- Xỏc ủịnh sự tăng sinh khối callus trong mụi trường lỏng lắc bằng cỏch cõn trọng lượng callus trước và sau khi nuụi cấy, từ ủú tớnh hệ số tăng sinh
2. Giai ủoạn hỡnh phụi tim 4 Phụi phỏt triển khụng bỡnh thường
2 1 1
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 80
Như vậy, phụi soma từ callus cũng trải qua cỏc giai ủoạn ủặc trưng là
phụi hỡnh tim, dấu hiệu của tiền hai lỏ mầm, khỏc với giai ủoạn phỏt triển phụi hữu tớnh của cõy một lỏ mầm, gồm cú giai ủoạn hỡnh cầu, giai ủoạn hỡnh
khiờn (hỡnh thành bao lỏ mầm) và giai ủoạn hỡnh thành lỏ mầm lớn (vảy củ).
3.4.2. Tỏi sinh cõy từ phụi vụ tớnh
3.4.2.1. Ảnh hưởng của chất ủiều hoà sinh trưởng ủến tỏi sinh cõy từ phụi vụ tớnh vụ tớnh
Theo nhiều bỏo cỏo, cỏc auxin thường cú vai trũ tớch cực trong giai
ủoạn hỡnh thành callus nhưng ủể tạo phụi và kớch thớch phụi tiếp tục phỏt triển
thỡ cần giảm nồng ủộ auxin hoặc loại bỏ hoàn toàn auxin khỏi mụi trường
nuụi cấy [44]. Một số tỏc giả cho rằng ủõy là những chất cú tỏc dụng kớch
thớch sự phỏt triển của phụi, sự hỡnh của thành rễ và sự phỏt triển của lỏ mầm [36, 40, 61].
Ngoài ra trong số hơn 20 chất thuộc nhúm gibberellin, GA3 là chất
ủược sử dụng nhiều hơn cả trong thực tiễn ủể kớch thớch kộo dài chồi và nảy
mầm của phụi vụ tớnh [10]. GA3 cũng là chất ủiều hoà sinh trưởng ủược cỏc tỏc giả như Ollitrault P. và cs. (1996, 1998), Froelicher và cs. (2003) sử dụng trong nghiờn cứu cứu phụi, và kớch thớch nảy mầm của phụi ở cỏc giống cam quýt và họ ủó thu ủược rất nhiều cõy từ phương phỏp này. Vỡ vậy, chỳng tụi
sử dụng NAA và GA3 cho nghiờn cứu của mỡnh. Kết quả sau 15 ngày nuụi cấy ủược trỡnh bày ở bảng 3.12.
Sau 15 ngày nuụi cấy, chỳng tụi nhận thấy trờn mụi trường MT khụng bổ sung chất ủiều hoà sinh trưởng phụi chậm ra rễ, rễ ngắn, chồi kộm phỏt
triển với hai lỏ mầm nhỏ, với dạng phỏt triển như vậy cõy con sẽ khú sống khi
ủem ra trồng ngoài vườn ươm. Cũn trờn cỏc mụi trường cú bổ sung chất ðHST thỡ số phụi nảy mầm bắt ủầu nhanh hơn và với số lượng nhiều hơn. Và
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 81
nhau chờnh lệch khụng nhiều. ðối với cam Sành, tỷ lệ nảy mầm cao nhất trờn mụi trường cú bổ sung 1mg/l GA3 và 0,2 mg/l NAA cho số phụi hỡnh thành cao nhất là 50,8 %. Trong khi ủú, cam Valencia lại cho kết quả khỏc hơn, tỷ lệ nảy mầm cao nhất là 57,6% trờn mụi trường MT cú bổ sung 0,5mg/l GA3 và 0,1 mg/l NAA, cao hơn so với cam Sành.
Bảng 3.12. Ảnh hưởng của cỏc mụi trường khỏc nhau ủến sự nảy mầm của phụi vụ tớnh
α αα α-NAA (mg/l) GA3 (mg/l) 0 0,1 0,2 0,3 Giống 0 14,8a 22,4b 28,2c 18,7ab 0,5 26,4ab 38,2ab 44,1bc 32,8b 1,0 31,9c 43,0c 50,8b 41,6b 1,5 22,2cd 30,5d 47,6c 26,5c Cam Sành 2 15,9c 25,4a 20,9a 18,8bc 0 16,7e 33,1g 20,9ef 17,0h 0,5 43,2f 57,6ef 48,6e 35,8g 1,0 38,5ef 52,3e 45,9g 41,5e 1,5 31,4g 44,7f 40,0ef 29,1ef Cam Valencia 2 25,7g 30,5e 23,3f 19ef
Chứng tỏ, cỏc giống khỏc nhau cho tỷ lệ nảy mầm của phụi vụ tớnh cũng khỏc nhau và nhu cầu về CðHST cho nảy mầm của phụi cũng khỏc nhau. Khi tăng nồng ủộ của GA3 và NAA thỡ tỷ lệ nảy mầm của phụi cũng
tăng lờn, nhưng nếu tăng lờn quỏ cao thỡ tỷ lệ nảy mầm lại giảm xuống, vỡ cỏc CðHST lỳc này khụng những khụng cú tỏc dụng kớch thớch nay mầm của phụi mà cũn ức chế quỏ trỡnh nảy mầm của phụi. Do ủú, chỳng tụi sử dụng
mụi trường cú bổ sung 1mg/l GA3 và 0,2 mg/l NAA cho cam Sành và mụi trường cú bổ sung 0,5mg/l GA3 và 0,1 mg/l NAA cho cam Valencia cho cỏc thớ nghiệm nảy mầm của phụi vụ tớnh.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 82 0 20 40 60 80 0 0,5 1,0 1,5 2 0 0,5 1,0 1,5 2
Cam Sành Cam Valencia
NAA nồng ủộ 0 mg/l NAA nồng ủộ 0,1 mg/l NAA nồng ủộ 0,2 mg/l NAA nồng ủộ 0,3 mg/l T ỷ l ệ n ả y m ầ m c ủ a ph ụi ( % )
Hỡnh 3.19. Ảnh hưởng của mụi trường khỏc nhau ủến sự nảy mầm của phụi vụ tớnh
2 1 1
Hỡnh 3.20. Nảy mầm của phụi vụ tớnh trờn mụi trường cú bổ sung CðHST