II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
III.VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM
BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM 3.1. Vật liệu Vật liệu cho nghiên cứu là thế hệ G1 quần đàn chọn giống bố mẹ 2001, 2002 và 2003 và thế hệ G2 quần đàn 2001. Quần đàn 2001 và 2002 đã qua chọn lọc tính trạng tăng trưởng bằng phương pháp chọn lọc cá thể thực hiện năm 2002 và 2003; quần đàn 2003 đã qua chọn lọc tăng tỷ lệ philê và tăng trưởng bằng phương pháp chọn lọc kết hợp năm 2004 thuộc đề tài ”nâng cao chất lượng đàn cá tra bố mẹ về chỉ tiêu tăng trưởng bằng phương pháp chọn lọc gia đình, 2001-2005”. Các chi tiết hình thành quần đàn bố mẹ 2001, 2002 và 2003 được trình bày bỡi Nguyễn Văn Hảo và ctv. (2005).
3.2. Thiết kế phối tổ hợp gia đình
Đàn chọn giống thế hệ G1 từđàn bố mẹ chọn giống 2001, 2002 và 2003 sản xuất năm 2005, 2006 và 2007: áp dụng phương pháp phối giai thừa một phần, 2n đực lai với 2n cái tạo ra 4n gia đình (Berg & Henryon, 1998).
Đàn G1-2001 được cho sinh sản vào tháng 05/2005, 95 đực được phối giai thừa một phần với 97 cái tạo ra 162 gia đình cùng bố cùng mẹ. Đàn G1-2002 được cho sinh sản vào tháng 04/2006, 122 đực được phối giai thừa một phần với 118 cái tạo ra 208 gia đình cùng bố cùng mẹ. Đàn G1-2003 được cho sinh sản vào tháng 06/2007, 101 đực được phối giai thừa một phần với 105 cái tạo ra 183 gia đình cùng bố cùng mẹ.
3.3. Kỹ thuật sinh sản nhân tạo, ấp và ương 3.3.1. Sinh sản nhân tạo 3.3.1. Sinh sản nhân tạo
3.3.1.1. Liều lượng kích dục tố sử dụng
+ Đối với cá cái:
Chích 2 liều sơ bộ, thời gian cách nhau 12-24 giờ, sử dụng HCG với tổng cộng cho 2 liều là 1.200 - 2.000 UI/kg. Liều quyết định: 2500-4000 UI HCG/kg sau liều
sơ bộ sau cùng là 8 - 24 giờ. Sau khi tiêm liều quyết định 8 - 10 giờ thì cá rụng trứng.
+ Đối với cá đực: Tiêm một lần cùng với liều tiêm quyết định của cá cái với liều 250 UI HCG/kg.
3.3.1.2. Phương pháp thụ tinh
Áp dụng phương pháp thụ tinh khơ
3.3.2. Kỹ thuật ấp trứng cá tra
Khử trứng dính bằng tanin 0.6%, khuấy đều trong khoảng 30 giây. Trứng được ấp riêng rẽ theo gia đình trong dụng cụ hình nĩn bằng vải voan cĩ sục khí từ đáy dụng cụ (trứng khử dính) đặt trong bể composit. 3000 cá bột từ mỗi gia đình được chuyển sang ương riêng rẽ trong bể composit.
3.3.3. Kỹ thuật ương cá tra áp dụng
Sau khi cá nở 30 - 35 giờ cá bột hết nỗn hồng, để nâng cao tỷ lệ sống cá sau khi nở 20-24 giờ sẽđược chuyển sang ương để tránh hiện tượng cá bột ăn lẫn nhau.
Để giảm ảnh hưởng khác nhau lên các gia đình ương, qui trình ương chia làm 2 giai đoạn: Giai đoạn 1 trên bể composit 1 m3 đến ngày thứ 15 và Giai đoạn 2 trong các giai lưới đặt trong ao đất đến đánh dấu khoảng 5-6 tháng, cá đạt 42,7, 36,6 và 40,5 gam cho đàn G1-2001, G1-2002 và G1-2003.
3.4. Phương pháp đánh dấu
Áp dụng phương pháp đánh dấu từ PIT cho cả 3 quần đàn G1-2001, G1-2002 và F1-2003. Trung bình mỗi gia đình nhĩm chọn lọc đàn G1-2001 đành dấu 75 con, tổng cộng 12.190 con được thả nuơi thương phẩm thí nghiệm trong ao tại Trung tâm nghiên cứu. Trung bình mỗi gia đình nhĩm chọn lọc đàn G1-2002 đánh dấu 125 con, 13.409 con nuơi ao trung tâm nghiên cứu, 1.937 con nuơi đăng quầng và 1.621 con nuơi ao gần sơng. Trung bình mỗi gia đình đàn G1-2003 đánh dấu 60 con, tổng cộng cĩ 10.980 con thả nuơi thương phẩm trong ao thí nghiệm tại trung tâm nghiên cứu trong năm 2008.
3.5. Phương pháp chọc lọc
Phương pháp chọn lọc kết hợp giữa gia đình và cá thể trong từng gia đình được áp dụng cho tính trạng tỷ lệ philê và trọng lượng cơ thể trên các quần đàn G1-2001, G1-2002 và G1-2003 thực hiện trong các năm 2006, 2007 và 2008.
3.6. Nuơi thương phẩm thí nghiệm
-Thức ăn: các đàn cá nuơi thương phẩm thí nghiệm được cho ăn đủ và đều bằng thức ăn viên cơng nghiệp cĩ độđạm 28-22% đảm bảo cá ăn được thức ăn đều nhau.
-Để xem biểu hiện kiểu gien của quần đàn cá tra như thế nào ở các mơ hình này, đàn chọn giống cần được nuơi thương phẩm thử nghiệm trong các mơ hình đĩ. Do ao ở cồn gần sơng cĩ diện tích lớn trong khi số lượng cá cho thí nghiệm ít nên chúng tơi bố trí một rào nan tre đặt trong ao. Các yếu tố khác gần như giống với cá nuơi ở bên ngồi nan tre về mật độ, thay nước, lượng thức ăn,…. Ao nuơi tại Trung tâm nghiên cứu cĩ điều kiện gần giống và được xem là đại diện ao cho nội đồng. Trọng lượng cá đánh dấu ban đầu thả nuơi thí nghiệm cho 3 mơi trường khơng sai khác cĩ ý nghĩa thống kê (Đăng quầng: 26,8g; ao ở cồn: 26,5g và ao nghiên cứu: 28,1g)..
Cá giống sản xuất từ cá bố mẹ chọn lọc 2003 về tỷ lệ philê được đem nuơi thương phẩm thử nghiệm trong 6 ao và so sánh với 5 ao đối chứng nuơi bằng con giống bình thường tại ấp Bình Mỹ B, xã Bình Thạnh, huyện Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp.
3.7. Thu thập số liệu
3.7.1. Đánh giá biến dị kiểu hình tỷ lệ philê cá nuơi tại nơng hộ
Để đánh giá biến dị kiểu hình tính trạng tỷ lệ philê cá nuơi tại nơng hộ, tỷ lệ philê cá nuơi ở các mơ hình khác nhau được thu thập (Phụ lục 1).
3.7.2. Phân tích biến dị kiểu gien 3.7.2.1. Vật liệu 3.7.2.1. Vật liệu
- 500 mẫu vây cá được thu trên quần đàn G1-2001. 250 mẫu cho đánh giá biến dị quần đàn bố mẹ 2001: 250 mẫu ngẫu nhiên trên tổng số cá bố mẹ tham gia sinh sản 140 gia đình G1-2001. 250 mẫu từ đàn con cĩ tỷ lệ philê cao, thấp và trung
bình: thu mẫu vây 10 cá thể mỗi gia đình, trong 5 gia đình cĩ tỷ lệ philê cao nhất và 5 gia đình cĩ tỷ lệ philê thấp nhất, tổng cộng 100 mẫu. Thu mẫu vây 6 cá thể mỗi gia đình trong 10 gia đình cĩ tỷ lệ philê cao nhất tiếp theo và 10 gia đình cĩ tỷ lệ philê thấp nhất tiếp theo, tổng cộng 120 mẫu và 30 mẫu thu ngẫu nhiên từ các cá thể cĩ tỷ lệ philê trung bình.
- Mẫu được lưu trong ống tube 1,5ml cĩ chứa cồn 75 độ và bảo quản trong tủ lạnh nhiệt độ 40C. Mẫu được phân tích tìm biến dị di truyền và chỉ thị liên kết với tính trạng tỷ lệ philê vào năm 2007-2008.
3.7.2.2. Hĩa chất
- Mồi microsatellitte
Mười cặp mồi microsatellite đặc hiệu cho cá Tra (P. hypophthalmus) vùng đồng bằng Sơng Cửu Long được phân tích và phát triển từ DNA Technology Laboratory, BIOTEC, Thailand (DTLCB1, DTLCB4, DTLCB5, DTLCB7, DTLCB12, DTLCB13, DTLCB14, DTLCB15, DTLCB18, DTLCB19)
Bốn cặp mồi microsatellite đặc hiệu cho cá Tra (P. hypophthamus) Việt Nam được phân tích và tổng hợp từ nghiên cứu của ĐH Leuven (Bỉ) được cơng bố trên GenBank, 1999.