1.1. Vật liệu
Chủng Saccharomyces cerevisiae 1 là kết quả tuyển chọn từ giai đoạn
trước, Lactobacillus acidophillus (VN1); Bacillus subtilis đó được phõn lập và định tờn tại Liờn hiệp khoa học sản xuất Cụng nghệ sinh học và mụi trường -
Viện Cụng nghệ sinh học.
Men bia mua từ cỏc nhà mỏy bia. Cao nấm men, pepton, đường kớnh, Glucoza, dietyl ete, NaOH, H2SO4 và cỏc húa chất phõn tớch cần thiết đảm bảo
độ tinh sạch và đỏp ứng yờu cầu của cỏc thớ nghiệm.
Hệ thống lờn men, box cấy vụ trựng, mỏy đo OD, tủ ấm, mỏy lắc, mỏy ly tõm, nồi khử trựng, cõn điện tử và những mỏy múc cần khỏc.
Mụi trường nuụi cấy: Mụi trường YPD; Mụi trường Hansen; Mụi trường MRS; Mụi trường MPB.
1.2. Phương phỏp nghiờn cứu
Phương phỏp bảo quản giống: Cỏc chủng nấm men nghiờn cứu được giữ trong cỏc ống mụi trường Hansen thạch ngiờng, ở 40C hoặc ở -200.
Phương phỏp xỏc định tốc độ sinh trưởng
- Phương phỏp xỏc định độ đục: đo mật độ tế bào trong dịch nuụi cấy (Vũ thị
Minh Đức-2001), ở OD600nm.
- Phương phỏp xỏc định số lượng tế bào sống
Chuẩn bị mẫu: pha loóng dịch nuụi cấy bằng nước cất vụ trựng. Cấy trải dịch pha loóng lờn đĩa cú mụi trường thạch thớch hợp. Thớ nghiệm nhắc lại 3 lần dưới điều kiện vụ trựng. Nuụi ở điều kiện tối ưu cho sinh trưởng của nấm men.
Sau 2 ngày đếm số khuẩn lạc xuất hiện trờn đĩa.
Phương phỏp xỏc định nồng độ protein hũa tan: Phương phỏp Bradford, hàm
5 Phương phỏp thu thành tế bào
- Phương phỏp 1: tự phõn huỷ ở nhiệt độ 500C trong 24 giờ (Suphanthasika et all, 1997). Ly tõm thu lượng chất rắn, giữ ở 40C cho đến khi sử dụng.
- Phương phỏp 2: sử dụng 4% NaOH, ở 1000C, trong 1 giờ. Ly tõm 4000 v/phỳt trong 15 phỳt. Thu cặn (thành tế bào) và bảo quản ở 40C cho đến khi sử dụng.
Phương phỏp tỏch chiết bờta-glucan tổng số
Sử dụng NaOH 3,5%, ở 75OC trong 19 tiếng. Ly tõm thu cặn. Chiết tiếp với NaOH 3%, (pH 4,5), ở 100OC trong 1,5 tiếng. Ly tõm thu cặn. Rửa với cồn 96O, và rửa tiếp với dietyl ete. Làm khụ sản phẩm.
Phương phỏp xỏc định gốc axit amin tự do trờn hệ HP-Amino Quant series II:
theo phương phỏp của phũng Hoỏ -Sinh protein, viện CNSH
Phương phỏp xỏc định hàm lượng hexose tổng số trong mẫu glucan
Hàm lượng hexose tổng số được xỏc định dựa vào đường cong chuẩn
glucose. Xỏc định mật độ hấp phụ tối đa (OD) của mẫu ở bước súng 488nm.
Cỏc phương phỏp khảo nghiệm:
+ Đỏnh giỏ hiệu quả của chế phẩm lờn gia cầm: được thực hiện tạo Trại
thực nghiệm, Viện Cụng nghệ sinh học, Cổ Nhuế.
+ Đỏnh giỏ hiệu quả của chế phẩm lờn lợn: Thớ nghiệm được tiến hành từ
05/01/2009 đến 05/05/2009 tại Trung Tõm Nghiờn Cứu và Chuyển Giao Cụng
Nghệ Sinh Học, Viện Tài Nguyờn Mụi Trường - Đại Học Huế, thụn Ngọc Anh, xó Phỳ Thượng, huyện Phỳ Vang, tỉnh Thừa Thiờn Huế.
+ Đỏnh giỏ hiệu quả của chế phẩm lờn tụm: được thực hiện tại Trại nuụi
tụm Đỡnh Vũ, Hải Phũng.
+ Đỏnh giỏ hiệu quả của chế phẩm lờn cỏ: được thực hiện tại Viện nuụi
6