Những nghiên cứu về phytase ở Việt Nam

Một phần của tài liệu Phân lập tuyển chọn vi sinh vật sinh enzyme phytase170008 (Trang 40)

Trần Thị Tuyết và cộng sự (Viện Sinh học Nhiệt đới) đã nghiên cứu lên men bề mặt cám mỳ để thu phytase sử dụng A. niger NRRL 363 (từ Bộ sưu tập giống của Mỹ) thu được 572,78 U/g cơ chất lên men sau 2 ngày nuôi cấy, độ ẩm ban đầu thích hợp là 60%. Phytase thu được có hoạt tính tối ưu tại pH 5,5 và nhiệt độ tối ưu ở 55oC [142].

Nguyễn Thùy Châu (Viện Cơ điện Nông nghiệp và Công nghệ sau Thu hoạch) từ 1/2007 – 12/2009 đã nghiên cứu và hoàn thiện công nghệ sản xuất phytase bằng hình thức lên men bề mặt. Trong nghiên cứu đã sử dụng các chủng vi sinh vật: A. niger ATCC 9142, A. ficcum NRRL 3135 từ bộ sưu tập giống của Mỹ; A. niger

NCIM, Rhizopus microsporus từ Cộng hòa Séc và chủng A. niger DL1 phân lập từ Việt Nam. Nhóm tác giả đã nghiên cứu quy trình lên men rắn sản xuất phytase ở qui mô công nghiệp. Theo đó chủng sản xuất được lên men ở nhiệt độ 30oC trong 7 ngày trên môi trường P3. Cơ chất sau lên men được tách chiết enzyme bằng dịch oxy già 5%, enzyme thô được thu bằng ly tâm và tủa bằng cồn 96oC, sấy khô tạo chế phẩm VS1. Khảo nghiệm tác động của chế phẩm trên gà cho thấy 200 g chế

phẩm VS1 bổ sung cho 1 tấn thức ăn có thể thay thế cho 4,2% lượng dicanxi phosphate trong khẩu phần thức ăn [3].

Năm 2011, Ngô Thanh Xuân và các cộng sự đã nghiên cứu tạo phytase tái tổ hợp từ Aspergillus niger XP trong nấm men Pichia Pastoris và đã có những bước đầu ứng dụng trong chăn nuôi. Theo nghiên cứu, từ 268 chủng nấm sợi đã tuyển chọn được 1 chủng (XP) sinh phytase ngoại bào trên môi trường dịch thể và bã sắn phế thải và chủng được xác định là Aspergillus niger. Phytase tinh sạch từ A. niger

XP có khối lượng khoảng 66 kDa, bền và hoạt động tốt trong môi trường axit, có pH tối ưu ở 3,0 và 5,0, nhiệt độ tối ưu 60oC, thể hiện hoạt tính trong cả pha dạ dày và pha ruột non của động vật. Sau đó đã được nhân dòng, phân tích trình tự gen mã hóa phytase (phyA) từ 7 chủng A. niger. Gen phyA đã được biểu hiện trong P. pastoris X33 và P. pastoris KM71H. Thể biến nạp P. pastoris cao nhất xác định 6 copy, có hoạt tính gấp 2,6 - 3,2 lần so với chủng đơn copy. Tiếp theo nghiên cứu đã tiến hành xác định đặc tính phytase tái tổ hợp tương đồng với phytase từ chủng dại

A. niger XP, pH tối ưu ở 2,5 và 5,0, nhiệt độ tối ưu 60o C, bảo toàn hoạt tính khi ở nhiệt độ thấp hơn 50oC, còn lại 25,4% hoạt tính khi xử lý ở 70oC trong 1h, giữ trên 78% hoạt tính trong dải pH 2,0 - 8,0. Phytase có ái lực mạnh và phân cắt tốt cơ chất Na- phytate, không mẫn cảm với pepsin, mẫn cảm với pancreatin, thủy phân tốt cơ chất trong các nguyên liệu làm thức ăn chăn nuôi ở pha dạ dày. Điều kiện nuôi cấy tối ưu cho chủng tái tổ hợp P. pastoris X33.2000.5 trên môi trường BMM là 28oC, 96h nuôi, pH 6,0 và 1% methanol, năng suất phytase tối đa đạt 1329 U/ml, lượng protein đạt 1,71 g/l. Nhóm nghiên cứu cũng đã tạo được chế phẩm phytase tái tổ hợp dạng bột có khả năng bền nhiệt. Sau đó đã tiến hành thử nghiệm bước đầu ảnh hưởng chế phẩm phytase lên vật nuôi: Phytase từ A. niger XP khi sử dụng đơn lẻ hoặc kết hợp với các chế phẩm xylanase, amylase vào thức ăn cho gà Lương Phượng, giúp tăng trọng gà lên từ 5,6 -25,7% và giảm tiêu tốn thức ăn từ 4,6 - 12,7%. Bổ sung phytase tái tổ hợp đơn lẻ hoặc hoặc kết hợp với xylanase và amylase trên lợn, giúp tăng trọng lợn từ 5,4 - 7,4% và giảm tiêu tốn thức ăn (7,6 - 9,6%) khi nuôi bằng khẩu phần thiếu P và sử dụng phytase tái tổ hợp 1000 U/kg

thức ăn sẽ thay thế được hoàn toàn lượng P vô cơ, giúp giảm giá thành của thức ăn, giảm từ 21,9% - 41,9% lượng cơ chất phytate thải qua phân [2].

Năm 2010, Trần Thị Thúy và cộng sự (khoa công nghệ sinh học đại học Lund, Thụy Điển) đã nghiên cứu phytase bền nhiệt từ 1 chủng Bacillus sp. MD2. Phytase từ chủng này được xác định là ß-propeller phytase. Gen phytase được xác định, nhân dòng và biểu hiện ở Escherichia coli và tối ưu hóa quá trình sinh tổng hợp phytase để có sản lượng cao. Nghiên cứu đã tập trung vào tối ưu hóa quy mô sản xuất, thời gian, sử dụng lactose là yếu tố cảm ứng thay thế giúp quá trình sản xuất đạt sản lượng cao hơn và rẻ hơn. Cũng trong đề tài này, tác giả và cộng sự đã nghiên cứu ảnh hưởng của các ion kim loại hóa trị II lên hoạt động của phytase, vai trò của Ca2+ đối với hoạt tính, độ bền nhiệt của phytase và tiềm năng sử dụng phytase trong việc thủy phân các phức phytase- ion kim loại trong thức ăn chăn nuôi [140].

Một phần của tài liệu Phân lập tuyển chọn vi sinh vật sinh enzyme phytase170008 (Trang 40)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(125 trang)