- So sánh mức độ tương đồng về ADN giữa chủng Hib từ bệnh nhi viêm màng não và chủng Hib từ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổ
4.1.4.Đánh giá vai trò gây bệnh của các biotype vi khuẩn Hib
Chương 4 BÀN LUẬN
4.1.4.Đánh giá vai trò gây bệnh của các biotype vi khuẩn Hib
Hiện nay, nhiều nghiên cứu đã đỏnh giá độc lực của vi khuẩn
H.influenzae nói chung và Hib nói riêng. Cụ thể, nghiên cứu của Kimberly
Martin và cộng sự đã đánh giá được vai trò độc lực của những chủng
H.influenzae gây bệnh có chứa gen mã hóa enzym tryptophanase. Tác giả Kimberly Martin đã báo cáo có khoảng 94 - 100% những chủng H.influenzae gõy các bệnh nhiễm trùng nghiêm trọng, bao gồm viêm màng nóo đều có enzym tryptophanase [73]. Xem xét về khía cạnh độc lực này, đối với nghiờn cứu của chúng tôi những chủng Hib gây viêm màng nóo cho thấy biotype chủ yếu tập trung ở typ II (70,6%), typ I (16,7%), typ III (8,8%), typ IV (2,9%) và typ V (1,0%), tức là số chủng Hib gõy viêm màng nóo có khả năng sinh
tryptophanase trong nghiên cứu này chiếm 88,3% (còn lại typ III, IV không có enzym tryptophanase chiếm 11,7%). Kết quả này cũng tương tự với nghiên cứu của Toshihiro Mitsuda tại Nhật Bản, Tamago tại Cuba và Casagrande tại
109
Brazil cũng cho thấy phần lớn những chủng Hib gõy viêm màng nóo có tỷ lệ sinh enzym tryptophanase (93,3% - 99,2%) [27], [68], [113] phù hợp với nghiên cứu của tác giả Kimberly Martin cùng cộng sự [73]. Bên cạnh đó, đối với 52 chủng Hib phõn lập từ trẻ khỏe mạnh, chúng tôi thấy có 41 chủng
(78,8%) có khả năng sinh sinh tryptophanase (thuộc biotype I, II và V). Vì vậy, theo Kimberly Martin và cộng sự thì đõy có thể là nguồn bệnh (reservoir) quan trọng trong cộng đồng.
Phương pháp phân loại H.influenzae theo biotype được dựa vào khả năng sinh enzym urease, ornithin decarboxylase và trytophanase của vi khuẩn này. Do vậy, tùy theo khả năng sản xuất những enzym này, chủng
H.influenzae được phân loại vào nhiều biotype khác nhau. Nghiên cứu của
Kimberly Martin đã khẳng định được vai trò độc lực của những chủng
H.influenzae có liên quan đến enzym tryptophanase do đó xác định được vị trí
và cấu trúc gen quy định enzym này nằm trên bản đồ gen của vi khuẩn Hib.
Gen mó hoỏ tổng hợp tryptophanase của H.influenzae được ký hiệu là tna.
Trong đó, gen tna nằm trong một cụm gen và cụm gen này cũng được xác
định là một vùng tương ứng ở vị trí 61 phỳt trờn bản đồ gen của E. coli. Đõy là một vùng bảo tồn cao chứa một nhúm gen (pcm, surE, nlmD và rpoS) đóng vai trò giúp cho vi khuẩn có khả năng sống sót trong giai đoạn dừng tối đa củaquá trình phát triển và bảo vệ vi khuẩn tồn tại được dưới những áp lực của các chất oxy hoá. Ngoài ra, cụm gen tna nằm giữa hai đoạn ADN có trình tự lặp lại nhau của một USS (uptake signal sequence) (hình 4.1). Do vậy, cụm gen tna có thể truyền giữa các vi khuẩn với nhau theo cơ chế của một
transposon và làm thay đổi biotype của những chủng vi khuẩn H.influenzae
nhận được gen này. Ngoài ra, vai trò độc lực của enzym urease cũng đã được nghiên cứu và đỏnh giá một cách rõ ràng ở nhiều loài vi khuẩn như: Proteus mirabilis, Helicobacter pylori và giống Yersinia [29], [40], [49], [62]. Cụ thể,
110
một số nghiên cứu về sinh bệnh học của vi khuẩn cũng đã chứng minh sự xuất hiện của urease có vai trò làm thay đổi khả năng miễn dịch và làm tăng pH của môi trường tại vị trí nhiễm trùng của vi khuẩn. Enzym này có khả năng thủy phân urờ để tạo thành hợp chất amonia (NH3) và carbonic (CO2). Trong đó, NH3 làm kiềm hóa nước tiểu giúp cho Proteus dễ dàng gây bệnh và trung hòa dịch vị giúp cho Helicobacter pylori xâm nhập gây viêm dạ dày. Thêm
vào đó, một số nghiên cứu khác cũng cho thấy amonia là một chất độc với cơ thể, chất này có tác dụng làm tổn thương mụ nờn tạo điều kiện cho vi khuẩn gây ra các nhiễm trùng xâm hại [29], [40], [49], [62].
Vì vậy, vai trò độc lực của vỏ PRP kết hợp với hai yếu tố độc lực tryptophanase và urease ở các chủng Hib thuộc biotype I, II đã giải thích lý do vì sao tỷ lệ gây bệnh của Hib lại thuộc về hai typ này nhiều hơn so với các typ khác không có cả hai enzym này.
Hình 4.1: Bản đồ của vựng chốn tna thể hiện ở các vị trớ trờn Rd genome của vi khuẩn H. influenzae, tại đó đoạn ADN tna được chèn vào những vị trí cắt của các enzym giới hạn [73].
111