNH CÁC TỔN THƯƠNG ĐẠI THỂ CỦA GÀ MẮC BỆNH Sau theo dõi, quan sát, ghi lại triệu chứng lâm sàng chủ yếu, gà có triệu chứng lâm sàng điển hình gà mổ khám phịng thí nghiệm để quan sát biến đổi bệnh tích đại thể quan Kết mổ khám nghiên cứu bệnh tích đại thể chủ yếu gà mắc ORT thể qua bảng 4.5: Bảng 4.5: Kết biến đổi bệnh tích đại thể gà mắc ORT STT Biến đổi bệnh lý đại thể Khí quản xuất huyết, lịng khí quản có bã đậu Phổi xuất huyết, viêm có mủ tơ huyết Số Số có Tỷ lệ quan sát bệnh tích (%) 55 55 100 55 55 100 55 48 87,27 55 44 80,00 Túi khí xuất huyết, viêm dày lên, đục, có dịch tiết bọt xoang bụng, dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu Xoang bao tim xuất huyết, viêm, tim thối hóa Tuyến tụy xuất huyết 55 37 67,27 Gan sưng, xuất huyết 55 33 60,00 Lách, thận xuất huyết, lách sưng, viêm 55 28 50,90 55 22 40,00 55 15 27,27 Ruột sưng, van hồi manh tràng xuất huyết Não xuất huyết Kết bảng 4.5 cho thấy: Các biến đổi bệnh tích đại thể chủ yếu gà mắc ORT tập trung phần lớn quan hơ hấp phổi, khí quản quan khác tim, túi khí, 42 download by : skknchat@gmail.com tuyến tụy có tổn thương với tỷ lệ thấp đó: Phổi: Là quan biểu bệnh tích chủ yếu gà mắc ORT Trong 55 gà chúng tơi nghiên cứu mổ khám 100% gà có bệnh tích phổi, phổi có tượng xuất huyết, viêm dính, có trường hợp viêm có mủ có viêm tơ huyết Trong số 55 gà tiến hành mổ khám tất chúng có tượng viêm, xuất huyết màng phổi, số có tượng viêm có mủ, xuất huyết điểm bề mặt Từ cho thấy phổi mẫu bệnh phẩm quan trọng nghiên cứu bệnh ORT gà Khí quản: Sau phổi khí quản quản biểu rõ bệnh tích ORT với biến đổi đặc trưng như: 100% số gà mổ khám có tượng khí quản xuất huyết, lịng khí quản có xuất bã đậu màu trắng Túi khí: Có tới 87,27% số gà tiến hành mổ khám có biểu điển hình túi khí như: túi khí xuất huyết, viêm dày lên, đục, có dịch tiết bọt xoang bụng, dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu Tim: Hiện tượng xoang bao tim xuất huyết, viêm chiếm tới 80%, số có tượng viêm ngoại tâm mạc, tim thối hóa nhiên khơng phải điển hình mà chiếm tỷ lệ nhỏ Tuyến tụy: tuyến tụy xuất huyết, quan sát thấy có 37/55 có bệnh tích, chiếm 67,27% tổng số quan sát Gan: Bệnh tích chủ yếu gan sưng, có tượng xuất huyết chiếm 60% số gà quan sát, số có tượng gan viêm Lách: Lách xuất huyết, quan sát thấy 50,9% lách bị sưng to bình thường Thận: Bệnh tích thận gà mắc ORT khơng phải bệnh tích điển hình Hiện tượng thận sưng xuất huyết chiếm tỷ lệ 50,9% Não: Có tượng xuất huyết điểm khơng điển hình chiếm tỷ lệ 27,27% Đây khơng phải bệnh tích đặc trưng ORT gây nên, mức độ biến đổi phụ thuộc vào tiến triển bệnh kế phát bệnh khác Theo nghiên cứu số nghiên cứu giới cho thấy biến đổi bệnh tích khác tùy thuộc vào diễn biến bệnh 43 download by : skknchat@gmail.com nguyên nhân kế phát từ bệnh khác hay điều kiện chăm sóc, tính biệt lứa tuổi Ngồi bệnh tích điển hình bệnh ORT với gà ni theo hướng đẻ trứng bệnh tích điển hình khơng thể khơng kể đến như: trứng vỡ, trứng méo mó, chất lượng vỏ trứng giảm, dễ vỡ… Cùng với việc nghiên cứu biến đổi bệnh lý đại thể nhóm gà; chúng tơi tiến hành nghiên cứu mức độ tổn thương đại thể mà vi khuẩn ORT gây quan, phận Kết nghiên cứu tổng hợp thông qua bảng 4.6 Bảng 4.6: Mức độ tổn thương đại thể quan gà mắc ORT - tuần Gà đẻ Gà thịt (n = 33) (n = 11) (n = 11) Khí quản xuất huyết +++ ++ ++ Viêm phổi màng phổi +++ +++ +++ Viêm túi khí +++ +++ +++ Mặt sưng, phù thũng +++ +++ +++ Viêm ngoại tâm mạc ++ + + Gan xuất huyết + + + Thận, lách/tối viêm, xuất huyết + + + +++ +++ ++ Nhóm gà Cơ quan Tuyến tụy xuất huyết Ghi chú: -: khơng có bệnh tích; +: dương tính mức 1; ++: dương tính mức 2; +++: dương tính mức Kết bảng 4.6 cho thấy: bệnh vi khuẩn ORT gây ra, bệnh tích đại thể tập trung nhiều khí quản, phổi, túi khí mặt với bệnh tích đặc trưng: khí quản viêm, xuất huyết, có bã đậu; viêm phổi màng phổi, phổi có mủ tơ huyết, khí quản phổi có bã đậu; túi khí viêm dày lên,có dịch tiết bọt khoang bụng, dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu; mặt sưng phù thũng; gan, lách/tối: viêm, sưng, xuất huyết; ruột, tuyến tụy xuất huyết tràn lan Đây ngun nhân làm cho vật khó thở (chúng thường vươn cổ lên cao để thở; có liên tục vảy mỏ) 44 download by : skknchat@gmail.com Trong trình tiến hành mổ khám ghi lại hình ảnh bệnh tích đại thể gà mắc ORT mổ khám địa điểm thực tập: HÌNH ẢNH BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA GÀ MẮC ORT Hình 4.10: Phổi viêm, xuất huyết Hình 4.11: Xuất huyết khí quản, có bã đậu Hình 4.12: Túi khí viêm dày lên, đục, có Hình 4.13: Viêm bao tim, tim xuất huyết bã đậu 45 download by : skknchat@gmail.com Hình 4.14: Gan xuất huyết Hình 4.15: Lách, thận xuất huyết Từ hình ảnh cho thấy: khí quản xuất huyết tràn lan; khí quản phổi có chứa bã đậu chèn ép làm cho vật khó thở Trên bề mặt xuất dạng bã đậu bao phủ bề mặt phổi làm cho q trình hơ hấp vật gặp nhiều khó khăn (chúng thường vươn cổ lên cao để thở; có liên tục vảy mỏ) (Hình 4.10 hình 4.11) Túi khí bị viêm, đục dày lên, bề mặt xuất dạng bã đậu nằm rải rác (Hình 4.12) Hình 4.13 cho thấy: ngoại tâm mạc bị viêm, mỡ hóa, tim nhão/thối hóa; gan bị tụ huyết, xuất huyết tràn lan, sưng to; thận xuất huyết (Hình 4.14 hình 4.15) 4.6 XÁC ĐỊNH CÁC BỆNH TÍCH VI THỂ CỦA GÀ MẮC BỆNH Nghiên cứu biến đổi bệnh tích vi thể góp phần quan trọng nghiên cứu bệnh lý học vi thể bệnh ORT gây ra, từ hiểu rõ thêm chế tác động, đích tác động ảnh hưởng mức độ tế bào tác nhân gây bệnh gây Mỗi bệnh phẩm đúc thành hai block, block cắt thành nhiều tiêu để nhuộm màu chọn tiêu tốt quan để soi kính hiển vi đọc kết Kết mẫu bệnh phẩm thu thập block, slide, nghiên cứu trình bày bảng 4.7 Đánh giá bệnh tích vi thể: Nếu block có tiêu có bệnh tích trở lên coi dương tính Kết nghiên cứu dựa tiêu dương tính bệnh lý cịn lưu lại sau tổng hợp lại theo bảng sau: 46 download by : skknchat@gmail.com download by : skknchat@gmail.com Phổi Khí quản Gan Tuyến tụy Ruột Thận Lách Tim 16 22 24 16 30 22 32 34 Dương tính 40,00 55,00 60,00 40,00 75,00 55,00 80,00 85,00 Tỷ lệ % (n=20x2) 10 10 17 13 30 30 Dương tính 10,00 25,00 15,00 25,00 42,50 32,50 75,00 75,00 Tỷ lệ % (n=20x2) Sung huyết 47 n: Số block nghiên cứu, mẫu bệnh phẩm chọn block Cơ quan STT Xuất huyết 12 10 22 20 22 Dương tính 5.00 15,00 30,00 20,00 25,00 55,00 50,00 55,00 Tỷ lệ % (n=20x2) Thối hóa tế bào Tổn thương vi thể 4 11 18 19 Dương tính 15,00 10,00 10,00 20,00 15,00 27,50 45,00 47,50 Tỷ lệ % (n=20x2) Hoại tử tế bào Bảng 4.7 Biến đổi bệnh tích vi thể số quan gà mắc ORT 12 10 20 12 12 Dương tính 10,00 20,00 30,00 25,00 50,00 30,00 20,00 30,00 Tỷ lệ % (n=20x2) Thâm nhiễm tế bào viêm Qua bảng 4.7 ta nhận thấy trình tổn thương quan lại có khác nhau: Phổi: Phổi bị sung huyết xuất huyết lớn, hai bệnh tích chiếm tỷ lệ cao tới 85%,75%, thối hóa tế bào chiếm 55,00%, hoại tử tế bào phổi không nhiều chiếm 47,50% hay thâm nhiễm tế bào 30% Nhìn vào tế bào phổi gà mắc ORT thấy tượng xuất huyết từ hồng cầu tràn ngập vào lịng phế quản, ngồi tăng sinh tế bào tượng hoại tử tế bào xơ, phù kẽ phổi vài điểm tế bào quan sát Nhiều mao mạch bị căng phồng cục huyết khối Màng phổi túi khí dày lên nghiêm trọng phù nề lắng đọng tơ huyết kẽ Khí quản: Cũng phổi khí quản quan tập trung nhiều bệnh tích vi thể, xuất huyết chiếm tỷ lệ cao 80% số mẫu khí quản nghiên cứu có tượng xuất huyết, bên cạnh có tới 75% niêm mạc khí quản có tượng sung huyết, niêm mạc có tượng bong tróc Gan: Gan quan chủ yếu máy tiêu hóa với chức phức tạp nên dễ bị tổn thương, diễn biến bệnh lý gan lại phụ thuộc vào nhiều yếu tố thời gian kể từ tác nhân gây bệnh xâm nhiễm vào thể Sự tổn thương tế bào gan tập trung vào tế bào bị thoái hóa thâm nhiễm tế bào viêm đặc trưng Các tổ chức liên kết vỏ khơng có nhiều biến đổi, xuất nhiều hồng cầu gan bị xuất huyết nặng Tế bào gan thối hóa hậu trình rối loạn trao đổi protein Cấu trúc gan bị thay đổi, ranh giới tế bào gan khơng rõ ràng, thối hóa gan chiếm tỷ lệ lớn, nhân tế bào gan bị vỡ tan lẫn vào tế bào chất tạo thành hình ảnh đồng nhất, xem kính hiển vi màu hồng đồng với thuốc nhuộm Eosin Từ bảng nhận thấy biến đổi bệnh tích vi thể gan chủ yếu thối hóa tế bào, xuất huyết chiếm cao 55% tượng biến đổi bệnh lý khác Các tương thâm nhiễm tế bào, sung huyết hay hoại tử tế bào chiếm 30% Tuyến tụy: tuyến tụy xuất huyết với tỷ lệ lớn 75%, hoại tử tế bào không nhiều khoảng 15% Hiện tượng thâm nhiễm tế bào viêm chiếm tỷ lệ 50%, quan có tỷ lệ thâm nhiễm tế bào viêm cao so với quan khác 48 download by : skknchat@gmail.com Ngoài bệnh tích tập trung nhiều quan/bộ phận khác như: ruột, thận, lách, tim xuất huyết, sung huyết, tượng thâm nhiễm tế bào viêm, hoại tử tế bào, thối hóa tế bào chiếm tỷ lệ nhỏ Tổng hợp biến đổi bệnh lý gà mắc ORT, thu bảng 4.8 Bảng 4.8: Bảng tổng hợp biến đổi bệnh lý gà mắc ORT STT Nhóm gà Số mẫu Số mẫu dương Tỷ lệ dương tính (%) - tuần tuổi 252 212 84,13 Gà đẻ 144 119 82,64 Gà thịt 72 58 80,56 Tổng 468 389 83,12 Ghi chú: 13 x quan x Block/cơ quan x slide/Block Nhìn vào bảng 4.8 chúng tơi nhận thấy: tổng số 468 mẫu, có tới 389 mẫu cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 83,12% (389/468) Trong đó, gà - tuần tuổi có tới 212 mẫu cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 84,13% (212/252) Đây nhóm gà chiếm tỷ lệ cao phù hợp với nghiên cứu trước cho gà lứa tuổi - tuần có tỷ lệ nhiễm cao nhất; gà đẻ, có 119 mẫu cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 82,64% (119/144) cuối gà thịt có tỷ lệ dương tính thấp nhất, có 58 mẫu cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 80,56% (58/72) Trên tiêu vi thể chúng tơi thấy phổi có biến đổi rõ rệt nhất: phổi có tượng sung huyết, tất nhu mơ có lượng lớn hỗn hợp fibrin lẫn với đại thực bào tế bào heterophil nằm tự lòng mao mạch, phế nang đoạn cuống phổi Sự khuếch tán thâm nhiễm đại thực bào với số lượng tế bào heterophil Các ổ hoại tử lan rộng trung tâm lịng cuống phổi nhu mơ lân cận Ổ hoại tử thường chứa đầy chặt hỗn hợp tế bào hoại tử, heterophil thâm nhiễm chất tiết, có phân tán thành cụm nhỏ vi khuẩn Nhiều mao mạch bị căng phồng cục huyết khối Màng phổi túi khí dày lên nghiêm trọng phù nề lắng đọng tơ huyết kẽ Ngoài bệnh tích tập trung nhiều quan/bộ phận: khí quản bị bong tróc niêm mạc; tuyến tụy xuất huyết; tim, gan, thận, lách/tối bị xuất huyết 49 download by : skknchat@gmail.com HÌNH ẢNH BỆNH TÍCH VI THỂ CỦA GÀ MẮC ORT Hình 4.16 Tổn thương vi thể gà mắc ORT Kết hình 4.16 cho thấy: mức độ viêm quan/bộ phận khác khác Trên tiêu phổi vật kính 40X chúng tơi nhận thấy phổi bị xuất huyết tràn lan Ở vật kính 20X, quan sát thấy tế bào hồng cầu tràn ngập phế nang Đối với tiêu vi thể khí quản; vật kính 10X, quan sát thấy niêm mạc khí quản bị bong tróc Đối với tuyến tụy; vật kính 40X quan sát rõ tuyến tụy bị sung huyết 50 download by : skknchat@gmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đưa số kết luận sau: - Các chủng ORT phân lập có đặc điểm: khuẩn lạc nhỏ, khơng dung huyết xung quanh, màu xám tới xám trắng, bờ mặt lồi với bờ rìa rõ ràng Mặt khác giám định đặc tính sinh hóa thấy: Phản ứng catalase âm tính (khơng có tượng sủi bọt); Phản ứng Oxidase dương tính (xuất màu tím đen hay giấy đổi thành màu xanh); phản ứng Indol âm tính (khơng xuất vịng trịn đỏ) - Xác định triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh ORT: vật sốt, giảm/bỏ ăn, vật khó thở (vươn cổ, há mỏ thở, vảy mỏ), phân loãng nhày có màu cà phê màu trắng, chảy dịch mũi, dịch miệng, mặt bị sưng phù nề, vật gầy, lông xơ xác; với gà đẻ, vật giảm tỷ lệ đẻ, trứng biến dạng, méo mó; gà 3-6 tuần tuổi gà thịt giảm tăng trọng - Các tổn thương đại thể thường gặp quan gà mắc ORT chủ yếu gặp đường hô hấp như: khí quản xuất huyết, lịng khí quản có bã đậu; khí quản phổi xuất bã đậu, phổi viêm có mủ tơ huyết; viêm xoang bao tim, tim thối hóa; gan, lách/tối viêm, sưng, xuất huyết; thận viêm, xuất huyết; túi khí viêm dày lên,có dịch tiết bọt khoang bụng, dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu; mặt sưng phù thũng… - Xác định tổn thương vi thể gà mắc bệnh: với tất nhóm gà bệnh tích vi thể tập trung nhiều phổi, sau khí quản Tiếp theo, vi khuẩn nằm rải rác quan/tổ chức thể: tim, gan, thận, lách với biến đổi đặc trưng sung huyết, xuất huyết, thối hóa, hoại tử tế bào hay thâm nhiễm tế bào viêm 5.2 KIẾN NGHỊ Đây đề tài nghiên cứu Việt Nam, nhiên bệnh vi khuẩn ORT gây gà dễ nhầm với bệnh đường hô hấp khác: Mycoplasma, viêm khí quản truyền nhiễm, CRD Vì vậy, cần có nghiên cứu sâu tượng đồng nhiễm loại bệnh nhằm tìm biện pháp chẩn đoán phân biệt hữu hiệu giúp người chăn ni q trình phịng, trị bệnh đàn gà 51 download by : skknchat@gmail.com Tiếp tục ứng dụng phản ứng PCR với loại mẫu bệnh phẩm khác để chẩn đoán phát sớm gà mắc ORT từ đưa biện pháp điều trị bệnh đạt hiệu cao giảm thiệt hại cho người chăn nuôi Tiến hành nghiên cứu sâu sinh học phân tử để thu kết có giá trị thực tiễn cao Hiện nay, tình trạng lạm dụng thuốc kháng sinh chăn ni diễn phổ biến Vì vậy, cần có chiến lược sử dụng kháng sinh cho hiệu trình điều trị bệnh gà nói chung bệnh đường hơ hấp gà nói riêng Cho đến nay, Việt Nam chưa có vacxin phịng bệnh ORT cho đàn gà Vì vậy, cần có nghiên cứu chun sâu đặc tính sinh học, sinh học phân tử để từ làm sở cho việc sản xuất chế phẩm sinh học vacxin phòng bệnh ORT Việt Nam 52 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO • Tài liệu tiếng việt Võ Thị Trà An Nguyễn Thị Bích Liên, Trần Thị Ngọc Hân, Hồ Quang Dũng, Niwwat Chansiripornchai, 2014 Nhận dạng, phân lập xác định mước độ mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Orninobacterium rhinotracheale gà Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 21(7): 23-27 Nguyễn Thị Lan Nguyễn Vũ Sơn, Nguyễn Hữu Nam, Nguyễn Thị Hoa, Lê Văn Năm, 2014 Bệnh Orninobacterium rhinotracheale(ORT) gà thơng tin để chẩn đốn, phịng trị bệnh (bài tổng hợp).Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 21(5): 77- 83 • Tài liệu tiếng anh Alongkorn Amonsin, James, F X., Wellehan., Ling-Ling Li., Peter Vandamme., Cynthia Lindeman., Marilyn Edman., Robert, A., Robinson., and Vivek Kapur., 1997 MolecularEpidemiology of Ornithobacterium rhinotracheale Journal of Clinical Microbiology 35(11): 2894-2898 Bock, R Frewidlin, P Tomer, S Manoim, M Inbar, A Frommar, A Vandamme, P Wilding, P and Hickson, D., 1995 Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) associater with a new turkry respiratory tract infectious agent Proe 33 rd Annual Convention of the Israel Branch of the World Veterinary Association, 43- 45 Bozorgmenrifard, M.H., Asadpour, Y., Pourbakhsh, S.A., Banani, M and Charkhkar, S., 2008 Isolation and indentification of Ornithobacterium rhinotracheale in broiler breeder flocks of Guilan Province, NORTh of Iran Pakistan Jourl of Biological Sciences, 11: 1487- 1491 Chansiripornchai, N., 2004 Molecular Interaction of Ornithobacterium rhinotracheale with Eukaryotic Cells Utrecht University, Netherlands Charlton, B R Channing-Santiago, S E Bickford, A A Cardona, C J Chin, R P Cooper, G L Droual, R Jeffrey, J S Meteyer, C U Shivaprasad, H L and Walker, R., 1993 Preliminary characterization of a pleomorphic gram-negative rod associated with avian respiratory disease J Vet Diagn Invest 5:47–51 53 download by : skknchat@gmail.com Evans, R Walters, J LeRoith, T Sriranganathan, N McElroy, A and Pierson Source, F W., 2014 Avian Diseases, 58(1):78-82 Ferreri, M Zahra, M Alkasir R Yin T Han B., 2013 Isolation and characterizaition of small-colony variants of Ornithobacterium rhinotracheale Journal of Clinical Microbiology, 51 (10): 3228- 3236 10 Field, D C., 1996 Observations of ORT infection in an integrated turkey operation In: Proc Turkey ORT Scientific Symposium organized by Roche Animal Nutrition and Health Minneapolis Roepke, MN September 4–6 11 Hafez, H M., 1996 Current status on the role of Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) in respiratory disease complexes in poultry Arch Gefluă gelkd 60:208211 12 Hafez, H M Mohamed Zahra., 2002 Diagnosis of Ornithobacterium Rhinotracheale, Institute of Poultry Diseases, Free University Berlin Koserstr.21, 14.195 Berlin, Germany; International Journal of Poultry Science 1(5): 114-118 13 Hafez, H M., 1994 Respiratory disease conditions in meat turkeys caused by Ornithobacterium rhinotracheale: clinical signs, di- agnostics and therapy Proc West Poult Dis Conf 43:113–114 14 Hinz, K H and Hafez, H M., 1997 The early history of Ornithobacter- ium rhinotracheale (ORT) Arch Gefluă gelkd 61:95 - 96 15 Hinz, K H Blome, C and Ryll, M., 1994 Acute exudative pneumonia and airsacculitis associated with Ornithobacterium rhinotracheale in turkeys Vet Rec 135:233–234 16 J Walters, R Evans, T LeRoith, N Sriranganathan, A McElroy, and F W Pierson in Experimental Comparison of Hemolytic and Nonhemolytic Ornithobacterium rhinotracheale Field Isolates In Vivo; Avian Diseases, 58(1):7882 2014 17 Karrimi, V Hassanzadeh, M Fallah N Ashrafi I., 2010 Molecular characterizaition of Ornithobacterium rhinotracheale isolated from broiler chicken flocks in Iran Turk J Vet.Anim Sci., 34(4): 526-530 18 Soriano, V E Longinos, M G Navarrete, P G and Fernández, R P., 2002 Identification and Characterization of Ornithobacterium rhinotracheale Isolates from Mexico; Avian Diseases, 46(3):686-690 54 download by : skknchat@gmail.com 19 Sprenger, S J Back, A Shaw, D P Nagaraja, K V Roepke, D C and Halvorson, D A., 1998 Ornithobacterium rhinotracheale infection in turkeys: experimental reproduction of the disease Avian Dis 42:154–161 20 Van Empel, P Van den Bosch, H Experimental infection in Goovaerts, D turkeys and chickens and Storm, P., 1996 with Ornithobacterium rhinotracheale Avian Dis 40:858–864 21 Vandamme, P Segers, P Vancanneyt, M van Hove, K Mutters, R Hommez, J Dewhirst, F Paster, B Kersters, K Falsen, E Devriese, L A Bisgaard, M Hinz, K H and Mannheim, W., 1994 Ornithobacterium rhinotracheale gen nov., sp nov., isolated from the avian respiratory tract Int J Syst Bacteriol 44:24–37 55 download by : skknchat@gmail.com ... cấp thiết trên, tiến hành triển khai đề tài: ? ?Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý bệnh Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) đàn gà thả vườn tỉnh Ninh Bình. ” 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Nghiên cứu biểu... thể đàn gà mắc ORT từ có phương pháp chẩn đốn bệnh nhanh, xác phân biệt với bệnh khác 1.3 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI Các kết nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý đàn gà mắc bệnh ORT tỉnh. .. GIAN NGHIÊN CỨU - Thời gian thực hiện: Từ 9/2015 đến 8/2016 3.3 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU - Gà thả vườn mắc mắc Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) huyện Yên Mô, tỉnh Ninh Bình 3.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU