Phần 3 Nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu
3.3. Nguyên liệu và phƣơng pháp nghiên cứu
3.3.2. Bố trí thí nghiệm
3.3.2.1. Thí nghiệm đánh giá độc lực của virus trên gà bằng phương pháp công cường độc qua đường tiêm tĩnh mạch
- Sử dụng 15 con gà 3-4 tuần tuổi,âm tính với virus cúm và huyết thanh âm tính với kháng thể cúm .
Bảng 3.1. Bố trí thí nghiệm kiểm tra độc lực virus qua tiêm tĩnh mạch
Nhóm gà Số con Liều tiêm Ghi chú
Đối chứng G1 5 100µl PBS/con Nuôi cách ly 2 lô thí nghiệm
Thí nghiệm G2 10 106 TCID50 (100µl/con)
-Theo dõi gà thí nghiệm 10 ngày, chấm điểm lâm sàng 2 lô gà thí nghiệm, ghi chép lại các triệu chứng , bệnh tích, tỷ lệ chết.
- Lấy mẫu swab hầu họng và swab hậu môn vào các thời điểm 1, 2, 3 …10 ngày sau công cƣờng độc hoặc cho đến khi gà chết.
- Xét nghiệm virus bài thải bằng phƣơng pháp realtime RT-PCR. - Gà sống sót sau công cƣờng độc tiến hành lấy máu và kiểm tra HI. - Tính thời gian chết trung bình Mean Death Time.
3.3.2.2. Thí nghiệm đánh giá độc lực của virus trên gà bằng phương pháp công cường độc qua đường nhỏ mũi
- Sử dụng 15 con gà 3-4 tuần tuổi, âm tính với virus cúm và huyết thanh âm tính với kháng thể cúm.
- Bố trí thí nghiệm theo bảng sau:
Bảng 3.2. Bố trí thí nghiệm kiểm tra độc lực virus qua đƣờng nhỏ mũi
Nhóm gà Số con Liều nhỏ mũi Ghi chú
Đối chứng G1 5 100µl PBS/con
Nuôi cách ly 2 lô thí nghiệm Thí nghiệm G2 10 106 TCID50 (100µl/con)
-Theo dõi gà thí nghiệm 10 ngày, ghi chép lại các triệu chứng , bệnh tích, tỷ lệ chết.
- Lấy mẫu swab hầu họng và swab hậu môn vào các thời điểm 1, 2….10 ngày sau công cƣờng độc hoặc cho đến khi gà chết.
- Xét nghiệm virus bài thải bằng phƣơng pháp realtime RT-PCR. - Gà sống sót sau công cƣờng độc tiến hành lấy máu và kiểm tra HI.
3.3.2.3. Thí nghiệm đánh giá hiệu lực vacxin
Sử dụng 100 gà 3 tuần tuổi có huyết thanh âm tính với virus cúm gia cầm, đƣợc chia thành 4 lô: 3 lô đƣợc tiêm vacxin và 1 lô đối chứng không đƣợc tiêm vacxin. Bố trí thí nghiệm cụ thể theo bảng nhƣ sau:
Bảng 3.3. Bố trí thí nghiệm kiểm tra hiệu lực vacxin Nhóm gà Số lƣợng Liều tiêm vacxin Ghi chú Nhóm gà Số lƣợng Liều tiêm vacxin Ghi chú
Navet-vifluvac 30 0,5 ml 0,3 ml 0,3 ml Nuôi cách ly các lô gà thì nghiệm Re-5 30 Re-6 30
Đối chứng 10 Không tiêm vacxin
- Gà của từng lô đƣợc tiêm vacxin tƣơng ứng vào lúc 3 tuần tuổi. Vị trí tiêm: dƣới da cổ; liều lƣợng theo nhƣ hƣớng dẫn của nhà sản xuất, cụ thể: 0,5 ml/liều/gà đối với vacxin Navet-vifluvac , 0,3 ml/liều/gà đối với vacxin Re-5 và Re-6.
- Ba tuần sau khi tiêm vacxin, gà đƣợc lấy máu và hiệu giá kháng thể kháng cúm H5 đƣợc đánh giá bằng phƣơng pháp HI với các loại kháng nguyên tƣơng đồng với chủng vacxin.
- Mỗi lô vacxin chon 10 gà làm thí nghiệm công cƣờng độc, gà không đƣợc chọn ngẫu nhiên mà đƣợc chọn theo tỷ lệ phân bố các mức kháng thể, sao cho số gà đƣợc chọn là đại diện cho cả nhóm gà tiêm vacxin.
- Tiến hành công cƣờng độc lúc 6 tuần tuổi. Lƣợng virus dùng để công cƣờng độc: 106TCID50/100≤µl/con. Đƣờng gây nhiễm là nhỏ mũi đối với các nhóm vacxin và đối chứng.
- Quan sát gà thí nghiệm, theo dõi lâm sàng trong vòng 10 ngày sau khi gây nhiễm, lấy mẫu swabs họng vào ngày thứ 3 và thứ 10 hoặc khi gà chết để định lƣợng virus bài thải bằng phƣơng pháp rRT-PCR. Đối với gà chết, mổ khám để đánh giá bệnh tích đại thể, lấy mẫu làm tiêu bản vi thể.