M Ở ĐẦU
2.3.1. Phương pháp phân tích thành phần chính của nguyên liệ ụ
Để lựa chọn loại nguyên liệu thích hợp cho quá trình trích ly các chất flavonoid đạt hiệu suất thu nhận và chất lượng cao, chúng tôi tiến hành xác định hàm lượng các thành phần chính có trong nguyên liệu bao gồm: độ ẩm, flavonoid tổng, tinh bột, xenluloza, đường tổng, protein.
Các phương pháp xác định hàm lượng các thành phần chính của nguyên liệu như sau:
+ Xác định độ ẩm của nguyên liệu bằng phương pháp sấy đến trọng lượng không đổi TCVN 5613-1991
+ Xác định hàm lượng xenluloza theo TCVN 4590 - 88
+ Xác định hàm lượng protein bằng phương pháp Kjeldahl AOAC 991.20 + Định lượng flavonoid trong nguyên liệu
Chiết xuất hợp chất flavonoid : Cân chính xác 10 g nguyên liệu đã được xay nhỏ cho vào bình cầu (V = 250 ml). Thêm vào đó 150 ml MeOH 80%, trích ly hồi lưu trong thời gian 4 h, lọc dịch chiết, cô bớt dung môi, sau đó đưa về thể tích 50 mL dung dịch để phân tích [41, 42].
Xác định hàm lượng flavonoid tổng: bằng phương pháp đo quang dựa trên phản ứng tạo màu của flavonoid. Thêm vào 1ml dịch chiết (chứa các chất flavonoid), 120 µl dung dịch 5% NaNO2, khuấy trong 5 phút, sau đó thêm 120 µl dung dịch 10% AlCl3 lắc đều để yên trong 6 phút, sau đó thêm vào đó 800 µl dung dịch 1M NaOH. Hỗn hợp dung dịch trên được hoà tan thành 4 ml trong dung dịch H2O, để yên trong 10 phút, so màu trên máy quang phổ ở bước sóng 510 nm. Kết quả được so sánh với đường chuẩn và flavonoid tổng được tính theo mg quercetin/ 1g trọng lượng khô. [41,42]
Xây dựng đồ thị chuẩn quercetin: Cân chính xác 50 mg quercetin hoà tan trong 50 ml nước cất được dung dịch quercetin với nồng độ 0,2mg/ml lần lượt lấy từ 0,1 – 0,6 ml dung dịch chuẩn quercetin, làm phản ứng màu tương tự như trên. Từ tương quan giữa số mg quercetin với cường độ màu đo được (E), xây dựng đường chuẩn quercetin.
Hàm lượng flavonoid tổng số dược tính theo công thức sau: P % = (m1.V.100)/(m2.v.1000)
Trong đó:
P: hàm lượng flavonoid tính theo % chất khô m1: số mg flavonoid xác định theo đồ thị chuẩn v: số ml dịch chiết lấy làm thí nghiệm
V: tổng số dịch chiết của mẫu nghiên cứu (ml)
m2: khối lượng mẫu nghiên cứu tính theo chất khô (g) 100: tính ra %