- Xỏc ủịnh sự tăng sinh khối callus trong mụi trường lỏng lắc bằng cỏch cõn trọng lượng callus trước và sau khi nuụi cấy, từ ủú tớnh hệ số tăng sinh
2. Callus Valencia cứng trờn mụi trường cú bổ sung 2mg/l 2,4D và 2mg/l Kinetin
3.4.1. Tạo phụi vụ tớnh từ tế bào trần nguồn gốc mụ sẹo phụi hoỏ của hai giống citrus
3.4.1. Tạo phụi vụ tớnh từ tế bào trần nguồn gốc mụ sẹo phụi hoỏ của hai giống citrus giống citrus
3.4.1.1. Ảnh hưởng của cỏc nguồn cacbon khỏc nhau ủến tạo phụi vụ tớnh
Ở cõy cú mỳi ủó tạo ủược phụi vụ tớnh từ mụ sẹo phụi hoỏ bằng một số
phương phỏp như giảm hàm lượng ủường sucrose trong mụi trường nuụi cấy hoặc thay ủổi nguồn hydratcarbon trong mụi trường nuụi cấy [38, 13]. Nhiều nghiờn cứu của cỏc tỏc giả khỏc nhau ủó cho thấy nhõn tố quan trọng nhất cho việc hỡnh thành phụi vụ tớnh từ mụ sẹo phụi hoỏ chớnh là cỏc nguồn cung cấp carbon (ủường) [41].
Trong thớ nghiệm này chỳng tụi ủó sử dụng cỏc nguồn ủường khỏc nhau
ủể so sỏnh sự hỡnh thành phụi ở hai giống cam Sành và cam Valencia. Nguồn
mụ sẹo ở trờn cấy chuyển vào cỏc mụi trường cú chứa cỏc nguồn ủường và
nồng ủộ khỏc nhau khụng bổ sung ME. Sau khi cấy khoảng 3 tuần, mẫu nuụi cấy bắt ủầu cú biểu hiện phỏt triển cỏc dạng hỡnh cấu trỳc của phụi, và số phụi hỡnh thành trờn mụi trường khỏc nhau của hai giống khỏc nhau cũng khỏc nhau rừ rệt. Kết quả ủược trỡnh bày ở bảng 3.10.
Kết quả bảng 3.10 cho thấy cỏc mụ sẹo phụi hoỏ thay vỡ tiếp tục sinh trưởng chỳng ủa bắt ủầu hỡnh thành phụi. Cỏc giống và cỏc mụi trưũng khỏc
nhau cho phản ứng tạo phụi vụ tớnh khỏc nhau. Giống cam Valencia cho kết
quả tạo phụi vụ tớnh tốt hơn cam Sành và số phụi hỡnh thành cao nhất trờn mụi trường lactose là 89 phụi với nồng ủộ lactose là 50mg/l, theo tỏc giả Marcio et al. (2001) cho thấy tạo phụi vụ tớnh trờn giống cam ngọt Valencia cũng cho kết quả tương tự. Sau một thỏng nuụi cấy cho thấy nguồn ủường sucrose và glucose khụng cú tỏc dụng kớch thớch cho việc tạo phụi vụ tớnh. Ở cam Sành số phụi hỡnh thành nhiều nhất (68 phụi/50mg mụ sẹo) trờn mụi trường cú
ủường galactose với nồng ủộ 30mg/l. Cỏc mụi trường cú bổ sung Sucrose,
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 74
Bảng 3.10. Số phụi vụ tớnh hỡnh thành trờn cỏc mụi trường tạo phụi khỏc nhau
Nguồn ủường Nồng ủộ (mg/l) Cam Sành Cam Valencia
15 8 6 30 3 8 50 2 7 Sucrose 80 1 4 15 3 5 30 4 7 50 2 5 Glucose 80 1 2 15 21 28 30 68 86 50 43 71 Galactose 80 19 53 15 25 19 30 31 51 50 26 89 Lactose 80 14 62 10 32 27 20 57 53 40 61 38 Glycerol 60 53 33
Cũn ba nguồn ủường galactose, lactose và glycerol ủều cho kết quả tạo phụi vụ tớnh rất tốt. Nghiờn cứu về tỏc ủộng của những ủường này ủối với tạo
phụi vụ tớnh cho thấy nú cú khả năng kỡm hóm tổng hợp auxin dẫn ủến thay
ủổi cõn bằng auxin nội sinh kớch thớch sự tạo phụi của mụ sẹo phụi hoỏ
(Cabasson et al., 1995). Cỏc nguồn ủường này cú vai trũ tỏc ủộng lờn quỏ
trỡnh sinh lý nhiều hơn là nguồn cung cấp năng lượng (Kochba et al., 1982). Như vậy sử dụng ủường galactose cho cam Sành với nồng ủộ 30mg/l và lactose 50mg/l là tốt nhất cho tạo phụi vụ tớnh.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…………… 75
1
Hình 3.14. Phơi hình thành trên các mơi tr−ờng có bổ sung các loại đ−ờng khác nhau