- So sánh mức độ tương đồng về ADN giữa chủng Hib từ bệnh nhi viêm màng não và chủng Hib từ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổ
4.2.2.Đỏnh giá đặc điểm gen mã hóa enzym β-lactamase của những chủng Hib phõn lập được
Chương 4 BÀN LUẬN
4.2.2.Đỏnh giá đặc điểm gen mã hóa enzym β-lactamase của những chủng Hib phõn lập được
Hib phõn lập được
Enzym β-lactamase, trung gian đề kháng ampicillin ở vi khuẩn
H.influenzae lần đầu tiên được xác định vào đầu năm 1970 và β-lactamase
loại TEM được xác định vào năm 1975. Năm 1981, Rubin và cộng sự đã báo cáo sự xuất hiện loại β-lactamase mới, sau đó được gọi là ROB-1. Cả hai loại này đều thuộc β-lactamase lớp A nằm trên plasmid có vai trò trong đề kháng ampicillin và bị ức chế có hiệu quả bởi những chất ức chế β-lactamase, như clavulanate hay sulbactum. Chủng vi khuẩn H.influenzae kháng ampicillin do β-lactamase dễ dàng được phát hiện trên lâm sàng, đó là những chủng dương tính với một trong hai loại enzym, cho kết quả MIC90 ≥ 32àg/ml đối với ampicillin và cả hai dương tính với phản ứng ly giải nitrocefin. Trên thực tế, có thể sử dụng phương pháp sinh học phân tử để xác định sự xuất hiện một trong hai enzym β-lactamase của chủng H.influenzae phân lập được (TEM-1
và ROB-1), PCR là phương pháp thường được sử dụng nhất hiện nay. Một số nghiên cứu đã phân biệt những chủng H.influenzae có β-lactamase bằng cách phân loại enzym. Trong đó, gen TEM của H.influenzae có được do sự hoán chuyển trên transposon (Tn): Tn2 và Tn3 từ những vi khuẩn họ đường ruột lên một loại plasmid "bí ẩn" (cryptic plasmid) đã thấy xuất hiện ở những loài thuộc giống Haemophilus. Đối với gen ROB, lần đầu tiên được mô tả vào
năm 1981 với một chủng Hib phân lập trên lâm sàng ở bệnh nhân viêm màng nóo. Gen ROB của H.influenzae thuộc loại ROB-1 và nằm trên một plasmid nhỏ khoảng 4,1-5,0 kb. Hầu hết những nghiên cứu cho thấy gen TEM quy định tổng hợp enzym β-lactamase của H.influenzae thuộc loại TEM-1. Farrell và cộng sự đã cho thấy tỷ lệ 93,7% TEM-1 và 4,6% ROB-1 trong một điều tra
115
toàn cầu với trên 2000 chủng H.influenzae có β-lactamase dương tính, tương tự như những nghiên cứu trước đõy. Tỷ lệ ROB-1 trong số những chủng
H.influenzae β-lactamase dương tính khác nhau rất nhiều tùy theo vị trí địa lý,
với tỷ lệ cao nhất được tìm thấy ở Mexico (30%), tiếp theo ở Mỹ (13,2%) và Canada (4,9%). Những chủng vi khuẩn H.influenzae có cả 2 enzym rất hiếm có, duy nhất một trường hợp được báo cáo trong nghiên cứu của Farrell [119].
Nghiên cứu này của chúng tôi cho thấy tỷ lệ gen quy định β-lactamase của Hib phân lập được không có sự khác biệt giữa những chủng Hib gây
viêm màng não và chủng Hib phân lập được từ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổi.
Trong đó, hầu hết gen quy định tổng hợp β-lactamase của các chủng Hib là
TEM-1 (98,0% đối với Hib gây bệnh và 95,8% đối với chủng phân lập từ trẻ khỏe mạnh) và tỷ lệ rất thấp là ROB-1 (2,0% đối với Hib gây bệnh và 4,2%
đối với chủng phân lập từ trẻ khỏe mạnh). Kết quả này cũng phù hợp với nhiều nghiên cứu về vi khuẩn H.influenzae nói chung và Hib nói riêng. Bên
cạnh đó, nghiên cứu của Karlowsky và cộng sự đối với 324 chủng
H.influenzae có β-lactamase dương tính từ những bệnh nhân nhiễm trùng
đường hô hấp dưới, cho thấy 90,7% chủng H.influenzae có gen TEM-1 và
9,3% gen ROB-1. Tương tự, nghiên cứu của Cerquetti cũng đã cho kết quả những chủng H.influenzae gây bệnh xâm hại có khả năng sinh β-lactamase
với 100% gen mã hóa enzym này thuộc loại TEM-1 [39], [65]. Ngoài ra, một nghiên cứu khác của Dabernat và cộng sự về đặc điểm những chủng
H.influenzae phân lập được từ trẻ khỏe mạnh được nuôi dưỡng tại các trung
tâm chăm sóc ban ngày ở Pháp cho thấy 100% gen mã hóa β-lactamase thuộc loại TEM-1 [41]. Vì vậy, có thể nói TEM-1 là gen mã húa enzym β- lactamase chiếm tỷ lệ hầu hết trong số những vi khuẩn H.inflenzae phân lập
được, ngược lại gen ROB-1 chiếm tỷ lệ rất thấp và phụ thuộc vào vị trí địa lý từng vùng, từng quốc gia [119].
116