Dạng cơng thức cấu tạo phosphatidylinositol (PI):
Từ phổ HRMS, các dạng phân tử PI của lồi rong biển Lobophora sp. đều cho thấy sự hình thành của các ion mang điện tích âm [M-H]-. Ngồi ra, sự phân mảnh MS2- của các ion [M-H]- cũng cho thấy sự hiện diện của một số ion đặc trưng.
Ví dụ, PI 34:1 cĩ hàm lượng cao nhất 44,09% (bảng 4.11).
Trên phổ ion [M-H]- (hình 4.6 a,b) cĩ tín hiệu mạnh nhất tại giá trị m/z
835,5283 tương ứng cơng thức ion là [C43H79O13P]- (phần mềm tính tốn m/z
835,5221, sai số 0,0062). Ion âm [M-H]- được lựa chọn để bắn phá tiếp MS2-. Trên phổ MS2- của PI 34:1 chứa các tín hiệu tương ứng với ion bán phân tử cĩ inositol, nhĩm acyl và anion carboxylate của axit béo đã bị mất đồng thời (hình 4.6c).
Bảng 4.11. Các dạng phân tử phosphatidylinositol (PI)
Rt (phút) PL (C:N)* Diacyl [M-H]- CTPT Diện tích % trong PI
19,7 PI 30:0 14:0/16:0 781,4797 C39H75O13P 3210750 1,81 19,76 PI 32:2 14:0/18:2 805,483 C41H75O13P 1457903 0,82 19,52 PI 32:1 14:0/18:1 807,4966 C41H77O13P 11094249 6,27 16:0/16:1 19,31 PI 32:0 16:0/16:0 809,5144 C41H79O13P 4234623 2,39 19,52 PI 34:3 16:0/18:3 831,4957 C43H77O13P 4599243 2,60 19,34 PI 34:2 16:0/18:2 833,512 C43H79O13P 15526729 8,77 19,04 PI 34:1 16:0/18:1 835,5283 C43H81O13P 78034148 44,09 19,49 PI 36:5 16:0/20:5 855,4971 C45H77O13P 2486718 1,40 19,25 PI 36:4 16:0/20:4 857,5103 C45H79O13 P 27318082 15,43 18,83 PI 36:3 16:0/20:3 859,5269 C45H81O13P 21482709 12,14 Chưa xác định 7557317 4,27 Tổng 177002471 100,00
Sự phân mảnh m/z 297,0334 là ion bán phân tử cĩ inositol [C9H14O9P]- bị mất hai nhĩm acyl, sự phân mảnh này rất quan trọng trong việc xác định các dạng phân tử của PI. Các tín hiệu tại m/z 255,2338 tương ứng với anion của axit béo 16:0 [C16H31O2]-, m/z 281,2471 tương ứng với anion của axit béo 18:1 [C18H33O2]-, m/z 391,2226 là tín hiệu khi ion [M-H]- bị mất đồng thời phân tử axit béo 18:1 m/z 282,2469 [C18H34O2] và inositol m/z 162,0588 [C6H10O5], tín hiệu m/z 409,2304 là mảnh ion [C19H38O7P]- thu được khi ion [M-H]- bị mất đồng thời phân tử keten của axit béo 18:1 m/z 264,2391 [C18H32O] và inositol 162,0588 [C6H10O5], m/z
417,2373 là tín hiệu của ion [C21H38O6P]- khi [M-H]- bị mất đồng thời phân tử axit béo 16:0 m/z 256,2362 [C16H32O2] và inositol m/z 162,0588 [C6H10O5], m/z
553,2744 [C25H46O11P]- là tín hiệu của ion [M-H]- bị mất phân tử axit béo 18:1 [C18H34O2], m/z 571,2832 [C25H48O12P]- là tín hiệu của ion [M-H]- bị mất phân tử keten của axit béo 18:1 [C18H32O] và m/z 579,2906 [C27H48O11P]- là tín hiệu của ion [M-H]- sau khi mất phân tử axit béo 16:0 [C16H32O2]. Dữ liệu phổ khối đã chứng minh dạng phân tử đang xét là diacyl glycerophosphoinositol PI 16:0/18:1. Kiểm tra trên GC, GC-MS thành phần axit béo trong lipid tổng và phân đoạn lipid phân cực là PI 16:0 /18:1n-9.
Hình 4.6. HPLC-HRMS và sự phân mảnh của PI 34:1 [C43H79O13P]-. (a) Sắc kí đồ HPLC của [C43H79O13P]-, (b) Phổ khối (MS-) của [C43H79O13P]-,
Bằng cách tương tự như vậy chúng tơi đã xác định được 13 dạng phân tử cịn lại của PI trong bảng 4.8 (xem mục 3.4.2.4 ).