2.1. Đối tượng nghiên cứu
- 102 chủng vi khuẩn Hib phân lập được từ dịch não tuỷ của những
bệnh nhi mắc viêm màng nóo dưới 5 tuổi nhập Viện Nhi Trung ương từ tháng 1/2001 đến tháng 5/2007.
- Tất cả (52) chủng Hib phân lập được từ bệnh phẩm dịch ngoáy họng những trẻ khỏe mạnh chăm sóc tại một số nhà trẻ, mẫu giáo được điều tra.
53
- Tiêu chuẩn lựa chọn các chủng Hib [19], [43], [89], [127]
Tất cả các chủng vi khuẩn có đặc điểm sinh học sau:
+ Vi khuẩn bắt màu Gram (-), đa hình thái, có thể ở dạng cầu trực khuẩn, trực khuẩn hoặc dài mảnh như sợi chỉ và cú kớch thước nhỏ.
+ Vi khuẩn phát triển chọn lọc trờn mụi trường chocolate, không mọc trên thạch thường. Đòi hỏi bắt buộc phải có cả hai yếu tố phát triển là X và V.
+ Ngưng kết đặc hiệu với kháng huyết thanh Hib.
2.2. Địa điểm nghiên cứu
- Phòng Vi khuẩn Hô hấp, Khoa Vi khuẩn - Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương.
- Khoa Vi sinh, Khoa Truyền nhiễm - Bệnh viện Nhi Trung ương. - Một số nhà trẻ, mẫu giáo tại Hải Dương và Hà Tây (nay thuộc Hà Nội). Thời gian tiến hành nghiên cứu từ 7/2006 đến 10/2009.
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Thiết kế nghiên cứu
Trong đề tài này chúng tôi sử dụng phương pháp: Nghiờn cứu mô tả cắt ngang có phõn tích.
2.3.2. Nội dung các bước nghiên cứu
2.3.2.1. Đối với những chủng Hib phân lập từ trẻ bệnh:
Toàn bộ 102 chủng Hib gõy bệnh viêm màng nóo được phõn tích theo các bước sau đõy:
- Xác định biotype, khả năng sinh enzym β-lactamase, gen mã hóa tổng hợp enzym β-lactamase.
- Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) và mức độ nhạy cảm với một số kháng sinh thông dụng theo phương pháp E-test (Mục đích của phần nghiên cứu này nhằm cung cấp những thông tin về mức độ nhạy cảm với kháng sinh và nồng độ ức chế tối thiểu của mỗi kháng sinh đối với Hib gõy
54
viêm màng nóo. Qua đõy, kết quả nghiên cứu sẽ giúp ích cho các bác sỹ lõm sàng trong công tác điều trị).
- Phõn tích cấu trúc ADN của Hib dựa trên phương pháp PFGE để xác định phõn loại genotype.
2.3.2.2. Đối với các chủng Hib phân lập từ nhóm trẻ khoẻ mạnh:
Để xác định tỷ lệ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổi mang Hib, chúng tôi thu
thập đối tượng trẻ dựa theo những tiêu chuẩn sau đõy:
- Địa điểm nghiên cứu chúng tôi lựa chọn 01 tỉnh với số trẻ viêm màng nóo do Hib được nhập Viện Nhi Trung ương với tỷ lệ cao và 01 tỉnh với số trẻ viêm màng nóo do Hib được nhập Viện Nhi Trung ương với tỷ lệ thấp.
Vì vậy, chúng tôi chọn một số nhà trẻ, mẫu giáo tại Hà Tây (nay thuộc Hà Nội) và Hải Dương dựa trên cơ sở kết quả nghiên cứu về tình hình viêm màng nóo do Hib ở trẻ dưới 5 tuổi tại Viện Nhi Trung ương năm 2002 (số
lượng trẻ dưới 5 tuổi viêm màng nóo do Hib nhập viện được đưa đến từ Hà
Tây (nay thuộc Hà Nội) chiếm tỷ lệ lớn nhất, trái lại không có bệnh nhi viêm màng nóo do Hib được nhập viện đến từ Hải Dương) [phụ lục 2-mục 1]. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Những nhà trẻ điều tra được lựa chọn chủ đích và dựa trên nguyên tắc: 1/2 số nhà trẻ - mẫu giáo ở vùng nông thôn và 1/2 ở vùng thành phố với số lượng trẻ tương đương nhau.
- Tiến hành thăm khám tai - mũi - họng và tình trạng của trẻ trước khi thực hiện lấy bệnh phẩm ngoáy họng. Lựa chọn trẻ đang được chăm sóc tại nhà trẻ - mẫu giáo dưới 5 tuổi theo 4 nhóm tuổi: dưới 24 tháng tuổi, 24 - 35 tháng tuổi, trên 36 - 47 tháng tuổi, trên 48 - 59 tháng tuổi (mỗi nhóm có số trẻ tương đương nhau), thỏa mãn điều kiện [25], [76]:
+ Trẻ chưa được tiêm vacxin phòng Hib.
+ Trẻ không có tiền sử mắc bệnh nhiễm trùng đường hô hấp và không có tiền sử điều trị kháng sinh 15 ngày trở lại.
55
Để lựa chọn được chính xác đối tượng trẻ khỏe mạnh trong nghiên cứu này, chúng tôi dựa trên phiếu điều tra về tình trạng của trẻ sau khi các bậc cha mẹ đã hoàn tất những thông tin của phiếu [phụ lục 2, mục 2].
+ Số trẻ nghiên cứu được tính theo công thức cỡ mẫu của phương pháp nghiên cứu ước lượng tỷ lệ mắc trong quần thể:
Trong đó: