Quan sát hình dạng khuẩn lạc: vi khuẩn được cấy ria trên môi trường thạch NA, sau 2 ngày quan sát hình thái bề mặt, màu sắc, kích thước…
Quan sát hình thái tế bào: vi khuẩn được nuôi trong môi trường dịch thể NA sau 24h, quan sát tế bào
Nhuộm Gram:
▪ Dung dịch tím kết tinh: 2 g tím kết tinh hòa tan trong 20ml ethanol 95%, 8 g ammoni oxalate hòa tan trong 80ml nước cất, trộn 2 dung dịch trên lại với nhau, giữ 48 h rồi lọc. Bảo quản trong lọ tối màu, sử dụng trong vài tháng.
▪ Dung dịch Lugol: hòa tan 2 g KI trong 30 ml nước cất, thêm 1g iodine, khuấy cho tan hết, thêm nước cất cho đủ 300 ml. Bảo quản trong lọ tối màu.
▪ Dung dịch tẩy màu: ethanol 95% hoặc trộn hỗn hợp 70ml ethanol 95% với 30 ml acetone.
▪ Dung dịch nhuộm bổ sung: chuẩn bị sẵn dung dịch Safranin O 2,5% trước khi dung dịch pha với nước cất theo tỷ lệ 1:5 để có dung dịch 0,5%.
Cách tiến hành
▪ Chuẩn bị vết bôi: dùng que cấy vô trùng lấy 1 ít vi khuẩn từ thạch (sau khi cấy khoảng 16 h) hòa vào 1 giọt nước nhỏ sẵn trên lam kính, làm khô trong không khí. ▪ Cố định tế bào: hơ nhanh vết bôi trên ngọn lửa đèn cồn, 2-3 lần.
▪ Nhuộm bằng dung dịch tím kết tinh trong 1 phút, rửa nước, thấm khô. ▪ Nhuộm lại bằng dung dịch Lugol trong 1 phút, rửa nước, thấm khô.
▪ Nhỏ dịch tẩy màu, giữ khoảng 30 giây (cho đến khi vừa thấy mất màu), rửa nước, thấm khô.
▪ Nhuộm bổ sung bằng dung dịch Safranin trong 2-3 phút, rửa nước, để khô trong không khí.