- Xỏc ủịnh sự tăng sinh khối callus trong mụi trường lỏng lắc bằng cỏch cõn trọng lượng callus trước và sau khi nuụi cấy, từ ủú tớnh hệ số tăng sinh
2. Callus Valencia cứng trờn mụi trường cú bổ sung 2mg/l 2,4D và 2mg/l Kinetin
3.2.1. Ảnh hưởng của CðHST ủến nhõn sinh khối callus ở2 giống citrus
Dựa trờn kết quả nghiờn cứu ảnh hưởng của CðHST ủến sự hỡnh thành callus, chỳng tụi tiếp tục sử dụng kinetin và BAP trong mụi trường nhõn sinh khối callus. Kết quả thớ nghiệm ủược trỡnh bày trờn bảng 3.5.
Bảng 3.5. Ảnh hưởng BAP và kinetin ủến nhõn sinh khối callus Cam Sành Cam Valencia Chất ðHST Nồng ủộ (mg/l) Hệ số nhõn sinh khối (lần) ðặc ủiểm callus Hệ số nhõn sinh khối (lần) ðặc ủiểm callus 0 1,05a * 1,11e * 0,5 1,32ab * 1,51ef * 1,0 2,03a * 1,95 f * 2,0 1,84b * 2,14g * BAP 3,0 1,72a * 1,77e * 0 1,05c * 1,11f * 0,5 1,14c * 1,36e * 1,0 1,78a * 1,88g * 2,0 1,57bc * 1,72fg * Kinetin 3,0 1,39b * 1,69de *
a,b,c hoặc e,f,g: cỏc yếu tố sai khỏc nhau cú ý nghĩa với mức ý nghĩa α = 0,05 *: Callus trắng, xốp, rời rạc
Nhỡn vào bảng 3.5 chỳng tụi nhận thấy khi bổ sung thờm CðHST hay khụng bổ sung thỡ sinh khối của callus của cả hai giống ủều tăng lờn, tuy
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 61
111 11 1
Hình 3.6. Callus trên mơi tr−ờng bổ sung 2mg/l BAP
1. Cam Sành 2. Cam Valencia
222 22 2 1 1 1 1
nhiờn khi bổ sung CðHST thỡ sinh khối của callus ủó ủược cải thiện hơn, cao nhất là 2,14lần ủối với cam Valencia khi bổ sung 2mg/l BAP, và 2,03 lần ủối với cam Sành khi bổ sung 1mg/l BAP. Và khi bổ sung kinetin thỡ sinh khối callus của cả hai giống cũng tăng lờn nhưng khụng cao như khi bổ sung BAP.
Qua thớ nghiệm này chỳng tụi nhận thấy, trong giai ủoạn nhõn sinh khối nhu cầu về xytokynin của callus ở hai loại giống citrus ủều cú xu hướng giảm
ủi so với giai ủoạn tạo callus ban ủầu. Hiện tượng này ủó ủược bỏo cỏo trong
nhiều nghiờn cứu về phỏt sinh callus trờn cỏc ủối tượng thực vật khỏc nhau. Nguyờn nhõn của hiện tượng này cú thể do trong giai ủoạn cảm ứng, mẫu ủó
tớch luỹ ủủ CðHST với nồng ủộ cần thiết ủể hỡnh thành callus, vỡ vậy chỉ cần bổ sung 1 lượng nhỏ cỏc chất này nhằm kớch thớch callus tăng sinh [26, 39]. Như vậy, việc xỏc ủịnh cõn bằng giữa auxin và cytokinin nội sinh và ngoại
sinh là rất quan trọng trong từng giai ủoạn phỏt triển khỏc nhau của tế bào như khởi ủầu nuụi cấy hoặc nhõn sinh khối callus.
3.2.2. Ảnh hưởng của hàm lượng Malt extract
Malt extract (ME) là chất cú thành phần khụng xỏc ủịnh, khi bổ sung
vào mụi trường nuụi cấy sẽ kớch thớch sinh trưởng của mụ tế bào [52]. Bờn cạnh ủú, ME cũng cú ảnh hưởng tớch cực ủối với sự phỏt triển của mụ tế bào
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 62
in vitro ở nồng ủộ từ 0,5 - 1 g/l. Cỏc thành phần trong ME rất phức tạp bao
gồm hỗn hợp cỏc vitamin và axit amin, là nguồn cung cấp nitơ hữu cơ phong phỳ cho mẫu [52]. Vỡ vậy, chỳng tụi tiến hành thớ nghiệm nghiờn cứu so sỏnh
ảnh hưởng của ME với cỏc nồng ủộ khỏc nhau ở hai giống cam Sành và cam
Valencia, kết quả thớ nghiệm ủược trỡnh bày trờn bảng 3.6.
Bảng 3.6. Ảnh hưởng của ME ủến nhõn sinh khối ở hai giống cam Sành và cam Valencia
Cam Sành Cam Valencia ME ( g/l) Hệ số nhõn
sinh khối (lần) ðặc ủiểm callus Hệ số nhõn sinh khối (lần) ðặc ủiểm callus
0 1,45a * 1,61e *
0,5 2,62c * 2,85f *
1,0 2,33b * 2,65ef *
2,0 1,94bc * 2,35 e *
a, b : Cỏc yếu tố sai khỏc nhau cú ý nghĩa với mức ý nghĩa α= 0,05
e,f : Cỏc yếu tố sai khỏc nhau cú ý nghĩa với mức ý nghĩa α = 0,05 * : Callus trắng, xốp, rời rạc Ở giai ủoạn này việc bổ sung ME vào mụi trường nuụi cấy cú vai trũ
tớch cực ủối với khả năng tăng sinh khối callus của cả hai giống cam (P <
0,05). Khi nồng ủộ ME tăng từ 0,5 ủến 2,0 g/l làm sinh khối callus cũng tăng lờn so với nguồn mẫu ban ủầu, trong ủú nồng ủộ 0,5 g/l cho hệ số nhõn sinh khối trung bỡnh cao nhất là 2,62 lần (cam Sành) và 2,85 lần (cam Valencia), sau ủú hệ số nhõn sinh khối cú xu hướng giảm ở nồng ủộ 1 - 2g/l. Theo phõn tớch thống kờ thỡ ở nồng ủộ 0,5 và 1g/l mức ý nghĩa P > 0,05 tức là hàm lượng ME 1 g/l và 2 g/l ảnh hưởng như nhau ủến hệ số nhõn callus. Như vậy việc bổ sung ME với hàm lượng 1,0 và 2,0g/l vào mụi trường nhõn sinh khối callus sẽ cho hệ số nhõn như nhau.
Ngoài ra, trong quỏ trỡnh thớ nghiệm chỳng tụi cũng nhận thấy phản ứng tạo callus ở trờn mụi trường cú bổ sung thờm 1 g/l ME cho phản ứng nhanh
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 63
khi khụng cú chất bổ sung hoặc bổ sung với hàm lượng cao hơn. Như vậy, việc phỏt hiện ảnh hưởng của ME ủó cải thiện ủỏng kể hệ số nhõn callus, nú
ủỏp ứng mục ủớch tối ưu hoỏ quy trỡnh vi nhõn giống trờn ủối tượng này.