* Tạo cõy giống bố mẹ dị tứ bội sử dụng cho lai 4x:2x. Từ những nghiờn cứu
về cõy chanh 'Persian' tam bội chứng tỏ cõy citrus tam bội cú thể là cõy khoẻ mạnh, sai quả và gần như khụng hạt. Tạo thế hệ con cỏi tam bội ở citrus nhỡn chung thụng qua lai cõy tứ bội với cõy nhị bội, ở ủõy cõy tứ bội ủược dựng
như cõy mẹ [57]. Gần ủõy Lee (1988) ủó ủưa ra tổng quan xuất sắc về ủa bội thể ở citrus. Hơn nữa gần ủõy từ lai giữa cõy citrus bố mẹ tứ bội và nhị bội ủó tạo ra ủược hai giống cõy tam bội khụng hạt. 'Oroblanco' và 'Melogold' ủược Soost và Cameron (1980; 1985) tạo ra từ lai giống bưởi ngọt với giống bưởi chựm tứ bội thuần. Thể tứ bội thuần cú thể xuất hiện tự phỏt trong quần thể
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 38
cõy từ hạt hoặc từ những cõy cú nguồn goúc nuụi cấy mụ của rất nhiều cỏc giống ủa phụi nhị bội. Oiyama và Okudai (1986) ủó mụ tả phương phỏp tạo ra cõy tứ bội thuần từ những giống nhị bội ủơn phụi 'Clementine', 'Hassuku' và
'Hyuganatsu' bằng sử dụng colchicine kết hợp với kỹ thuật vi ghộp. Tuy nhiờn chỉ cú rất ớt cõy giống tứ bội bố mẹ thớch hợp là cú sẵn.
* Tạo cõy tam bội trực tiếp qua con ủường dung hợp tế bào trần n + 2n
Tạo cõy lai tam bội khỏc loài ở Nicotiana và cõy lai trong loài ở
Petunia qua dung hợp tế bào trần giao tử và soma ủó gợi cho cải thiện giống
mắt ghộp citrus một hướng ủi. Những cõy tam bội này ủược tạo ra từ dung
hợp tế bào trần soma nhị bội với tế bào trần giao tử ủơn bội ủược tỏch từ giảm phõn bộ bốn ở chồi hoa. Ứng dụng kỹ thuật này ở citrus cú thể dẫn ủến việc trực tiếp tạo giống khụng hạt mới. Nhiều những giống ăn quả tươi phổ biến,
ủặc biệt tangelos và mandarin, rất nhiều hạt, sự phỏt triển của những giống
khụng hạt loại này với chất lượng quả tương tự cú thể khuấy ủộng sự tăng
trưởng của thị trường quả tươi. Những cõy lai như vậy cú thể ủược ra bằng dung hợp tế bào trần nhị bội tỏch từ phụi hoỏ của những giống thành cụng với tế bào trần giao tử tỏch từ chồi bộ bốn của cỏc kiểu gen ủược lựa chọn cú cỏc tớnh trạng bổ sung. Vớ dụ dung hợp tế bào trần phụi hoỏ của 'Dancy' tangerin (một giống quýt phổ biến nhiều hạt, dễ búc vỏ) với tế bào trần giao tử của giống bưởi chựm hoặc bưởi dẫn ủến phỏt triển cõy tangelos tam bội khụng
hạt. Trỏi với dung hợp soma: soma giữa hai bố mẹ cựng loài, tất cả những cõy tỏi sinh từ dung hợp n + 2n sẽ chỉ là duy nhất vỡ mỗi một tế bào trần ủơn bội là một sản phẩm của phõn ly. Nếu thành cụng phương phỏp này sẽ cú một số
ưu ủiểm hơn cỏc phương phỏp tạo cõy tam bội từ lai nhị bội và tứ bội trước.
Một trong những ưu ủiểm rừ ràng là giảm ủược thời gian tạo cõy tam bội. Ưu
ủiểm thứ hai sử dụng bộ gen nhị bội nguyờn vẹn, khụng trải qua phõn ly và tỏi
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 39
tam bội. Những tớnh trạng quan trọng ủiều khiển bởi gene trội hoặc ủồng trội
ở bố mẹ nhị bội hoặc cỏc gen lặn ở cả hai bố mẹ sẽ ủược biểu hiện ở cõy tam
bội tỏi sinh từ dung hợp n + 2n. Kết quả sẽ là thế hệ con cỏi mang tỷ lệ tớnh trạng mong muốn cũng như khụng mong muốn cao hơn so với thế hệ con cỏi của lai hữu tớnh giữa nhị bội và tứ bội. Số lượng sự kết hợp này bị hạn chế bởi cỏc dũng callus phụi hoỏ sẵn cú và cõy của cỏc giống mà cung cấp bộ bốn của cỏc chồi cú kớch thước phong phỳ chịu ủược khử nhiễm.
* Chuyển một phần bộ gen
Chuyển một phần bộ gen cú thể xuất hiện tự phỏt hoặc sau khi chiếu tia thể cho. Những cõy lai soma khỏc loài tam bội nhận ủược từ dung hợp tế bào trần phụi hoỏ của C. sinensis 'Hamlin' (cam ngọt) với tế bào trần cú nguồn gốc từ callus từ hạt khụng phụi hoỏ của Severinia buxifolia (cam hoàng dương
Chinese). Dũng callus của S. buxifolia ủược bắt ủầu và nuụi giữ trờn mụi
trường cú hàm lượng 2,4-D tương ủối cao (0.55mg/l). Tất cả cỏc cõy ủược tỏi sinh từ sự dung hợp với cõy bố mẹ này là cõy tam bội [30]. Cả hai dũng bố mẹ ủược cho là nhị bội tại thời ủiểm dung hợp. Cú thể giải thớch sự tồn tại của tế bào ủơn bội trong một dũng tế bào của bố hoặc mẹ, hoặc NST bị loại bỏ
sau khi dung hợp. Những phõn tớch isozym xa hơn cú thể xỏc ủịnh ủược ủặc tớnh của những gene bị mất này. ðiều này gợi ý cú thể dựng 2,4-D ủể callus phỏt triển như là bố mẹ khụng toàn năng trong dung hợp ủể ủạt ủược chuyển 1 phần của bộ gen.
* Chuyển cơ quan tử
Lai tế bào chất ủó ủược sử dụng ủể chuyển thụng tin di truyền ủược mó hoỏ bởi cơ quan tử [62].Yếu tố hạn chế của phương phỏp này là khụng biết những tớnh trạng làm vườn quan trọng nào ủược mó hoỏ trong bộ gen cơ quan tử của citrus và loài họ hàng.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 40