CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.3. KHẢ NĂNG TỔNG HỢP CKS CỦA 3 CHỦNG XẠ KHUẨN ĐÃ LỰA CHỌN
3.3.1. Lựa chọn mụi trường lờn men thớch hợp
Trong cụng nghệ khỏng sinh, mụi trường đúng vai trũ quan trọng hàng đầu. Một mụi trường lờn men tốt phải là mụi trường vừa thuận lợi cho chủng sinh trưởng tốt vừa cho hiệu suất khỏng sinh cao. Ở đõy chỳng tụi dựng 5 loại mụi trường lờn men cơ sở là A- 4, A- 4H, A- 9, A-12 và Gauze I [125]. Quỏ trỡnh lờn men được tiến hành trong bỡnh nún dung tớch 500ml chứa 100ml mụi trường. Nuụi lắc 200 vũng/
phỳt ở 28-300C. Thớ nghiệm lặp lại 3 lần. Sau 120 giờ lờn men, xỏc định hoạt tớnh
khỏng sinh với vi sinh vật kiểm định là F. oxysporum. Kết quả được trỡnh bày ở
bảng 3.8.
Chủng T-41
Trờn 5 loại mụi trường lờn men, chủng T-41 chỉ cú hoạt tớnh khỏng vi sinh vật kiểm định trờn 4 mụi trường A-4, A-4H, A-12 và Gauze I. Song chỉ trờn mụi trường A-12 chủng T-41 cho hoạt tớnh khỏng sinh mạnh nhất (20mm).
Với mục đớch chọn mụi trường sản xuất CKS chống nấm thỡ mụi trường A-12 thớch hợp hơn cả với chủng T-41. Tuy nhiờn, khi so sỏnh khả năng hỡnh thành CKS trờn mụi trường rắn với mụi trường dịch thể A-12 chỳng tụi nhận thấy hoạt tớnh khỏng sinh trờn mụi trưởng rắn mạnh hơn rất nhiều (44mm) so với mụi trường dịch thể A-12. Trờn cơ sở đú chỳng tụi tỡm hiểu khả năng hỡnh thành CKS của chủng T- 41 trờn mụi trường xốp, đồng thời sử dụng mụi trường A-12 cho những nghiờn cứu tiếp theo.
Chủng D-42
Từ kết quả ở bảng 3.8 ta thấy CKS của chủng D-42 được tớch luỹ nội bào rất lớn trừ mụi trường Gauze I. Hoạt tớnh khỏng sinh trong dịch lờn men của mụi
trường A - 9 là lớn nhất. Tuy nhiờn, lượng sinh khối được tạo ra trong mụi trường này lại khụng đỏng kể. Bờn cạnh đú mụi trường A-12 cho lượng sinh khối rất lớn 16,5 g/L mà lượng khỏng sinh trong dịch lọc của A-12 chỉ yếu hơn mụi trường A- 9. Mặt khỏc lượng khỏng sinh tớch luỹ trong sinh khối của mụi trường này cũng lớn hơn cả, dung mụi dựng để chiết CKS từ sinh khối sử dụng etanol là tốt nhất. Điều chỳng tụi quan tõm ở đõy là lựa chọn ra một mụi trường lờn men thớch hợp cho chủng D-42 làm sao cú hiệu suất khỏng sinh là cao nhất.
Bảng 3.8. Hoạt tớnh khỏng F. oxysporum của cỏc chủng xạ khuẩn nghiờn cứu trờn cỏc mụi trường lờn men khỏc nhau
Chủng xạ
khuẩn Mụi trường pH
sau lờn men Sinh khối (mg/ml) Hoạt tớnh khỏng sinh (D-d, mm) T-4.1 A-4 6.1 6.87±0,15 10,33±1,53 A-4H 7.2 6,4±0,1 12,33±0,58 A-9 7.0 1,93±0,15 0,67±0,58 A-12 6.7 7,63±0,15 22,00±2,0 Gauze1 6.3 6,7±0,2 15,67±1,53 D -42 A-4 6.54 9,2±0,36 21,0±2,65 A-4H 7.69 13,57±1,25 16,67±2,52 A-9 8.1 12,2±0,53 32,67±2,52 A-12 7.27 16,8±0,26 21,00±1,0 Gauze1 6.84 2,4±1,35 13,67±1,53 TC 5-4 A-4 8.5 13,96±0,62 34,33±2,08 A-4H 8 16,53±0,57 28,33±1,53 A-9 4 9,43±0,31 19,67±1,53 A-12 4 18,58±0,59 22,33±1,53 Gauze1 6 8,0±0,46 23,00±2,0
Như vậy trong 6 loại mụi trường cơ bản, mụi trường A-12 là mụi trường thớch hợp hơn cả cho sự sản sinh CKS của chủng này. Đõy là mụi trường giầu dinh dưỡng với nguồn cacbon là tinh bột tan và rỉ đường, nguồn nitơ là bột đậu tương. Cú thể , rỉ đường và đậu tương, ngoài cacbon và nitơ cũn cung cấp một số tỏc nhõn nào đú cần thiết cho sinh trưởng và tổng hợp CKS của chủng D-42.
Chủng TC-54
Với chủng TC-54, mụi trường A-12 cho lượng sinh khối lớn nhất do mụi trường rất giàu dinh dưỡng (tinh bột tan, rỉ đường, bột đậu tương) song lại khụng cho hoạt tớnh khỏng sinh cao nhất. Bờn cạnh đú, với mụi trường A-4H, lượng sinh khối tạo thành khỏ cao 16,7 mg/ml và hoạt tớnh khỏng nấm chỉ sau mụi trường A-4. Điều quan tõm ở đõy là cần lựa chọn mụi trường lờn men sao cho hiệu suất khỏng sinh cao nhất. Như vậy, trong 5 loại mụi trường thớ nghiệm cú thể chọn mụi trường A-4 là mụi trường thớch hợp cho quỏ trỡnh tổng hợp CKS và được sử dụng cho cỏc nghiờn cứu tiếp theo.