CHƯƠNG 2 NGUYấN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.1. Phương phỏp thu mẫu bệnh thực vật, phõn lập nấm và định tờn
2.2.1.1. Phõn lập nấm gõy bệnh
Phõn lập nấm gõy bệnh (từ cỏc mẫu cõy trồng):
Chọn mẫu bệnh cú triệu chứng điển hỡnh, mới. Rửa mẫu bệnh sạch đất cỏt dưới vũi nước. Cắt chọn mảnh mụ bệnh thớch hợp. Khử trựng bề mặt cỏc mảnh mụ trờn bằng cồn (etanol 70%) trong vũng 3 phỳt. Rửa lại bằng nước cất vụ trựng. Thấm khụ mảnh mụ bằng giấy thấm vụ trựng. Dựng dao mổ vụ trựng cắt cỏc mảnh mụ trờn thành cỏc mảnh nhỏ 1 - 3 mm (chứa cả phần mụ bệnh và mụ khoẻ). Dựng panh vụ trựng đặt cỏc mảnh mụ nhỏ trờn vào mụi trường PDA, trờn đĩa Petri. Ghi chỳ cẩn thận bằng bỳt viết kớnh: ngày, cõy, bệnh... Để đĩa mụi trường đó đặt mẫu
trong tủ ấm (30oC). Theo dừi sự phỏt triển của sơị nấm mọc ra từ mụ bệnh. Khi nấm
đó phỏt triển từ mụ bệnh ra mụi trường, lấy phần đỉnh sợi nấm chuyển sang mụi trường thớch hợp: PDA hoặc CZ. Thu nhận giống thuần khiết: lấy phần đỉnh sợi nấm mọc trờn đĩa thạch, cõy truyền sang cỏc ống thạch nghiờng chứa mụi trường
CZ, khi đó nhận được giống thuần khiết thỡ bảo quản trong tủ lạnh ở 4oC.
2.2.1.2. Phương phỏp xỏc định cỏc đặc điểm phõn loại, đặc điểm hỡnh thỏi và định tờn.
Cỏc đặc điểm hỡnh thỏi nấm được quan sỏt bằng mắt thường, kớch thước của
khuẩn lạc nấm được đo bằng thước đo. Cỏc chỉ tiờu cần xỏc định :
- Hỡnh dạng mặt trước khuẩn lạc.
- Hỡnh dạng và màu sắc bào tử.
- Hỡnh dạng mặt sau khuẩn lạc.
- Sự hỡnh thành sắc tố.
Làm tiờu bản, soi dưới kớnh hiển vi quang học và kớnh hiển vi điện tử, mụ tả hỡnh dạng kớch thước sợi nấm và cơ quan sinh bào tử, định tờn sơ bộ tới giống (chi).
- Định tờn đến loài.
- Chụp ảnh khuẩn lạc, sợi nấm và cơ quan sinh bào tử.