Mẫu lỏt cắt vụ trựng từ bầu nhụy và vũi nhụy, quả non, sử dụng làm vật liệu khởi ủầu nghiờn cứu ủược nuụi trong mụi trường tạo callus. Với nuụi cấy noón thỡ từ bầu nhuỵ cỏi và quả non ủó ủược khử trựng, tỏch lấy noón ủể nuụi cấy trờn cỏc mụi trường khỏc nhau (noón sau thụ phấn phỏt triển dần thành hạt non). Ở quả non cú ủộ tuổi 6, 7, 8 tuần chỳng tụi tiến hành tỏch bỏ vỏ lụa ở
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 44
bờn ngoài hạt non, loại bỏ phụi non rồi mới cấy. Tất cả cỏc thao tỏc ủược thực hiện dưới kớnh hiển vi soi nổi.
Mụi trường nuụi cấy cơ bản sử dụng cho thớ nghiệm là mụi trường MT (Murashige and Tucker, 1969). Mụi trường này ủược bổ sung thờm chất phụ
gia là 500mg/l malt extract, 50g/l sucrose và 6g/l thạch. đõy là mụi trường ủó
ủược nhiều tỏc giả chứng minh là rất thớch hợp với tạo mụ sẹo phụi hoỏ ở cõy ăn quả cú mỳi [41]
Mụi trường cơ bản trờn ủược bổ sung cỏc CđHST khỏc nhau ủể nghiờn cứu ảnh hưởng của chỳng ủối với tạo mụ sẹo phụi hoỏ. đối với cỏc auxin,
chỳng tụi tiến hành nghiờn cứu ảnh hưởng của 2,4-D lờn tạo mụ sẹo phụi hoỏ,
ủối với nhúm cytokinin chỳng tụi khảo sỏt ảnh hưởng của hai chất: BAP,
Kinetin 2,4 D 0 1 2 0 + + + 0,5 + + + 1 + + + 2 + + + BAP 3 + + + 0 + + + 0,5 + + + 1 + + + 2 + + + Kinetin 3 + + +
Mụi trường ủược chuẩn ủộ pH = 5,8 và sau khi khử trựng ở 121oC 20 phỳt. Mẫu ủược nuụi cấy trong ủiều kiện nhiệt ủộ là 27 ổ 1oC ủể tạo mụ sẹo. Mụ sẹo hỡnh thành ủược cấy chuyển sang mụi trường mới (cú thành phần như mụi trường tạo mụ sẹo) và chu kỡ cấy chuyển là 1 thỏng/lần. Sau khoảng 3-5 lần cấy chuyển những mụ sẹo phụi hoỏ này sẽ ủược nuụi trờn mụi trường MT cơ bản trong ủiều kiện tối như trờn mà khụng cần bổ sung cỏc CđHST cho
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 45