II. MỘT SỐ QUY TRèNH SẢN XUẤT VACXIN
2.2. Quy trỡnh sản xuất vacxin virus
2.2.1.Vacxin nhược độc chế trờn phụi trứng
Giống gốc
Ra chai dỏn nhón bảo quản 2 -100C/2 năm
Kiểm nghiệm vacxin
Gõy nhiễm phụi trứng
Ra chai Đụng khụ dỏn nhón bảo quản Pha với nước sinh lý nồng độ 10-1 hoặc xELD50)
Gõy giống sản xuất Kiểm tra vụ trựng Ấp tiếp ở 370C/x giờ Thu trứng, để lạnh 40C/12h Mổ trứng Thu chất chứa virus Bỏn thành phẩm Kiểm tra vụ trựng chuẩn độ hiệu giỏ
Nuôi cấy tế bào Gây nhiễm virus Trước khi giống virus thành thục Gặt tế bào
Thành thục giải phóng virus
Trước khi giống virus
giải phóng Thu gom các hợp phần KN virus Tách các hợp phần KN virus Trộn Bổ trợ dầu Tập trung kháng nguyên virus
2.2.2. Quy trỡnh sản xuất vacxin virus bằng cụng nghệ lựa chọn khỏng nguyờn
Đối với vacxin virus cũn cú cụng nghệ sản xuất lựa chọn khỏng nguyờn. Nguyờn lý của cụng nghệ này dựa theo nguyờn lý sản xuất vacxin PRRS như sau:
Để phũng bệnh đặc hiệu, cỏc nhà khoa học đó tiến hành sản xuất vacxin PRRS dựa trờn việc nghiờn cứu cụng nghệ lựa chọn khỏng nguyờn ™MJPRRS™ . Nguyờn lý sản xuất này đũi hỏi phải thu hoạch vacxin trước khi virus thành thục và giải phúng ra khỏi tế bào nuụi cấy. Việc làm này sẽ tối đa hoỏ được lượng khỏng nguyờn trong sản phẩm.
Hỡnh 2.1: Quy trỡnh sản xuất vacxin phũng PRRS theo cụng nghệ lựa chọn khỏng nguyờn ™MJPRRS™ .
Khi thu hoạch được tế bào chứa cỏc hạt virus, người ta tiến hành tỏch cỏc hợp phần khỏng nguyờn, thu gom lại và gia thờm bổ trợ để được vacxin thành phẩm. Cụng nghệ
™MJPRRS™ tương tự một quy trỡnh sản xuất vacxin dưới đơn vị. Việc triết tỏch cỏc hợp phần khỏng nguyờn từ tế bào nuụi cấy cú một vài bước đặc biệt so với quy trỡnh sản xuất vacxin thụng thường để gần như loại bỏ hết cỏc tế bào nuụi cấy trong sản phẩm cuối cựng và như vậy, cú một thành phẩm vacxin đạt độ tinh khiết khỏng nguyờn rất cao - đú là vacxin phũng PRRS trong tương lai.
2.2.3.Quy trỡnh chếvacxin nhược độc Dịch tả lợn qua thỏ
Quy trỡnh chế vacxin dịch tả lợn qua thỏ gồm cỏc bước:
– Chuẩn bị
– Tiếp giống và theo dừi – Mổ thỏ kiểm tra bệnh tớch – Chế vacxin
Chuẩn bị thỏ :
Thỏđược đưa vềtrước 10 ngày, nhốt riờng, chăm súc, nuụi dưỡng chu đỏo. Thỏ phải đạt được cỏc yờu cầu là: khỏe mạnh, khụng mắc bệnh truyền nhiễm, ký sinh trựng (đặc biệt bệnh cầu trựng); khối lượng thỏ > 1,8 kg.
Ba ngày trước khi tiếp giống tiến hành đo thõn nhiệt thỏ, ngày 2 lần (sỏng và chiều) vào những giờ nhất định, yờu cầu nhiệt độ trung bỡnh cỏc ngày khụng vượt quỏ 39,5°C.
Sốlượng thỏ chuẩn bịcăn cứvào lượng vacxin cần phải chếtrong 1 đợt. Với thỏ nặng 1,8 - 2 kg cho 18 - 20g hạch, lỏch. Khi pha vacxin nghiền hạch, lỏch theo tỷ lệ 1/200.
Sốlượng thỏ chuẩn bị cần phải dư vỡ trong quỏ trỡnh nuụi và theo dừi cú những thỏ khụng đạt tiờu chuẩn
Dụng cụ:
– Bơm tiờm, kim tiờm để tiếp giống
– Dao, kộo, bụng cồn, vải gạc, cốc đong, cối chày sứ
– Tựy theo tớnh chất từng loại dụng cụ, tiến hành tiờu độc bằng cỏch sấy khụ hoặc hấp ướt.
Giống virus vacxin
– Cú thể là giống đụng khụ hoặc hạch, lỏch tươi Phũng chế
– Đảm bảo vệsinh, điều kiện vụ trựng
Bước 2: Tiếp giống và theo dừi
Tiếp giống
– Nếu là giống đụng khụ, hũa với nước sinh lý theo hướng dẫn
– Nếu là hạch, lỏch nguyờn thỡ cắt bỏ bạc nhạc, màng mỡ bờn ngoài, cõn lờn và nghiền với nước sinh lý theo tỷ lệ 1/20, lọc, xử lý khỏng sinh
– Tiờm 1ml vào tĩnh mạch dỡa tai thỏ Theo dừi thỏ
– Thỏ được tiếp giống dịch tả lợn sau khi tiờm cứ 6 giờ theo dừi nhiệt độ 1 lần (khụng kểngày đờm)
– Sau 1 - 2 ngày thỏ bắt đầu sốt, sốt cao hơn bỡnh thường 1 - 2°C – Mổ thỏđể lấy hạch màng treo ruột và lỏ lỏch để chế vacxin
– Khụng lấy hạch và lỏch của những thỏ sốt lờn xuống thất thường và thỏ sốt dưới 0,5°C.
Bước 3 : Mổ thỏ kiểm tra bệnh tớch
Nếu thỏ phản ứng nhiệt độ đỳng tiờu chuẩn, thường giết thỏ trong khoảng 59 - 62 giờ tớnh từ khi tiếp giống.
Kiểm tra bệnh tớch: Thỏ tiếp giống dịch tả lợn hầu như khụng cú bệnh tớch, nếu cú chỉ là sưng hạch lõm ba và lỏ lỏch.
Bước 4: Chế vacxin
Toàn bộ hạch và lỏch của thỏ đạt tiờu chuẩn được tập trung để chế thành 1 lụ vacxin, được xử lý:
- Nghiền với nước sinh lý theo tỷ lệ 1/200
- Lọc, xử lý khỏng sinh, để khỏng sinh tỏc động 1 giờ, tiến hành ra chai, dỏn nhón, đúng nỳt
- Kiểm tra vụ trựng - Đụng khụ vacxin - Bảo quản và sử dụng
Cõu hỏi ụn tập chương
1. Trỡnh bày những yờu cầu chung về nhõn sựvà cơ sở vật chất trong sản xuất vacxin. 2. Kế hoạch và tài liệu cho quy trỡnh sản xuất vacxin.
3. Quỏ trỡnh nhõn và giữ giống vi sinh vật cho sản xuất vacxin, cho vớ dụ?
4. Nhõn giống, sản xuất, chuẩn bị nguyờn vật liệu và mụi trường dựng trong sản xuất vacxin.
5. Cụng tỏc vệ sinh khu vực sản xuất.
6. Trỡnh bày một số quy trỡnh sản xuất vacxin vi khuẩn (vacxin phú thương hàn lợn vụ hoạt, vacxin nhiệt thỏn, vacxin tụ dấu).
7. Trỡnh bày một số quy trỡnh sản xuất vacxin virus (vacxin virus nhược độc trờn phụi trứng, qui trỡnh sản xuất vacxin bằng cụng nghệ lựa chọn khỏng nguyờn).
Chương 3
KIỂM NGHIỆM VACXIN
Mục tiờu:
Nắm được nội dung của quỏ trỡnh kiểm nghiệm vacxin. Kiến thức cơ bản:
+ Tiờu chuẩn của một phũng kiểm nghiệm vacxin động vật.
+ Cỏc chỉ tiờu vacxin cần kiểm nghiệm và phương phỏp kiểm nghiệm vacxin. + Quy trỡnh kiểm nghiệm của một số loại vacxin.
Trước khi phân phối, thànhphẩm vacxin cần phải được kiểm nghiệm.
Kiểm nghiệm là thực hiện các phương pháp kiểm tra tổng thể chất lượng của loại vacxin vừa hoàn thành theo quy trình sản xuất, đảm bảo lô vacxin xuất xưởng phải có độ tinh khiết, an toàn và có hiệu lực.
Các bước kiểm nghiệm phải được tiến hành tại cơ sở sản xuất (kiểm nghiệm theo tiêu chuẩn cơ sở) và kiểm nghiệm tại cơ quan pháp chế Quốc gia,ở Việt Nam là Trung tâm kiểm nghiệm thuốc và vacxin thú y - Cục Thú y.
Sau khi có đầy đủ hồ sơ pháp chế, vacxin mới được xuất xưởng, lưu hành.