Xử lý mẫu máu ngoại vi:
- Ly tâm đơn thuần để loại bỏ huyết tương với lực ly tâm tương đối 1000g trong 5 phút ở 100C.
- Tách lớp huyết tương ra túi chất dẻo 250ml (Terumo, Nhật Bản).
- Đếm số lượng bạch cầu trong sản phẩm, điều chỉnh về nồng độ tế bào phù hợp cho bảo quản (không quá 5x108 tế bào/ml) bằng huyết tương tự thân vừa tách.
Xử lý mẫu dịch tủy xương
- Ly tâm đơn thuần: theo quy trình kỹ thuật đã công bố (Phụ lục 4, bài báo số 5)
+ Mẫu tủy xương được ly tâm để loại bỏ hồng cầu với lực ly tâm tương đối 500g trong vòng 6 phút ở 100C.
+ Loại bỏ cặn hồng cầu và thu hồi lớp huyết tương giàu bạch cầu, tiểu cầu.
+ Loại bỏ huyết hương bằng cách ly tâm với lực ly tâm tương đối 1000g trong 10 phút ở 100C, loại bỏ lớp huyết tương và thu lại cặn tế bào tủy.
- Sử dụng dung dịch HES 6% kết hợp ly tâm: tương tự quy trình áp dụng để xử lý mẫu máu dây rốn, được cải tiến theo phương pháp của
+ Trộn mẫu dịch tủy sau khi đã hòa loãng với RPMI 1640 với dung dịch HES 6% với tỷ lệ 1:1 về thể tích.
+ Trộn đều, để lắng ở nhiệt độ phòng trong 30 phút.
+ Ly tâm nhẹ với lực ly tâm 90g/5 phút/100C.
+ Thu lớp huyết tương giàu bạch tiểu cầu và loại bỏ cặn hồng cầu.
+ Ly tâm lần 2 với lực ly tâm 400g/10 phút/100C.
+ Loại bỏ phần huyết tương phía trên, thu lớp bạch cầu còn lại và
điều chỉnh nồng độ tế bào bằng huyết tương tự thân vừa tách.
Xử lý mẫu máu dây rốn
- Ly tâm đơn thuần: theo quy trình kỹ thuật tương tự như với mẫu dịch hút tủy xương, đã mô tả ở trên.
- Sử dụng dung dịch HES 6% kết hợp ly tâm: theo quy trình kỹ thuật có cải tiến theo tác giả P.Rubinstein [135] và P.Perutelli [116] (mô tả trong quy trình 4, phụ lục 3) tương tự đối với mẫu dịch tủy xương.