1. Cụng đoạn lờn men thu hồi sinh khối nấm men Saccharomyces cerevisiae
Cỏc điều kiện cụng nghệ: Nấm men sau khi lờn men cấp một và cấp 2 trong bỡnh thủy tinh được lờn men trong hệ thống lờn men cú thể tớch 100 lit với cỏc thụng số như sau: pH t 0 (C) T (h) Tốc độ cỏnh khuấy (RPM) Tỷ lệ giống (%) Mụi trường Mật độ (CFU/ml) 7,2 30 48 200 10 YPD 109
Cụng thức mụi trường YPD: Cao men 20; Pepton 40; Glucose 40; pH= 6,5
2. Cụng đoạn thủy phõn
Phương phỏp 1: 1 kg sinh khối men bia hũa vào nước đến mật độ (15% w/v) tự phõn huỷ ở nhiệt độ 500C trong 24 giờ (Suphanthasika et all, 1997). Phương phỏp này dành cho sản xuất nguyờn liệu làm thức ăn bổ sung cho chăn nuụi và nuụi trồng thủy sản.
Phương phỏp 2: Dịch lờn men chủng Saccharomyces cerevisiae1 ly tõm
8000v/phỳt, trong 20 phỳt, rửa 2 lần bằng đệm citrat photphat, pH = 5,5. Hoà cặn tế bào trong 1 lớt 4% NaOH, đun núng đến 1000C, khuấy mạnh trong 1 giờ. Để nguội ở nhiệt độ phũng, thờm 1 lớt nước lạnh để dừng phản ứng. Phương phỏp này dành cho sản xuất thực phẩm chức năng.
83
3a. Cụng đoạn thu hồi thành tế bào
Dịch tế bào đó thủy phõn ly tõm 4500 vũng trong 10 phỳt, sau đú thu lượng chất rắn, chất rắn này cú trọng lượng khoảng 35% (w/w) đú là thành tế bào nấm men, được bảo quản ở 40C cho đến khi sử dụng.
4a. Cụng đoạn tỏch chiết bờta-glucan từ thành tế bào nấm men.
Thành tế bào nấm men tiếp tục thủy phõn bằng bằng NaOH 3%, khuấy đều, sau đú chỉnh pH đến 4,5 bằng HCl đặc. Khuấy dịch ở 750C trong 2h. Để nguội, ly tõm 2000v/ph trong 10phỳt ở 40C.
Rửa 2 lần bằng cồn tuyệt đối, trộn đều trong 10ph. Ly tõm mỗi lần 3000v/ph, 10ph ở 40C.
Rửa tiếp 1 lần nữa bằng dietylete, trong 10-15ph,
5a. Thu nhận Bờta-glucan
Ly tõm 3000v/ph, thu cặn. Làm khụ cặn ở nhiệt độ phũng.