Sinh khối sau khi nuơi cấy và được thu tại thời điểm kết thúc pha log bắt đầu vào pha cân bằng, sau khi rửa 2 lần với nước cất tuyệt trùng, được ủ với dầu BC qua đêm. Khả năng thấm qua màng tế bào được thể hiện qua hàm lượng BC đi vào trong tế bào. Kết quả thu được như sau:
Mơi trường Tính dị hướng huỳnh quang (r)
Hình 3.21: Hàm lượng BC (µg/g) của Y. lipolytica W29 trên các mơi trường
Khả năng thấm qua màng của BC phụ thuộc vào mơi trường nuơi cấy. Trên
cùng một chủng giống nấm men Y. lipolytica W29 cho các kết quả khác nhau. Cụ thể
như trên mơi trường sử dụng glucose làm nguồn C thì mơi trường nghèo N (YNBD) cĩ hiệu suất chuyển chất cao hơn mơi trường giàu N (YPD) đạt 6,6 – 6,7 (μg/g sinh khối ướt), cao gấp 3 lần. Cịn trên mơi trường sử dụng lipid làm nguồn C thì mơi trường nghèo N YNBO cũng cĩ hiệu suất chuyển chất cao hơn mơi trường YPO 1,1 – 1,2 lần.
Mơi trường nghèo N nhưng cĩ nguồn C khác nhau, tế bào nuơi trên mơi trường cĩ nguồn C là glucose cĩ hiệu suất chuyển chất đối với BC cao hơn 1,2 -1,3 lần so với mơi trường cĩ nguồn C là lipid.
Sự khác nhau về hiệu suất chuyển chất BC của Y. lipolytica W29 trên các mơi
trường khác nhau là do cĩ sự khác nhau về tính chất màng tế bào thơng qua khảo sát hàm lượng sterol tự do và kết quả đo tính lỏng màng tế bào.
Hàm lượng sterol tự do trên màng tế bào nấm men Y. lipolytica W29 trên mơi
trường YNBD cao hơn so với mơi trường YPO và YNBO nhưng thấp hơn mơi trường YPD; đồng thời tính lỏng màng tế bào (r) của nấm men nuơi trên mơi trường YNBD
thấp hơn các mơi trường YNBO, YPO và YPD. Điều này giải thích tế bào nấm men Y.
lipolytica W29 nuơi trên mơi trường YNBD màng tế bào lỏng hơn các mơi trường cịn
lại, tạo điều kiện cho sự xâm nhập của BC qua màng tế bào nhiều hơn.
Bên cạnh đĩ, BC tan trong dầu xâm nhập qua màng tế bào cùng với sự xâm nhập của dầu, dầu xâm nhập qua màng tế bào nấm men càng nhiều thì lượng BC cũng
đi vào càng nhiều. Vì vậy, ta cần kiểm tra lại sự cĩ mặt của BC trên các mơi trường sau khi tiếp xúc thơng qua phương pháp nhuộm lipid bằng thuốc nhuộm huỳnh quang Nil red. Kết quả được chỉ ra dưới đây:
(a) (b)
(c) (d)
Hình 3.22: Y. lipolytica W29 sau khi tiếp xúc với BC trên các mơi trường khác nhau: (a)
mơi trường YPD; (b) mơi trường YNBD; (c) mơi trường YPO; (d) mơi trường YNBO
Hình 3.22 giới thiệu các thể lipid (cĩ chứa BC) trong tế bào nấm men Y.
lipolytica W29 sau khi tiếp xúc qua đêm với BC ở các điều kiện mơi trường khác nhau
bởi thuốc nhuộm Nile Red. Quan sát dưới kính hiển vi cho thấy sự khác nhau về khả
năng chuyển khối đối với BC giữa các tế bào nấm men Y. lipolytica W29 từ các mơi trường nuơi cấy khác nhau. Và tế bào nấm men Y. lipolytica W29 khi nuơi trong mơi
trường YNBD cho hiệu suất chuyển khối với BC cao hơn các mơi trường cịn lại ở cùng một điều kiện với các thể lipid nhiều hơn và rõ nét hơn.
Như vậy, qua các khảo sát trên cho thấy khả năng thẩm thấu BC phụ thuộc vào
chủng giổng nấm men, nấm men Y. lipolytica W29 cĩ khả năng chuyển chất BC cao hơn chủng S. cerevisiae TNS.c ở cùng điều kiện nuơi cấy; và phụ thuộc vào mơi trường nuơi cấy: với chủng Y. lipolytica W29 thì khả năng chuyển chất BC trên mơi
trường YNBD cao hơn các mơi trường cịn lại cũng ở cùng điều kiện nuơi cấy.
Vì vậy, chúng tơi quyết định chọn mơi trường YNBD với chủng nấm men Y.
lipolytica W29 để tính hành những khảo sát sâu hơn về khả năng chuyển các chất qua
màng tế bào khi điều kiện mơi trường nuơi thay đổi nhằm chọn ra điều kiện tối ưu cho khả năng thấm BC qua màng tế bào. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});