Các tương tác HMBC giữa H-14 (δH 6,01) và C-12 (δC 67,2)/C-13 (δC 177,5)/C-15 (δC 176,5)/C-16 (δC 73,0); giữa H-16 (δH 5,01) và C-14 (δC 114,4)/C-15 (δC 176,5); giữa H-12 (δH 4,58) và C-9 (δC 47,6)/C-11 (δC 32,0)/C-13 (δC 177,5)/C- 14 (δC 114,4)/C-16 (δC 73,0) khẳng định sự cĩ mặt của vịng γ-lactone chưa bão hịa tại carbon β (C-13) và vị trí nhĩm hydroxy tại C-12. Bằng so sánh độ bội của H-12 (δH 4,58, dd, J = 4,0, 8,0 Hz) của VL1 với các hợp chất cĩ nhĩm 12α-hydroxy
[vitexolide A: δH 4,56 (br d, J = 10,6 Hz, H-12), đo trong acetone-d6] [42] và hợp chất cĩ nhĩm 12β-hydroxy [12-epivitexolide A: δH (4,61 br s, H-12), đo trong acetone-d6] [42], đã gợi ý nhĩm hydroxy tại C-12 cĩ cấu hình α.
Bảng 3.1. Số liệu phở NMR của hợp chất VL1 và hợp chất tham khảo
C δC δCa,b DEPT δHa,c (J = Hz)
1 39,7 39,8 CH2 1,19 (ddd, 3,0, 12,5, 13,0, α)/1,74 (m, β) 2 20,1 20,4 CH2 1,54 (m, α)/1,64 (m, β) 3 43,0 43,3 CH2 1,30 (m, α)/1,45 (brd, 13,0, β) 4 34,3 34,1 C - 5 56,4 48,8 CH 1,75 (m) 6 25,3 32,5 CH2 1,60 (m, α)/1,91 (ddd, 2,5, 3,0, 14,0, β) 7 39,0 74,7 CH 4,38 (t, 3,0) 8 149,5 150,6 C - 9 52,8 47,6 CH 2,60 (dd, 4,0, 9,0) 10 40,1 40,5 C - 11 32,1 32,0 CH2 1,76 (m) 12 67,3 67,2 CH 4,58 (dd, 4,0, 8,0) 13 176,3 177,5 C - 14 114,2 114,4 CH 6,01 (d, 2,0) 15 174,1 176,5 C - 16 71,8 73,0 CH2 5,01 (m) 17 107,1 110,0 CH2 4,65 (s)/5,13 (s) 18 22,1 33,8 CH3 0,92 (s) 19 34,0 22,0 CH3 0,86 (s) 20 15,2 14,3 CH3 0,74 (s)
#C của vitexolide E (VL1a, đo trong acetone-d6) [42], ađo trong CD3OD, b125MHz, c500MHz.
Để xác định chính xác cấu hình tuyệt đối của C-12, hợp chất VL1 được tiến
hành đo phở CD. Phở CD thực nghiệm của hợp chất này được so sánh với các tính tốn theo lí thuyết (phương pháp TDDFT) [122] của hai epimer 1a (7α,12α-
dihydroxylabda-8(17),13-dien-15,16-olide) và 1b (7α,12β-dihydroxylabda-8(17),13- dien-15,16-olide)-cấu trúc chỉ khác nhau ở cấu hình của nhĩm hydroxy tại C-12. Kết quả cho thấy, phở CD của VL1 cĩ hiệu ứng Cotton dương tại max = 218 nm khi đo ở bước sĩng 200-244 nm (nồng độ 10-4 M), và hiệu ứng Cotton âm tại max = 251 nm
khi đo ở bước sĩng 245-280 nm (nồng độ 10-2 M). So sánh với phở CD của hợp chất
1a (cĩ hiệu ứng Cotton dương tại max = 221 nm và hiệu ứng Cotton âm tại max =
249 nm) và hợp chất 1b (cĩ hiệu ứng Cotton âm tại max = 221 nm). Như vậy, phở
CD của hợp chất VL1 cĩ giống với của 1a, do đĩ cĩ cấu hình của nhĩm hydroxy tại C-12 được chứng minh là α (tức cấu hình R). Từ những phân tích trên, cấu trúc của hợp chất VL1 được xác định là 7α,12α-dihydroxylabda-8(17),13-dien-15,16-olide.
Đây là một hợp chất mới và được đặt tên là vitexlimolide A.
2 1 0 2 2 0 2 3 0 2 4 0 2 5 0 2 6 0 2 7 0 2 8 0 -1 .0 -0 .5 0 .0 0 .5 1 .0 , nm , re la ti v e u n it s V L 1 (c = 1 0- 4 M ) 1 a V L 1 (c = 1 0- 2 M ) 1 b
Hình 3.5. Phở CD thực nghiệm của hợp chất VL1 và tính tốn CD theo lý thuyết
của hai epimer 1a và 1b.
Hình 3.7. Phở 1H-NMR của hợp chất VL1
Hình 3.9. Phở DEPT của hợp chất VL1
Hình 3.11. Phở HMBC của hợp chất VL1
Hình 3.13. Phở NOESY của hợp chất VL1 3.1.1.2. Hợp chất VL2: Vitexlimolide B (hợp chất mới)
Hình 3.14. Cấu trúc hĩa học VL2 và hợp chất tham khảo (VL1)
Hợp chất VL2 thu được dưới dạng chất bột vơ định hình màu trắng. Cơng thức phân tử của VL2 được xác định là C20H30O5 dựa vào kết quả phở khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS xuất hiện pic ion tại m/z 385,1772 [M+Cl] ̶ (tính tốn lý thuyết cho cơng thức [C20H30O5Cl] ̶ : 385,1787).
Trên phở 1H-NMR của hợp chất VL2 (đo trong CD3OD) xuất hiện tín hiệu proton của ba nhĩm methyl liên kết với carbon bậc bốn tại δH 0,74 (3H, s), 0,86 (3H, s) và 0,92 (3H, s), hai proton hydroxymethine tại δH 4,38 (t, J = 3,0 Hz) và 4,58 (br s), ba proton olefin tại δH 4,78 (s), 5,13 (s) và 6,04 (s). Trên phở 13C-NMR và DEPT của VL2 xuất hiện tín hiệu của 20 nguyên tử carbon, trong đĩ cĩ ba carbon methyl tại δC 14,2, 22,0 và 33,8, sáu methylene tại δC 20,3, 31,2, 32,4, 39,8, 43,3 và 110,5, sáu methine tại δC 66,9, 47,6, 49,0, 74,7, 100,2 và 117,1, bốn carbon khơng liên kết trực tiếp với hydro tại δC 34,1, 40,5, 150,0 và 173,1 và một carbon carbonyl tại δC 173,1. Số liệu phở NMR của VL2 khá giống với hợp chất VL1 gợi ý đây cũng là một hợp chất khung labdane. Tuy nhiên, so sánh số liệu phở NMR của hai hợp chất trên cĩ điểm khác biệt lớn, đĩ là tín hiệu của nhĩm oxymethylene (δH 5,01 và δC 73,0) ở hợp chất VL1 được thay thế bằng nhĩm hemiacetal (δH 6,23 và δC 100,2) trong hợp chất VL2. Tín hiệu cộng hưởng của các proton trong vịng γ-hydroxy-γ-lactone trên phở 1H-NMR của VL2 rộng và thấp, cũng như tín hiệu cộng hưởng của C-14 (δC 117,1) và C-16 (δC 100,2) rất khĩ quan sát trên phở 13C-NMR gợi ý tồn tại một cân bằng giữa hai đồng phân epimer tại C-16.