5. Những đóng góp mới của luận án
2.5.3.2. Phương pháp đánh giá các chỉ tiêu phẩm chất gạo của các giống lúa
* Chỉ tiêu về chất lượng gạo:
- Tỷ lệ gạo xay và gạo xay xát tính theo % khối lượng của thóc.
- Chiều dài hạt gạo: phân loại theo 10 TCN 558 - 2002. Bảng 2.4. Phân loại gạo dựa vào chiều dài hạt
Loại hạt Chiều dài hạt (mm)
Loại hạt rất ngắn < 4,50
Loại hạt ngắn 4,51 – 5,50
Loại hạt trung bình 5,51 – 6,50
Loại hạt dài 6,51 – 7,50
Loại hạt rất dài > 7,5
- Chiều rộng hạt gạo: Phân loại theo 10 TCN 558 - 2002. Bảng 2.5. Phân loại gạo dựa vào chiều rộng hạt
Loại hạt Chiều rộng hạt (mm)
Hẹp < 2,5
Trung bình 2,5 – 3,0
Rộng > 3,0
46
Bảng 2.6. Phân loại gạo dựa vào hình dạng hạt gạo theo tỷ lệ Dài/Rộng
Dạng hạt Dài/Rộng Tròn < 1,5 Bán tròn 1,5 – 1,99 Bán thon 2,0 – 2,49 Thon 2,5 – 2,99 Thon dài > 3,0
- Độ bạc bụng: Cho điểm theo 10 TCN 425 - 2000
Bảng 2.7. Phân loại gạo dựa vào độ bạc bụng của hạt
Thang điểm Mô tả Diện tích hạt bị
trắng bạc (%) 0 Hoàn toàn trong
(Không có vết bạc nào) 0 1 Hạt bạc rất nhỏ < 10 2 Hạt hơi bạc 10 – 20 3 Hạt bạc trung bình 21 – 35 4 Hạt bạc 36 – 50 5 Hạt rất bạc > 50
* Các chỉ tiêu sinh hóa:
- Xác định hàm lượng protein: Theo phương pháp Bradford.
+ Hạt lúa được bóc vỏ, sau đó được nghiền mịn thành bột trong cối sứ. + Cân 10 mg bột, bổ sung 300 µl đệm Hirata, vontex mẫu và ủ qua đêm ở 40C.
+ Ly tâm mẫu 15.000 vòng/phút trong 15 phút ở 40C, loại bỏ kết tủa.
+ Lấy 4 µl dịch nổi bổ sung thêm 200 µl thuốc nhuộm Bradford 1X, trộn đều rồi đem đo ở bước sóng 595 nm trên máy quang phổ Biomate 3 của hãng Thermo. Mẫu trắng là đệm Hirata.
+ Dựng đường chuẩn theo kit của hãng BioRad với các thang nồng độ 0,25; 0,5; 0,75; 1; 1,25; 1,34 mg/ml.
47
+ Hàm lượng protein được tính dựa trên đường chuẩn.
- Độ bền gel: Theo TCN 424 - 2000.
+ Hạt lúa được bóc vỏ, sau đó được nghiền mịn thành bột trong cối sứ. + Cân 100 mg bột cho vào ống nghiệm có kích thước (chiều cao × đường kính): 100×13 mm.
+ Bổ sung 0,2 ml ethanol 95% có chứa 0,025% Thymol blue để cản trở sự vón cục do hồ hóa và tạo màu để dễ quan sát, trộn đều mẫu.
+ Bổ sung thêm 2 ml 0,2N KOH, trộn đều mẫu.
+ Ống nghiệm chứa mẫu được đun sôi trong 8 phút sau đó để nguội 5 phút ở nhiệt độ phòng, rồi làm lạnh trong nước đá 20 phút.
+ Đặt ống nghiệm nằm ngang trên mặt bàn cho gel chảy đều. Để gel đông sau 60 phút, tiến hành đo.
+ Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
- Độ trở hồ: Theo TCNVN 5715:1993 [27].
Hạt lúa được bóc vỏ, sau đó cho vào mỗi đĩa petri nhựa 10 hạt và mỗi giống được tiến hành thí nghiệm trên 2 đĩa Petri nhựa. Bổ sung 10 ml KOH 1,7%, rồi dàn đều các hạt lúa trên bề mặt đĩa. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 23 giờ. Phân tích mẫu bằng mắt thường.
Bảng 2.8. Phân loại hạt gạo dựa vào độ trở hồ
Đặc điểm hạt gạo Cấp độ trở hồ
Hạt không bị ảnh hưởng 1
Hạt phồng lên 2
Hạt phồng lên rìa hẹp không rõ 3
Hạt phồng lên rìa rộng và rõ 4
Hạt bị tách rời, rìa rộng và rõ 5
Hạt tan và kết với rìa 6
Hạt tan hoàn toàn và hòa lẫn vào nhau 7
48
- Hạt lúa được bóc vỏ và nghiền mịn trong cối sứ. Cho 100 mg mẫu nghiền vào ống nghiệm 50 ml, bổ sung 4 ml Dimethylsulfoxide 90%. Trộn đều và ủ mẫu ở 850C trong 15 phút để hòa tan hết amylose, để nguội ở nhiệt độ phòng. Chỉnh thể tích đến 10 ml bằng nước cất 2 lần. Hút 1 ml chuyển qua bình tam giác 250 ml. Bổ sung thêm 20 ml nước cất 2 lần và lắc đều bằng tay. Sau đó, bổ sung tiếp 5 ml dung dịch KI + I2 (0,0065 M KI/0,0025 M I2), lắc đều để phát triển màu trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. Hút 1 ml đem đo ở bước sóng 600 nm. Mẫu trắng được tiến hành song song nhưng không có hòa tan mẫu.
- Đường chuẩn amylose được tiến hành như trên với các thang nồng độ 10%; 20%; 40%; 60%; 80%; 100%
- Hàm lượng amylose mẫu được tính theo đường chuẩn.