( Viện các chế phẩm sinh học Trường xuân, Trung Quốc)
Kháng huyết thanh dại được sản xuất từ huyết thanh của ngựa đã được gây tối miễn dịch bằng virus dại cố định.
Kháng huyết dại là globulin miễn dịch dạng dung dịch hoặc dạng đông khô.
Sơ đồ tóm tắt sản xuất kháng huyết thanh dại gồm các bước sau: Bước 1:Gây miễn dịch cho ngựa
- Gây miễn dịch cơ sở: dùng kháng nguyên là virus dại vô hoạt
- Gây tăng miễn dịch: dùng vacxin nhắc lại.
Bước 2:Lấy máu đểthu huyết tương
Khi huyết thanh ngựa có nồng độ kháng thể dại đạt 100UI/ml, lấy máu (cho chất chống đông và kháng sinh) rồi loại bỏ hồng cầu để thu huyết tương.
Bước 3:Tiêu hoá huyết tương
Pha loãng huyết tương 2 - 3 lần. Để ở nhiệt độ 300C, điều chỉnh pH, thêm pepsin.
Bước 4:Quá trình tinh chế
+ Làm biến tính bằng nhiệt để loại bỏ Fibrin, Albumin, mảnh Fc
- Đun nóng 57 - 590C, thêm Amoniumsulfat (NH4)2SO415%
- Lọc loại bỏ chất tủa, giữ lại phần nước nổi + Tạo tủa
- Cho thêm Amoniumsulfat (NH4)2SO4 20%để gây tủa
- Giữ lại tủa, loại bỏ phần nước nổi
Bước 5: Cô đặc, gạn lọc, vô trùng F(ab)2
+ Thêm nhôm 5% để hấp phụ chất gây sốt và protein tạp.
+ Cô đặc F(ab)2bằng phương pháp siêu lọc + Cho thêm chất dinh dưỡng vào rồi lọc vô trùng
Bước 6:Kiểm định sản phẩm + Hoá lý + Vô khuẩn + An toàn + Công hiệu + Hàm lượng F(ab)2
Bảng 7.2: Tiêu chuẩn kỹ thuậtcủa kháng huyết thanh dại
Thử nghiệm Tiêu chuẩn kỹ thuật
Trạng thái khi lắc Nhận dạng Hàm lượng Protein pH Muối (NH4)2SO4 Chloroform Albumin F(ab)2 Vô khuẩn An toàn Trong, màu trắng Đạt < 170 g/ l 6 - 7 7,5 - 9,5 g/ l < 0,1 g/l < 0,5 % (ml/ml) Không có > 60% Đạt Đạt
Nguyên liệu tương tự nhóm máu A Công hiệu Kết luận < 4àg/ml >200 UI/ml Đạt 4.2. Quy trỡnh chế tạo IgG thỏđặc hiệu
Thỏ là động vật hay được sử dụng để sản xuất kháng thể dịch thể đặc hiệu dùng trong chẩn đoán bệnh truyền nhiễm. Ví dụ:Bệnh dại, bệnh dịch tả lợn, bệnh tụ huyết trùng
Qui trình sản xuất IgG thỏ đặc hiệu gồm các bước sau: Bước 1:Gây miễn dịch cho thỏ
- Gây miễn dịch cơ sở: dùng kháng nguyên là virus hoặc vi khuẩn vô hoạt.
- Gây tối miễn dịch: dùng vacxin nhắc lại và kiểm tra hàm lượng kháng thể
Bước 2:Thu hoạch huyết thanh
- Khi huyết thanh thỏ có nồng độ kháng thể cao. Ví dụ:Trong sản xuất kháng huyết thanh tụ huyết trùng, kiểm tra máu thấy hiệu giá phản ứng IHA đạt >1/160, tiến hành lấy máu thỏ vô trùng bằng cáchbộc lộ động mạch cổ lấy máu để 370C/1 giờ, sau đó cho vào tủ lạnh để
40C qua đêm, chắt lấy huyết thanh.
Bước 3:Chiết tách IgG: Phương pháp Caprylic axit - Amonium sulphat (NH4)2S04
- Cho 1 thể tích huyết thanh + 4 thể tích dung dịch đệm (60mM Axetat buffer pH=4)
- Nhỏ từng giọt Caprylic axit vào, tỷ lệ 25àl/1ml huyết thanh pha loãng, để ở nhiệt độ phòng 30 phút; ly tâm 10.000 vòng/phút / 30 phút, ở nhiệt độ 40C.
Loại bỏ cặn (Albumin). Thu lại dịch nổi. Thêm vào dịch nổi Amonium sulphat cho đến khi bão hoà. Khuấy đều, để yên ở nhiệt độ phòng 30 phút. Ly tâm 10.000 vòng/phút / 30 phút ở nhiệt độ 40C. Thu lấy cặn (IgG kết tủa). Thêm vào IgG đã kết tủa1 lượngnhỏ dung dịch đệm PBS.
Bước 4:Kiểm tra độ tinh khiết, hiệu giá, tính đặc hiệu
- Kiểm tra độ tinh khiết của IgG bằng phương pháp điện di.
- Kiểm tra hiệu giá, tính đặc hiệu bằng phương pháp huyết thanh học