CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ
2.3. Phân lập các hợp chất
2.3.2. Các hợp chất phân lập từ lồi V trifolia
Lá lồi V. trifolia sau khi phơi khơ, nghiền thành bột mịn (2,2 kg), được làm ẩm sau đĩ chiết với methanol (3 lần x 5L) bằng thiết bị siêu âm (ở 50oC, mỗi lần 1 giờ). Các dịch chiết được gom lại, lọc qua giấy lọc và cất thu hồi dung mơi dưới áp suất giảm thu được 130 g cặn chiết methanol. Cặn chiết này được hịa vào 2 lít nước cất và tiến hành chiết phân bố lần lượt với CH2Cl2 và EtOAc thu được cặn CH2Cl2 (VIT1, 51,0 g), cặn EtOAc (VIT2, 27,0 g) và lớp nước (VIT3) sau khi cất thu hồi dung mơi dưới áp suất giảm.
Phân đoạn VIT2 được phân bố đều trong ethyl acetate, tẩm với silica gel, quay khơ loại bỏ dung mơi, nghiền mịn đưa lên cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải gradient n-hexane:acetone (100:0 → 0:1, v/v) thu được bốn phân đoạn chính, VIT2A-VIT2D. Phân đoạn VIT2B tiếp tục được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải acetone:nước (1,5:1, v/v) thu được hai phân đoạn, VIT2B1 và VIT2B2. VIT2B2 được tinh chế bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải
n-hexane:EtOAc (1,1:1, v/v) thu được hợp chất VT15 (12,0 mg) và VT16 (10,0 mg).
Hợp chất VT9 (9,0 mg) và VT10 (10,0 mg) thu được khi tinh chế phân đoạn VIT2C trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1,2:1, v/v). Phân đoạn VIT2D được đưa lên cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi rửa giải CH2Cl2:MeOH (10:1, v/v) thu được ba phân đoạn, VIT2D1-VIT2D3. VIT2D1 được phân tách trên cột RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1,5, v/v) thu được bốn phân đoạn
nhỏ hơn, VIT2D1A-VIT2D1D. VIT2D1A được đưa lên đưa lên cột sephadex LH-20 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1, v/v) thu được hợp chất VT1 (5,0 mg) và
VT3 (9,0 mg). VIT2D1C được tinh chế bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi
rửa giải CH2Cl2:acetone:nước (1,5:1:0,05, v/v/v) thu được hợp chất VT4 (10,0 mg) và VT7 (8,0 mg). VIT2D2 được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1,5, v/v) thu được hai phân đoạn, VIT2D2A và VIT2D2B. Hợp chất VT8 (8,0 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIT2D2A bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi CH2Cl2:MeOH (12:1, v/v). Hợp chất VT5 (16,0 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIT2D2B bằng cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi CH2Cl2:acetone:nước (1:1:0,05, v/v/v). VIT2D3 được phân tách trên cột sắc ký RP- 18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1,5, v/v) thu được hợp chất VT11 (10,0 mg).
Phần nước VIT3 được đưa lên cột diaion HP-20 để loại đường bằng nước, sau đĩ được rửa giải bằng methanol trong nước với nồng độ tăng dần (25%, 50%, 75% và 100%) thu được bốn phân đoạn VIT3A-VIT3D. VIT3B được phân tách trên cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1,5, v/v) thu được ba phân đoạn nhỏ hơn, VIT3B1-VIT3B3. Hợp chất VT13 (12,0 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIT3B1 bằng cột sắc ký sephadex LH-20 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1, v/v). Hợp chất VT2 (8,0 mg) và VT6 (12,0 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIT3B2 bằng cột sắc ký RP-18 với hệ dung mơi rửa giải acetone:nước (1:3, v/v). Hợp chất VT12 (13,0 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn VIT3B3 bằng cột sắc ký sephadex LH-20 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1, v/v). VIT3C được phân tách trên cột RP-18 với hệ dung mơi rửa giải MeOH:nước (1:1,5, v/v) thu được hợp chất VT14 (15,0 mg).