CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN XẠ KHUẨN
3.1.1. Sự phõn bố và hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn
Từ 71 mẫu đất lấy ở nhiều vựng khỏc nhau trong cả nước, chỳng tụi đó phõn lập và thuần khiết được 508 chủng xạ khuẩn. Số lượng và sự phõn bố xạ khuẩn trong đất được trỡnh bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1 Số lượng và sự phõn bố xạ khuẩn trong đất ở một số vựng
Nơi lấy mẫu Số lượng mẫu đất Số lượng xạ khuẩn /
1g đất (x 104 CFU)
Số chủng đó phõn lập
Trà Mi (Quảng Ninh) 3 3,1 .104 – 4,5.104 37
Cầu Diễn (Hà Nội) 9 1,9.104 – 3,5.104 45
Trà Cổ (Quảng Ninh) 14 15 – 26 53
Thành Phố Vũng Tàu 3 18 – 37 25
Xuyờn Mộc
(Bà Rịa – Vũng Tàu) 5 14– 28 53
Nam Định 3 1,5.104 – 5,6.104 45
Chõu Giang (Hưng Yờn) 7 1,2.103 – 3,7.103 37
Tiền An (Bắc Ninh) 8 2,3.103 – 4,6.103 53
Nghệ An 09 23 – 43 31
Bắc Ninh 10 3,3. 103 – 5,4.103 79
Tổng 71 1,5 – 5,6.104 508
Mặc dự ở đõy chỳng tụi khụng đi sõu vào nghiờn cứu sự phõn bố của xạ khuẩn trong đất, tuy nhiờn cú thể thấy số lượng xạ khuẩn trong cỏc mẫu đất là khỏ phong phỳ. Tuỳ thuộc vào tớnh chất đất và ở cỏc địa điểm khỏc nhau, số lượng xạ khuẩn (Streptomyces) cú thể dao động từ 1,5.104 đến 5,6.108 CFU/ g đất.
Hỡnh 3.1. Tỷ lệ cỏc chủng xạ khuẩn thuộc Chi Streptomyces theo nhúm màu.
Ký hiệu (T) trong đồ thị chỉ giỏ trị SD với n=3
Tỷ lệ cỏc chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces phõn chia theo nhúm màu
của Shirling và Gottlieb. Số lượng xạ khuẩn nhiều nhất vẫn là nhúm xỏm chiếm 39% tổng số cỏc chủng phõn lập, sau đú là đến nhúm trắng chiếm 22,8% và nhúm hồng 20,2%, nhúm xanh da trời 5,3% cuối cựng ớt nhất vẫn là nhúm xanh lục chiếm 2,9%. Kết quả này phự hợp với những nghiờn cứu trước đõy [7]. Ở đất than bựn, số lượng xạ khuẩn nhúm xỏm chiếm 61,8% trong tổng cỏc nhúm, ở đất podsol (đất axit) chiếm 59,64% cũn đất kiềm (carbonat) chiếm 35,4%.
Tỷ lệ cỏc chủng xạ khuẩn cú hoạt tớnh khỏng sinh khụng cao, 136 chủng cú hoạt tớnh trờn tổng số 508 chủng xạ khuẩn phõn lập được, chiếm 26,77%. Điều này cú thể một phần là do số lượng vi sinh vật kiểm định là khụng nhiều. Tuy nhiờn, tỷ lệ xạ khuẩn khỏng nấm lại cao hơn. Đỏng chỳ ý là tỷ lệ xạ khuẩn khỏng
F.oxysporum, nấm gõy bệnh thối cổ rễ phõn lập trực tiếp từ thực vật: cú 82 chủng,
chiếm 16,14%. Cũng như thường lệ, tỷ lệ khỏng vi khuẩn Gram (+) bao giờ cũng cao nhất, chiếm 23,2%, sau đú mới đến vi khuẩn Gram (-) chiếm 8,0%. Tớnh đối khỏng của cỏc nhúm xạ khuẩn phõn lập được với 5 loại vi sinh vật kiểm định tiờu biểu cho cỏc nhúm vi sinh vật khỏc được minh hoạ ở hỡnh 3.2.
Tỷ lệ xạ khuẩn phân theo nhóm màu
0 10 20 30 40 50 Nhóm màu T ỷ l ệ ( %)
Hỡnh 3.2. Tỷ lệ phần trăm cỏc chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh.
Ký hiệu (T) trong đồ thị chỉ giỏ trị SD với n=3
Trong số 508 chủng phõn lập được, cú 58 chủng ưa nhiệt chiếm 11,4%. Đõy là
cỏc chủng sinh trưởng tốt ở 45-500C. Trong số này cú 8 chủng cú hoạt tớnh khỏng
sinh: 6 chủng chỉ chống nấm khụng chống vi khuẩn, 2 chủng vừa chống vi khuẩn vừa chống F. oxysporum. Tuy nhiờn, chỳng tụi mới chỉ dừng lại ở mức điều tra chứ khụng đi sõu nghiờn cứu cỏc chủng ưa nhiệt này.
3.1.2. Tuyển chọn cỏc chủng xạ khuẩn sinh CKS chống nấm cú hoạt tớnh cao cao
Sau khi điều tra sơ bộ về cỏc chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh, chỳng tụi chọn ra 47 chủng cú hoạt tớnh mạnh nhất để tiến hành sàng lọc bước 2. Ở bước này, xạ khuẩn được nuụi cấy lắc trờn mụi trường dịch thể ISP4, sau đú lọc tỏch khuẩn ty. Tiến hành chiết khỏng sinh từ dịch lọc và từ sinh khối bằng dung mụi khỏc nhau. Hoạt tớnh khỏng sinh cũng được xỏc định với 5 loại vi sinh vật kiểm định nờu trờn. Kết quả hỡnh 3.3 cho thấy, CKS vừa tớch luỹ trong sinh khối vừa tiết ra mụi trường. Mục tiờu của chỳng tụi là tuyển chọn được chủng xạ khuẩn chống nấm gõy bệnh thực vật, trước hết là F. oxysporum gõy bệnh thối cổ rễ. Bảy chủng cú hoạt tớnh
chống nấm mạnh nhất đó được lựa chọn và được ký hiệu là TC-54, C-5, TC-37, BC-54, BC-87, T-41, D-42. Cỏc chủng này thuộc 5 nhúm màu khỏc nhau.
Tỷ lệ phân trăm các chủng có hoạt tính kháng sinh
0 5 10 15 20 25 30 Nhóm các vi sinh vật kiểm dịnh T ỷ l ệ p h â n t ră m ( % )
Hỡnh 3.3. Hoạt tớnh khỏng sinh của 47 chủng xạ khuẩn
Ký hiệu (T) trong đồ thị chỉ giỏ trị SD với n=3
Chủng ký hiệu TC-54, T-41 và D-42 đều thuộc nhúm xỏm, chủng C-5 thuộc nhúm hồng, chủng TC-37 thuộc nhúm xanh da trời, chủng BC-86 thuộc nhúm trắng và chủng BC-87 thuộc nhúm vàng. Dựa trờn hoạt tớnh khỏng nấm của cỏc chủng, 3 chủng xạ khuẩn được chọn để tiếp tục nghiờn cứu là chủng cú ký hiệu TC-54, D-41 và D-42. Chỳng tụi tiến hành nghiờn cứu cỏc đặc điểm phõn loại của 3 chủng này.