VI. PHÂN LOẠI VACXIN
6.6. Vacxin trỏnh thai
Nguyờn lý cơ b ản của vacxin trỏnh thai là tạo cho cơ thể đỏp ứng miễn dịch khỏng lại cỏc yếu tố thụ và hỡnh thành thai.
Vacxin trỏnh thai khỏc với vacxin chống nhiễm khuẩn ởhai điểm: Một là khảnăng bảo vệ của vacxin trỏnh thai cú tớnh tạm thời, trong khi đú khả năng bảo vệ của vacxin chống nhiễm khuẩn cú tớnh lõu dài. Hai là đối tượng tỏc động của vacxin trỏnh thai là cỏc phõn tử tham gia sinh sản trong khi đối tượng tỏc động của vacxin chống nhiễm khuẩn là cỏc vi sinh vật gõy bệnh.
Tỏc dụng của vacxin trỏnh thai là:
- Trỏnh được di chứng về kinh nguyệt hoặc chuyển hoỏ (thuốc trỏnh thai);
- Thời gian trỏnh thai được xỏc định từđầu, khi bắt đầu tiờm vacxin (12 thỏng hoặc 18 thỏng hoặc lõu hơn);
- Khụng cản trở hoạt động đỏp ứng tỡnh dục.
Một số loại vacxin trỏnh thai đang được nghiờn cứu với hiệu quả bước đầu được nghi nhận:
. Vacxin khỏng tinh trựng
í tư ởng sản xuất vacxin khỏng tinh trựng được bắt đầu từ việc tỡm thấy khỏng thể khỏng tinh trựng tồn tại ở một số phụ nữ vụ sinh.
Thành phần chớnh của vacxin khỏng tinh trựng cú tỏc dụng tạo ra đỏp ứng miễn dịch là khỏng nguyờn tinh trựng. Khỏng nguyờn này cú ở bề mặt tinh trựng, là một glycopeptid. Ngoài ra một vài enzym do tinh trựng sản sinh ra cũ ng cú tớnh khỏng nguyờn như enzym hyaluronidase, enzym LDH - C4 của acrosom.
Ngày nay người ta cú thể tạo ra khỏng nguyờn tỏi tổ hợp LDH - C4 cú nhiều hứa hẹn cho việc sản xuất vacxin khỏng tinh trựng. Một số nghiờn cứu trờn khỉ của Goldberg về vacxin tỏi tổ hợp LDH - C4 cho hay vacxin đó làm giảm 75% mức độsinh đẻ của khỉ.
. Vacxin khỏng trứng
Trứng là một trong những mục tiờu tỏc động của vacxin trỏnh thai.
Trờn bề mặt của trứng tại vị trớ tiếp nhận tinh trựng cú chứa nhiều khỏng nguyờn zona pellucida (ZP), với bản chất hoỏ học là mucopolysaccarid. Sự phỏt hiện thấy trong huyết thanh của phụ nữ vụ sinh chất khỏng thể khỏng lại ZP là gợi ý đầu tiờn để tiếp cận nghiờn cứu về vacxin ZP. Vai trũ của ZP là gắn tinh trựng vào trứng, vacxin chứa khỏng nguyờn ZP kớch thớch cơ thể sinh khỏng thể. Khỏng thể này chiếm lĩnh vị trớ ZP trờn trứng làm cho tinh trựng khụng thể vào trứng, do đú khụng thể thụ thai.
Người ta đó phõn biệt được 3 ZP khỏc nhau là ZP1, ZP2, ZP3 trong đú ZP2 và ZP3 được chỳ ý nhiều nhất do cú tớnh khỏng nguyờn mạnh.
. Vacxin khỏng HCG
HCG (Human chorionic gonadotropin) là chất nội tiết được sinh ra từ rất sớm bởi tế bào của lỏ nuụi phụi, tiền thõn của nhau thai. HCG cú vai trũ đ ặc biệt cần thiết nuụi dưỡng phụi thai ở tuần thai đầu tiờn.
HCG cú cấu trỳc gồm hai phõn tửα và β liờn kết khụng đồng hoỏ trị với nhau. Người ta đó xỏc định sốlượng α HCG và β HCG. β HCG cú tớnh khỏng nguyờn mạnh nờn kớch thớch cơ thể sinh nhiều khỏng thể và epitop sinh khỏng thể trờn β HCG
β HCG tận cựng carboxyl (β HCG - COOH) đó được tổng hợp trong phũng thớ nghiệm để làm vacxin dự tuyển. Đểtăng cường độđỏp ứng tạo khỏng thể, β HCG - COOH được gắn với một protein tải cú trọng lượng phõn tử lớn là giải độc tố của vi khuẩn bạch hầu. Vacxin liờn kết này kớch thớch cơ thể sinh khỏng thể HCG, làm cho HCG khụng cũn để nuụi phụi thai mới được hỡnh thành.
Vacxin HCG được thử nghiệm lõm sàng, bước đầu đó cho nhiều kết quả khả quan. Sau khi tiờm vacxin 2 - 4 tuần lượng khỏng thể đạt được mức cần thiết để trỏnh thai là lớn hơn hoặc bằng 50ng/ml, thời gian trỏnh thai là 18 thỏng, cú trường hợp lờn tới 30 thỏng.
Hỡnh 1.2. Sơ đồ túm tắt phõn loại vacxin
Cõu hỏi ụn tập chương
1. Trỡnh bày khỏi niệm về vacxin, đặc tớnh cơ bản của một vacxin 2. Yờu cầu của khỏng nguyờn trong vacxin
3. Khỏi niệm về chất bổ trợ, cơ chế tỏc dụng và phõn loại 4. Hiểu biết của anh (chị) về proteosom, liposom và coclet 5. Hiểu biết về cỏc loại vacxin chết và vacxin sống
6. Thế nào là vacxin thế hệ mới (khỏi niệm, nguyờn lý và phõn loại). 7. Hiểu biết về vacxin khụng phũng bệnh.
Vacxin sống Vacxin Vacxin vụ hoạt
Vacxin nhược độc húa Vacxin sống nguyờn độc Vacxin sống vụ độc Xúa gen độc Thớch ứng nhiệt độ thấp Nhậy cảm nhiệt độ
Qua vật chủ trung gian khụng cảm thụ Tỏi tổ hợp gen vacxin
ADN
Vacxin vector
di truyền Vacxin ADN
Vacxin dưới đơnvị Vacxin nguyờn vẹn
Vacxin ăn được Chứa protein KN tổng hợp bằng kỹ thuật gen Tinh chế bằng kỹ thuật gen Tinh chế bằng nguồn VSV chủ trong tự nhiờn (giải độc tố)
Chương 2
SẢN XUẤT VACXIN THÚ Y
Mục tiờu: Nắm được nguyờn lý chung của quỏ trỡnh sản xuất vacxin và một số quy trỡnh sản xuất vacxin.
Kiến thức trọng tõm:
+ Nhõn sựtrong cơ sở sản xuất vacxin
+ Yờu cầu vềcơ sở vật chất trong sản xuất vacxin + Vấn đề sản xuất vacxin
+ Nắm được một số qui trỡnh sản xuất vacxin.
I. NGUYấN Lí SẢN XUẤT VACXIN THÚ Y
Để đảm bảo sức khỏe tốt cho vật nuụi và thực hiện thành cụng chương trỡnh sức khỏe động vật, cần một nguồn vacxin tinh khiết, an toàn, hiệu lực và cú hiệu quả.
Tất cả cỏc vacxin thỳ y phải được sản xuất trong điều kiện kiểm tra, giỏm sỏt cẩn thận. Những yờu cầu và nguyờn lý mụ tảởđõy phự hợp với những tiờu chuẩn đó phỏt hành đ ể tạo ra một vacxin cú chất lượng cao mà chất lượng vacxin thỳ y lại dựa vào những nguyờn liệu ban đầu của quỏ trỡnh sản xuất, nhà xưởng, thiết bịvà cỏ nhõn con người cú liờn quan.
1.1. Nhõn sự
Tất cả cỏc cỏ nhõn làm việc trong cơ sở sản xuất vacxin phải được đào tạo và nắm được những kiến thức cơ bản của quỏ trỡnh sản xuất, sau đú phải tiếp tục được dự học những khúa học nõng cao phự hợp với những yờu cầu kỹ thuật mới (vớ dụ GMP).
Cơ cấu tổ chức của một cơ sở sản xuất vacxin gồm cú:
Ban giỏm đốc: Cơ sở sản xuất vacxin được lónh đạo bởi ban giỏm đốc cơ sở. Mỗi người lónh đạo cú trỏch nhiệm giỏm sỏt một khõu sản xuất hoặc một chế phẩm phải được đào tạo và cú kinh nghiệm để thực hiện những chức năng được giao.
Ban giỏm đốc gồm cú:
+ Giỏm đốc sản xuất: Phải được đào tạo đầy đủ và cú khảnăng thực tiễn tốt về lĩnh vực sản xuất, phải cú đầy đủ quyền hạn và trỏch nhiệm quản lý sản xuất ra cỏc chế phẩm, kiểm tra những nguyờn liệu ban đầu và chế phẩm cuối cựng.
+ Giỏm đốc kiểm tra chất lượng: Cú đầy đủ quyền hạn và trỏch nhiệm về mọi nhiệm vụ kiểm tra chất lượng.
+ Cỏc giỏm sỏt viờn: Giỏm sỏt viờn giỳp giỏm đốc sản xuất và giỏm đốc kiểm tra chất lượng thực hiện giỏm sỏt trực tiếp quỏ trỡnh sản xuất, những người này phải qua đào tạo, cú kinh nghiệm và luụn theo học cỏc khúa nõng cao vềGMP định kỳ.
Cỏc kỹ thuật viờn: Phải đọc và hiểu được quy trỡnh kỹ thuật và phải được đào tạo đầy đủ về:
- Quy trỡnh sản xuất giống gốc (master seed), giống sản xuất (working seed). - Thực hiện những nguyờn lý sản xuất.
+ Số lượng nhõn viờn: Phải đầy đủ để thực hiện quy trỡnh sản xuất, tạo ra được sản phẩm vacxin cú chất lượng.
Tất cả mọi người trong cơ sở sản xuất vacxin phải khỏe mạnh, cú ý thức giữ gỡn vệ sinh mụi trường và vệ sinh cỏ nhõn cao.
phẩm khụng bị ụ nhiễm.
1.2. Cơ sở vật chất
Cỏc cơ sở sản xuất sử dụng để sản xuất vacxin phải được thiết kế đểđảm bảo độ tinh khiết của sản phẩm trong suốt quỏ trỡnh sản xuất và sự an toàn cho sức khỏe con người.
Cấu trỳc cần đạt:
- Cú thể dễ dàng rửa sạch.
- Cú đầy đủ cỏc phũng chuẩn bị riờng biệt. - Đảm bảo thụng giú tốt.
- Cú đầy đủnước núng và lạnh sạch.
- Cú phũng thay quần ỏo và cỏc điều kiện tiện nghi khỏc đểngười làm việc cú thể khụng cần đi qua khu vực khụng cần thiết cho hoạt động sản xuất của mỡnh. Cơ sở vật chất phải đảm bảo đầy đủ cho quỏ trỡnh sản xuất:
- Khu vực bảo quản giống.
- Khu vực chuẩn bị dụng cụ và trang thiết bị. - Khu vực chuẩn bị chất bổ trợ.
- Khu vực hỡnh thành sản phẩm, ra chai, đụng khụ, làm nỳt, dỏn nhón, bảo quản sản phẩm cuối cựng.
- Khu vực kiểm nghiệm...
Mỗi hoạt động yờu cầu những diện tớch riờng biệt. Tất cả cỏc phũng và hệ thống thụng khớ phải được thiết kếđể trỏnh tạp nhiễm từ cỏc sản phẩm khỏc, từcon người và trang thiết bị.
Cỏc vi sinh vật cú độc lực hoặc nguy hiểm phải được chuẩn bị và bảo quản ở cỏc phũng tỏch biệt; những vi sinh vật dựng cụng cường độc cần phải bảo quản hoàn toàn biệt lập với cỏc chủng vacxin.
Tất cả cỏc trang thiết bị tiếp xỳc với sản phẩm phải được tiệt trựng theo cỏc quy trỡnh quy chuẩn.
Cơ sở vật chất phải được thiết kế hạn chế tới mức tối đa sự ụ nhiễm mụi trường.
Tất cả cỏc chất sử dụng trong quỏ trỡnh sản xuất phải được làm cho an toàn trước khi ra ngoài cơ sở sản xuất.
Nếu cấy chuyển cỏc vi sinh vật cú lõy nhiễm cao, khụng khớ ụ nhiễm cần phải xửlý để trỏnh làm lõy lan mầm bệnh. Con người phải đặc biệt tuõn theo quy trỡnh an toàn như t ắm, gội, trỏnh tiếp xỳc với động vật mẫn cảm sau khi ra khỏi cơ sở sản xuất.
Chỳ ý rằng chất liệu và thiết kếcơ sở sản xuất cú thểthay đổi nhưng phải tuõn thủ, đảm bảo mức tiờu chuẩn của loại vacxin được sản xuất.
Vớ dụ: Yờu cầu cơ sở vật chất để sản xuất vacxin qua phụi gà dựng cho uống, nhỏ mũi khụng giống như sản xuất vacxin bằng nuụi cấy tếbào dựng để tiờm.
1.3. Sản xuất vacxin
Những yếu tốđầu tiờn cho việc sản xuất vacxin đạt hiệu quả là: - Cú những quy trỡnh thao tỏc chung viết bằng văn bản.
- Cú hướng dẫn về sản xuất rừ ràng cho từng loại vacxin được sản xuất. - Sự tụn trọng triệt đểcỏc hướng dẫn trờn trong quỏ trỡnh sản xuất.
Cỏc bước sản xuất vacxin bao gồm:
1.3.1. Lập kế hoạch
Mỗi loại vacxin được sản xuất trong một cơ sở phải cú kế hoạch sản xuất chi tiết mụ tả cỏc bước của quy trỡnh, số lượng sản phẩm cần sản xuất, thời gian tiến hành... Núi chung kế hoạch được lập là tài liệu trong quy trỡnh sản xuất chuẩn được chi tiết húa.
1.3.2. Tài liệu của quy trỡnh sản xuất
Cần cú quy trỡnh kỹ thuật chi tiết là tài liệu sản xuất cho mỗi loại vacxin. Tài liệu phải nờu rừ nguyờn lý sản xuất, cỏc cụng đoạn sản xuất và phương phỏp kiểm tra sản phẩm sau mỗi cụng đoạn.
Tài liệu nờn nờu rừ quỏ trỡnh giữ và sản xuất giống gốc như: nguồn gốc của giống gốc, quỏ trỡnh phõn lập, phương phỏp tạo giống, cỏch xỏc định độc lực của giống, cỏc chỉ số sinh học của giống gốc (LD50, EID50, TCID50...), quy trỡnh giữ giống, mụi trường hay hệ thống tế bào sử dụng để nuụi cấy và sản xuất giống gốc...
- Quy trỡnh nhõn giống sản xuất (working seed); - Trỡnh tự sản xuất;
- Kiểm nghiệm sản phẩm;
Mỗi cụng đoạn đều phải mụ tả chi tiết cỏc thao tỏc kỹ thuật, phương phỏp đỏnh giỏ sản phẩm của cụng đoạn. Vớ dụ: phương phỏp để chứng minh mụi trường đú vụ trựng, phương phỏp tiệt trựng mụi trường, điều kiện bảo quản tế bào dũng, kớch thư ớc của bỡnh nuụi cấy, điều kiện và thời gian nuụi cấy, những quan sỏt của quỏ trỡnh nhõn lờn, cỏc chỉ tiờu và lưu ý để thu hoạch sản phẩm, kỹ thuật thu hoạch.
Tài liệu cũng hướng dẫn cỏch kiểm nghiệm sản phẩm, cỏc test kiểm tra độ tinh khiết, an toàn, hiệu lực và cỏc yờu cầu khỏc của mỗi lụ sản phẩm hoàn chỉnh. Những lưu ý đ ặc biệt khi kết thỳc bao gồm quỏ trỡnh đúng gúi, dỏn nhón, ch ỉ dẫn và lưu ý s ử dụng, hạn sử dụng của sản phẩm.
Những hướng dẫn để sản xuất cỏc loại vacxin thỳ y phải được sự phờ duyệt bởi cơ quan cú thẩm quyền, là tiờu chuẩn thống nhất của tất cả cỏc lụ sản xuất.
1.3.3. Sản xuất vacxin
Quỏ trỡnh nhõn giữ giống (Master seed)
Mỗi loại vacxin được sản xuất từ một giống vi sinh vật gốc, giống vi sinh vật này qua quỏ trỡnh tuyển chọn, cú đủcỏc đặc tớnh sinh học đạt yờu cầu dựng để làm giống cho quỏ trỡnh sản xuất vacxin (vớ dụ: cú tớnh khỏng nguyờn đặc trưng và ổn định), giống gốc phải cú lý lịch rừ ràng, đ ặc biệt phải cú cỏc thụng số về nguồn gốc, cỏc chỉ số sinh học, cú quy trỡnh nhõn giống và bảo quản.
Khi sản xuất giống gốc, nờn sản xuất cỏc mẻđơn rồi trộn lẫn với nhau để tạo thành một mẻ lớn. Giống gốc nờn được đụng khụ rồi bảo quản ở nhiệt độ thớch hợp để duy trỡ sự sống.
Vớ dụ: Giống virus nờn bảo quản ở - 700C.
Mỗi giống gốc cần được kiểm tra sựđồng nhất, an toàn và hiệu lực, độ tinh khiết cần được kiểm tra đểđảm bảo giống khụng lẫn vi khuẩn, nấm, Mycoplasma và virus ngoại lai.
Cần chỳ ý rằng việc sử dụng một giống gốc và số lần cấy chuyển giới hạn sẽ giỳp duy trỡ sựđồng nhất và tớnh ổn định của sản phẩm vacxin.
Một số quy trỡnh nuụi giữ giống vi sinh vật
Quy trỡnh nuụi giữ giống xoắn khuẩn Leptospira
Phạm vi ỏp dụng
Quy trỡnh này ỏp dụng cho việc nuụi giữ giống xoắn khuẩn gồm 6 chủng đang được nuụi giữ và sử dụng trong ngành thỳ y nước ta. Tờn khoa học của giống:
- Leptospira bataviae - L. canicola
- L. grippotyphosa - L. icterohaemorrhagiae
- L. mitis - L. pomona
Giống L. grippotyphosa cú nguồn gốc từ Rumani, giống L. icterohaemorrhagiae cú nguồn gốc từ Liờn Xụ cũ. Cỏc gi ống cũn lại do Viện Thỳ y phõn lập tại Việt Nam. Giống được dựng để sản xuất và kiểm nghiệm vacxin vụ hoạt.
Tiờu chuẩn sinh vật học của giống
- Nhận dạng: Khỏng thể trong mỏu của động vật mẫn cảm được tiờm canh trựng vụ hoạt sẽngưng kết đặc hiệu với chủng vi khuẩn dựng làm khỏng nguyờn.
- Nuụi cấy: Vi khuẩn mọc tốt trong cỏc mụi trường chuyờn dụng, đặc biệt là EMJH (Johnson and Harris modification of the Ellinghausen and Mc Cullough medium) pH = 7,2 - 7,4, nhiệt độ nuụi cấy 28 - 30oC, hiếu khớ.
- Hỡnh thỏi:
Xem tươi dưới kớnh hiển vi nền đen bội giỏc thấp 10x/20x10 - 20, vi khuẩn cú dạng mảnh, di động theo nhiều kiểu: thẳng tiến, xoay vũng hoặc bật lũ xo.
Xem tiờu bản nhuộm bằng phương phỏp Morosop dưới kớnh hiển vi bội giỏc cao 10 x 20 x 100 (vật kớnh dầu) vi khuẩn cú hỡnh sợi dài, hai đầu hơi cong, bắt màu tớm sẫm, kớch thước: 0,1 - 1 x 6 - 20 àm. Do đặc tớnh di động cựng với kớch thước nhỏ dài nờn qua được màng lọc 0,2 àm.
- Tớnh độc:
Đối với chuột lang non (thể trọng 120 - 130g): Tiờm liều 3ml canh trựng 4 - 7 ngày vào xoang bụng gõy sốt nhẹ(tăng 0,5 - 1oC), cú thểcú hoàng đản ở niờm mạc mắt, cú khi gõy chết động vật thớ nghiệm.
Đối với thỏ non (thể trọng 200 - 250g): Tiờm liều 3ml canh trựng 4 - 7 ngày vào xoang bụng gõy sốt nhẹ (0,5 - 1oC), khụng cú triệu chứng lõm sàng rừ rệt.
- Tớnh gõy miễn dịch:
Tiờm vào dưới da thỏ với liều 5 ml khỏng nguyờn (đó vụ hoạt bằng nhiệt độ 56oC/60 phỳt) 2 lần, lần một cỏch lần hai 7 ngày sẽ sản sinh ra khỏng thểngưng kết với khỏng nguyờn tương ứng ở hiệu giỏ thấp nhất là 1/100.
Thỏ được tối miễn dịch theo "Quy trỡnh chế tạo khỏng huyết thanh đơn giỏ qua thỏ" phải được tạo khỏng thể cú hiệu giỏ ngưng kết với khỏng nguyờn cựng chủng khụng