1.4. CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH
1.4.2. Phƣơng pháp phân tích hàm lƣợng carbohydrat tổng sau thủy phân
thủy phân [48]
Lấy 200 µL dung dịch cần xác định có hàm lƣợng carbohydrate trong khoảng 20-100 µg/mL, thêm vào 200 µL thuốc thử phenol 5 % lắc đều đến khi dung dịch trở nên trong suốt, thêm tiếp 1 mL axít sulfuric đậm đặc lắc đều rồi đem đun cách thủy trong thời gian 5 phút, lấy ra để nguội, đo độ hấp thụ quang ở bƣớc sóng λ = 490 nm, sử dụng glucose làm chất chuẩn.
1.4.3. Phƣơng pháp phân tích trọng lƣợng phân tử của oligo carrageenan
1.4.3.1. Bằng nhớt kế [12]
Carrageenan dạng mạch phân tử ngắn (oligo carrageenan) có thể thu đƣợc nhờ thuỷ phân Carrageenan bằng axit hoặc enzyme. Việc kiểm tra mức độ cắt mạch của Carrageenan có thể thực hiện thông qua việc xác định khối lƣợng phân tử của Carrageenan.
Khối lƣợng phân tử của Carrageenan đƣợc xác định bằng phƣơng pháp đo độ nhớt, nhờ sử dụng hệ thức Mark - Houvvink: [η] = K.Mα
Trong đó:
K, α : Các hằng số phụ thuộc vào bản chất của dung môi và nhiệt độ. M: Khối lƣợng phân tử Carrageenan.
C: Nồng độ Carrageenan trong dung dịch (g/100 mL).
[η]: Độ nhớt đặc trƣng, là giới hạn của độ nhớt rút gọn (ηr/C) khi nồng độ của dung dịch tiến tới 0. [η] = lim (ηr/C) C → 0
Ở đây ηr là độ nhớt riêng, tỷ số giữa hiệu số thời gian chảy của dung dịch Carrageenan (t) và thời gian chảy của dung môi (t0) với thời gian chảy của dung môi trong mao quản: ηr = (t – t0)/t0
Cụ thể cần pha chế các dung dịch Carraạeenan và oligo carrageenan có nồng độ khác nhau. Sau đó xác định thời gian chảy của dung môi và của các dung dịch này trong nhớt kế Ubêlôt để xác định độ nhớt riêng ηr
Lập đồ thị mối quan hệ giữa ηr /C và nồng độ (C), bằng phƣơng pháp ngoại suy trên đồ thị ta thu đƣợc giá trị độ nhớt đặc trƣng.
Với các giá trị K và α đặc trƣng đã biết, ta sẽ xác định đƣợc khối lƣợng phân tử trung bình của Carrageenan và oligo carageenan
Phƣơng pháp đo độ nhớt là phƣơng pháp đơn giản về mặt thực nghiệm, đồng thời cho phép xác định khối lƣợng phân tử trong khoảng lớn (M khoảng 104 đến 106 Da).