+ Tăng sinh sơ bộ trong môi trường lỏng không chọn lọc.
Bổ sung dung dịch đệm pepton ở nhiệt độ phòng vào ống mẫu có chứa môi trường vận chuyển Carry Blaird, sau đó ủ ở (36 ± 2)0C trong (18 ± 2) giờ.
+ Tăng sinh trong môi trường lỏng chọn lọc.
chọn lọc, sau đó dùng pipet vô trùng hút 0,1ml dịch tăng sinh cho vào 10 ml môi trường Rappaport-Vassiliadis (RVS) và hút 1ml dịch tăng sinh cho vào 10 ml môi trường Muller Kauffmann tetrathionate-novobiocin broth (MKTTn)
Môi trường RVS được ủ ở bể điều nhiệt (41.5 ± 1)0C trong (24 ± 3) giờ và môi trường MKTTn được ủ ở tủ ấm (37 ± 1)0C trong (24 ± 3) giờ. Canh trùng đục đều, trên mặt môi trường có màng mỏng, đáy ống nghiệm có cặn.
Hình 3.5. Salmonella trên môi trường MKTTn và RVS
+ Đỗ đĩa và nhận dạng.
Lắc đều các ống nghiệm chứa môi trường RVS và MKTTn, sau đó dùng que cấy vòng cấy dịch tăng sinh thu từ môi trường lỏng tăng sinh chọn lọc vào hai môi trường đặc chọn lọc: Môi trường Xylose lysine deoxycholate agar (XLD agar) và môi trường Hektoen Enteric agar (HE agar). Thạch XLD và HE được ủ ở (37 ± 1)0C trong (24 ± 3) giờ. Sau thời gian ủ, quan sát khuẩn lạc trên các môi trường
- Môi trường XLD: Khuẩn lạc tròn, lồi, trong suốt, có hay không có tâm đen, đôi khi tâm đen quá lớn bao trùm khuẩn lạc, môi trường xung quanh chuyển sang màu hồng
- Môi trường HE: Khuẩn lạc có màu thay đổi từ xanh dương đến xanh lục, có hay không có tâm đen, đôi khi tâm đen quá lớn bao trùm khuẩn lạc.
+ Khẳng định Salmonella
Qua các bước tiền tăng sinh, tăng sinh chọn lọc và phân lập thì tế bào
Salmonella bị già và suy thoái, vì vậy cần phải phục hồi chúng trong các môi trường thạch dinh dưỡng để nhân sinh khối. Từ mỗi môi trường phân lập cấy chuyển ít nhất 5 khuẩn lạc đặc trưng qua môi trường dinh dưỡng như TSA, hoặc
RVS MKTTn
Nutrient Agar. Ủ ở 370C trong 18 – 24 giờ. Dùng sinh khối trên môi trường dinh dưỡng này để thử phản ứng sinh hóa và huyết thanh.