CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ
2.3. Phân lập các hợp chất
2.3.1. Các hợp chất phân lập từ lồi V.limonifolia
Lá V. limonifolia sau khi phơi khơ, nghiền thành bột mịn (4,2 kg), được làm ẩm sau đĩ chiết với methanol (3 lần x 10L) bằng thiết bị siêu âm (ở 50oC, mỗi lần 1
giờ). Các dịch chiết được gom lại, lọc qua giấy lọc và cất thu hồi dung mơi dưới áp suất giảm thu được 350 g cặn chiết methanol. Cặn chiết này được hịa tan vào 2 lít nước cất và tiến hành chiết phân bố lần lượt với CH2Cl2 và EtOAc thu được cặn CH2Cl2 (VIL1, 130,0 g), cặn EtOAc (VIL2, 27,0 g) và lớp nước (VIL3) sau khi cất thu hồi dung mơi dưới áp suất giảm.
Phân đoạn VIL1 được phân bố đều trong dichloromethane, tẩm với silica gel, quay khơ loại bỏ dung mơi, nghiền mịn đưa lên cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải gradient n-hexane:acetone (100:0 → 0:1, v/v) thu được sáu phân đoạn chính, VIL1A-VIL1F. Phân đoạn VL1B được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (5:1, v/v) thu được bốn phân đoạn, VIL1B1-VIL1B4. VIL1B1được tinh chế bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải n- hexane:EtOAc (1,5:1, v/v) thu được hợp chất VL7 (6,0 mg). Hợp chất VL4 (4,4 mg) và VL6 (12,5 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIL1B3 bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi n-hexane:EtOAc (1,5:1, v/v).
Phân đoạn VIL1C được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (5:1, v/v) thu được ba phân đoạn nhỏ hơn, VIL1C1-VIL1C3. VIL1C1 tiếp tục được đưa lên đưa lên cột sắc ký LH-20 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1, v/v) thu được hợp chất VL5 (2,5 mg). VIL1C2 được tinh chế bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải CH2Cl2:MeOH (17:1, v/v) thu được hợp chất VL3 (14,0 mg). Hợp chất VL8 (10,3 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIL1C3 bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi n-hexane:EtOAc (1,4:1, v/v).
Phân đoạn VIL1D được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (4:1, v/v) thu được năm phân đoạn, VIL1D1-VIL1D5. VIL1D2 tiếp tục được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải acetone:nước (1,8:1, v/v) thu được ba phân đoạn nhỏ hơn, VIL1D2A-VIL1D2C. Hợp chất VL9 (18,0 mg) và VL10 (4,5 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIL1D2A bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi n-hexane:EtOAc (1,4:1, v/v). Hợp chất VL11 (7,0 mg) thu được khi tinh chế phân đoạn VIL1D2C bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi n-hexane:EtOAc (1,4:1, v/v). Phân đoạn VIL1D4 được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải acetone:nước (2:1, v/v) thu được ba phân đoạn nhỏ hơn, VIL1D4A-VIL1D4C. VIL1D4A được tinh chế bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải CH2Cl2:acetone (2,5:1, v/v) thu được hợp chất VL2 (8,0 mg).
VIL1D4C được tinh chế bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải n-
hexane:acetone (1,4:1, v/v) thu được hợp chất VL1 (10,5 mg).
Phần nước VIL3 được đưa lên cột diaion HP-20 để loại đường bằng nước, sau đĩ được rửa giải bằng methanol trong nước với nồng độ tăng dần (25%, 50%, 75% và 100%) thu được bốn phân đoạn VIL3A-VIL3D. Phân đoạn VIL3A được tẩm với silica gel rồi đưa lên cột sắc ký với hệ dung mơi rửa giải dichloromethane:MeOH (100:1 → 0:1, v/v) thu được bảy phân đoạn, VIL3A1-VIL3A7. Phân đoạn VIL3A5 tiếp tục được phân tách trên cột sắc ký R-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (5:1, v/v) thu được ba phân đoạn nhỏ hơn, VIL3A5A-VIL3A5C. Hợp chất VL12 (9,2 mg) thu được khi tinh chế phân đoạn VIL3A5A bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi EtOAc:MeOH:nước (3,5:1:0,15, v/v/v).