Dựa trên chiến lược giảm độc lực cho vắcxin dự tuyển DENV-1 và DENV-4, đột biến mất 30 nucleotide tương tự trên rDEN4∆30 được thực hiện trên cDNA của chủng DENV-2 hoang dại Tonga/74 [8]. Tiếp theo, virút rDEN2∆30 được đánh giá trên chuột, muỗi và khỉ. DENV-2 Tonga/74 hoang dại, DENV-2 hoang dại tái tổ hợp từ cDNA (rDEN2), và rDEN2∆30 đều không có khả năng lây nhiễm vào ruột muỗi A.aegypti. Gây nhiễm rDEN2∆30 vào chuột SCID-HuH-7 bị giảm 10 lần nồng độ đỉnh trung bình so với DENV-2 Tonga/74 hoang dại và rDEN2. Tuy nhiên, khi gây nhiễm khỉ rhesus với rDEN2∆30, nồng độ đỉnh trung bình và thời gian nhiễm virút huyết trong những con khỉ này chỉ ít hơn một chút so với những con được gây nhiễm với rDEN2. Do không thể chứng minh sự giảm độc lực đáng kể của rDEN2∆30 so với virút bố mẹ “tự nhiên”, chủng tái tổ hợp này không được tiếp tục đánh giá thử nghiệm lâm sàng.
Một vắcxin DENV-2 dự tuyển thứ hai được phát triển bằng cách sử dụng hai kỹ thuật giảm độc lực: lai ghép các virút dengue khác nhau và đưa đột biến ∆30 vào trong 3’ UTR của DEN4. Việc này được thực hiện bằng cách thay thế các vùng mã hóa prM và E của rDEN4∆30 bằng các vùng mã hóa tương ứng từ chủng DENV-2 NGC, tạo ra virút khảm rDEN2/4∆30(ME). Chỉ riêng thể khảm rDEN2/4 (ME) (không có đột biến ∆30) đã giảm độc lực khi gây nhiễm trên chuột SCID- HuH-7 với thấp hơn 20 lần nồng độ đỉnh trung bình so với gây nhiễm các virút bố mẹ DENV-2 hoặc DENV-4. Khi đột biến ∆30 được kết hợp với khảm rDEN2/4 (ME), mức giảm về nồng độ đỉnh trung bình khoảng 0.5 log10 PFU/ml. rDEN2/4∆30 (ME) cho thấy nhiễm trên muỗi A.aegypti kém hơn cả hai virút bố
41
mẹ. rDEN2/4∆30 (ME) cũng giảm độc lực đáng kể trên khỉ rhesus so với cả hai chủng bố mẹ hoang dại [13].
rDEN2/4∆30 (ME) tiếp tục được đánh giá về tính an toàn và sinh miễn dịch trong ba thử nghiệm lâm sàng tách biệt. Các kết quả thu được từ những thử nghiệm này cũng tương tự như đối với chủng rDEN1∆30. Một liều tiêm đơn rDEN2/4∆30 (ME) cũng có thể tạo ra miễn nhiễm đối với virút vắcxin trong vòng 6 tháng với 100% số người tiêm (17/17). Do vậy rDEN2/4∆30 (ME) cũng được lựa chọn như là một thành phần DEN-2 trong vắcxin tứ liên.