p: là tỷ lệ trẻ khỏe mạnh tại các nhà trẻ, mẫu giáo có mang Hib được
2.4.Vật liệu và các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu
2.4.1. Vật liệu
2.4.1.1. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ dùng trong kỹ thuật phân lập xác định biotype vi khuẩn Hib
- Môi trường chocolate có bacitracin 300àg/ml; khoanh giấy X, V và XV (Hóng Bio-rad); tăm bông cán gỗ và thanh đè lưỡi vô trùng.
- Bộ KIT thử tính chất sinh vật hoá học Api10s (Hóng bio Mộrieux). - Huyết thanh mẫu chẩn đoán typ huyết thanh Hib (Hóng Bio-rad) - Dung dịch NaCl 0,9% vô trùng, pipett vô trùng, ống độ đục chuẩn Mc-Farland và các dụng cụ vô trùng khác.
57
2.4.1.2. Sinh phẩm, dụng cụ, hóa chất dùng để xác định khả năng sinh enzym
-lactamase của các chủng Hib và mức độ nhạy cảm với một số kháng sinh - Sử dụng các khoanh giấy thử cefinase (Hãng Becton Dickinson). - Que cấy, nước muối vô trùng, lam kớnh.
- Môi trường: Thạch Chocolate Poly Vitex (Hóng Bio-rad) - Nước muối sinh lý vô trùng (NaCl 0,9%)
- Ống độ đục chuẩn Mc - Farland. - Thanh E-test của các loại kháng sinh:
Ampicillin, ampicillin/sulbactum, cefaclor, cefotaxim, ceftriaxon, chloramphenicol, erythromycin, clarithromycin, azithromycin, rifampicin(*)
(Hóng AB Bio-Disk, Sweeden).
- Khoanh giấy kháng sinh, với các loại kháng sinh tương tự trên(*) (Hóng Bio-rad, France).
2.4.1.3. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ máy móc dùng trong kỹ thuật PCR
Sinh phẩm (Invitrogen Co. Singapore)
Các loại sinh phẩm dùng trong PCR gồm các loại như: [10],[65] - Cặp mồi để chẩn đoán gen TEM:
5' TGG GTG CAC GAG TGG GTT AC 3' và 5' TTA TCC GCC TCC ATC CAG TC 3'
- Cặp mồi để chẩn đoán gen ROB:
5' ATC AGC CAC ACA AGC CAC CT 3' và 5' GTT TGC GAT TTG GTA TGC GA 3'
- Đệm, nước khử ion.
- Enzym Taq ADN polymerase 2.5U. - dNTPs gồm : ATP, TTP, GTP, CTP. - Thang ADN mẫu dùng trong diện di gen. - MgCl2 25mM, KCl 50mM.
58
Hoá chất
Hoá chất dùng trong PCR bao gồm các loại sau : - Thạch agarose dùng trong điện di gen.
- Ethidium bromide dùng để nhuộm gen.
- TAE (Tris Acetate EDTA), PBS (Phosphate buffer saline).
Dụng cụ, máy móc phục vụ kỹ thuật PCR
- Máy li tâm lạnh (Biofuge, USA).
- Máy điều nhiệt tự động (Master Cycler - Eppendorf, Germany) - Bộ điện di ngang (Fisher Scientific, USA).
- Máy chụp ảnh gel (UVP, USA) và phim Kodak cỡ 667.
2.4.1.4. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ, máy móc dùng trong PFGE
Sinh phẩm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Dùng trong nuôi cấy vi khuẩn Hib để gặt khuẩn lạc: + Môi trường chocolate.
+ Môi trường canh thang (Tryticase soy có 5% Fildes). - Dùng trong qui trình PFGE:
+ Enzym SmaI (Toyob Co. Ltd., Osaka, Japan). + Lysozyme, Proteinase K (Sigma Co.,)
+ Dung dịch ly giải vi khuẩn và một số sinh phẩm khác (Sigma Co.,).
Hoá chất
- Thạch incert agarose (Cambrex Bio science, Rockland Inc. USA). - Thạch gold agarose (Cambrex Bio science, Rockland Inc. USA). - Ethidium bromide dùng để nhuộm các đoạn ADN.
- Dung dịch EDTA (Merk Co. Germany)
- Dung dịch Pett IV (tự pha với các hóa chất gốc).
- Dung dịch ES (tự pha với các hóa chất gốc như EDTA). - Dung dịch Tris-HCl 1M (Invitrogen Co.,).
59
- Dung dịch BSA 0,1%.
- Brij 58, Sarcosine, PMSF (Phenylmethylsulfonylfloride), lauryl (Sigma Co.,).
Dụng cụ, máy móc phục vụ cho kỹ thuật PFGE
- Dàn máy PFGE: CHEF Mapper system của Hãng BIO-RAD.
- Máy ảnh chụp gel (UPV, USA) và phim Kodak cỡ 667 và một số dụng cụ khác.