Nhỡn chung cỏc auxin tổng hợp như 2,4-D, picloram và dicamba thường ủược sử dụng ủể tạo mụ sẹo phụi hoỏ ở nhiều loài thực vật bậc cao.
Tuy nhiờn, ở loài cú mỳi mụ sẹo phụi hoỏ cú thể ủược tạo ra khi sử dụng
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 31
như là casein hydrolysate, malt extract. Auxin dường như khụng cú vai trũ gỡ quan trọng trong tạo mụ sẹo phụi hoỏ ở cõy cú mỳi [41]. Kobayashi cho rằng auxin kớch thớch sự hỡnh thành mụ sẹo từ vỏ nhưng lại ức chế sự hỡnh thành
mụ sẹo phụi hoỏ từ mụ phụi tõm. đặc biệt malt extract (ME) rất tốt cho sự
phỏt sinh phụi khi nuụi cấy mụ phụi tõm (nucellar) [12, 38, 55, 56]. Nghiờn cứu của Button và Borman (1971) về tỏc ủộng của ME ủó thấy rằng ME cú
tỏc dụng kớch thớch sự phỏt triển của cấu trỳc giả bào tử (embryolike structures) từ tế bào ủơn mụ sẹo của giống cam ngọt ỔShamoutiỖ. Sự sinh
trưởng và phỏt triển của mụ sẹo tăng trong mụi trường cú 500mg/l ME nhưng cũng ở nồng ủộ này lại gõy ức chế cho sự phỏt triển và sinh trưởng của phụi và cõy [54]. Những thớ nghiệm sau này ủó chứng minh rằng ME thỳc ủẩy sự
phụi hoỏ của mụ phụi tõm cả ở noón trước và sau thụ phấn [55, 56, 12].
Mụ sẹo phụi hoỏ cú thể ủược tạo ra trờn mụi trường MT (Murashige và Tucker, 1969) cú bổ sung malt extract (ME) 500mg/l [38, 62], hoặc trờn mụi trường MT cú bổ sung cytokinin với hàm lượng cao [36]. Bỏo cỏo của Hidaka và Omura (1989) cho biết mụi trường MS (Murashige và Skoog, 1962) cú chứa 500mg/l ME và 50àM kinetin là hiệu quả nhất cho tạo mụ sẹo từ phụi non, tỏc giả cũng cho rằng bổ sung NAA và GA3 vào mụi trường nuụi cấy kết quả chỉ tạo ra những mụ sẹo cứng và những mụ sẹo này khụng tạo ủược phụi.
* Nhõn sinh khối nguồn mụ sẹo phụi hoỏ thụng qua hệ thống bioreactor nuụi cấy tự ủộng
Nhu cầu sản xuất nhanh nguồn mụ sẹo phụi hoỏ phục vụ cho cụng tỏc nghiờn cứu ứng dụng, ủũi hỏi cỏc nhà sinh lý thực vật phải cú những bước cải tiến mạnh mẽ về quy trỡnh vi nhõn giống in vitro ủể ủạt ủược bb hệ số nhõn cao nhất. Vỡ vậy, việc sử dụng những hệ thống nuụi cấy cú thể ủiều khiển cỏc thụng số mụi trường một cỏch dễ dàng như bioreactor là giải phỏp hợp lý cho vấn ủề này [53]. Bioreactor là bỡnh nuụi cấy mụ tế bào thực vật, cú dung tớch
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 32
từ vài lớt ủến vài nghỡn lớt ủể tạo ra sinh khối thực vật lớn trong một thời gian ngắn. đõy là những hệ thống nuụi cấy tự ủộng hoàn toàn, tiết kiệm chi phớ lao
ủộng và dễ dàng tăng quy mụ nhõn giống [10].
Tuy nhiờn, vấn ủề quan trọng nhất hiện nay là việc thiết kế cỏc
bioreactor cho nuụi cấy mụ tế bào thực vật phải ủảm bảo thụng khớ và giảm tối ủa cỏc tổn thương cơ học (khuấy, thụng khớ) ủối với mụ tế bào ủú [42].
Trong lĩnh vực này, cỏc nhà nghiờn cứu Hàn Quốc là những chuyờn gia thiết kế bioreactor cho nuụi cấy thực vật. đặc biệt nhúm tỏc giả Paek, Chakrabarty
và Hahn thuộc đại học Quốc gia Chungbuk (Hàn Quốc) ủó cú nhiều bỏo cỏo nổi bật về nhõn giống thương mại Lilium trong bioreactor. Những bioreactor
ủược thiết kế theo kiểu bỡnh dạng búng ủốn nhằm loại bỏ hiện tượng tạo bọt,
phự hợp cho nuụi cấy liờn tục hoặc nuụi cấy tạm thời (khụng liờn tục). Núi chung, với những ưu ủiểm vượt trội, cụng nghệ nuụi cấy lớp mỏng tế bào kết hợp với bioreactor sẽ là cụng nghệ nhõn nhanh in vitro ủầy hứa hẹn ở nhiều
loài thực vật [10, 51].
Sự phỏt sinh phụi soma (sinh dưỡng) cũng ủược ỏp dụng trong việc
nhõn nhanh cõy trồng với số lượng lớn trong bioreactor tự ủộng. Vi nhõn
giống truyền thống ủũi hỏi một lực lượng lao ủộng lớn sẽ hạn chế khả năng ứng dụng và tớnh thương mại. Phụi soma dễ sử dụng do chỳng cú kớch thước
tương ủối nhỏ và ủồng ủều về kớch cỡ, chỳng khụng cần phải ủược cắt thành
những mảnh nhỏ và tỏch rời khi nuụi cấy trong mụi trường tăng sinh. Thờm vào ủú, phụi soma cú thể bảo quản trong thời gian dài ở nhiệt ủộ thấp hay sấy khụ, thuận tiện cho vận chuyển và sản xuất với số lượng lớn. Sự sản xuất phụi soma trong bioreactor ủú ủược cụng bố trờn nhiều loài. đối với việc nghiờn
cứu ứng kỹ thuật nuụi cấy trong bioreactor, vấn ủề cần thiết hướng ủến là cải thiện cỏc ủiều kiện về mụi trường húa lý - như gia tăng sự trao ủổi khụng khớ,
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 33
tăng cường ủộ ỏnh sỏng và hàm lượng khớ CO2 - ủể kỹ thuật này ủược ỏp
dụng tốt hơn trong thực tế [34].