1.4. CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH
1.4.3.2. Sắc ký rây phân tử
Sắc ký rây phân tử là phƣơng pháp chia tách các phân tử trong dung dịch dựa trên kích thƣớc của chúng. Trong trƣờng hợp pha động là một dung môi hữu cơ, kỹ thuật đƣợc gọi là sắc ký thấm qua gel (GPC), còn trƣờng hợp pha động là nƣớc thì kỹ thuật đƣợc gọi là sắc ký lọc trên gel (GFC).
Mẫu đƣợc đƣa vào cột chứa đầy gel hoặc một loại vật liệu xốp, và đƣợc pha động dẫn chạy qua cột. Sự chia tách theo kích thƣớc đƣợc thực hiện nhờ sự trao đổi lặp đi lặp lại các phân tử chất tan giữa dung môi pha động và cùng dung môi đó đƣợc pha tĩnh giữ ở trong các lỗ xốp của gel. Khoảng kích thƣớc lỗ của vật liệu nhồi trong cột sẽ xác định khoảng kích thƣớc phân tử đƣợc chia tách qua quá trình sắc ký.
Những phân tử có kích thƣớc đủ nhỏ để có thể đi vào trong tất cả khoảng không gian của lỗ xốp và đƣợc rửa giải trong tổng thể tích thấm Vt.
Các phân tử có kích thƣớc lớn hơn kích thƣớc lỗ xốp lớn nhất chỉ di chuyển đƣợc dọc theo cột qua các khoảng trống giữa các hạt vật liệu nhồi mà không bị giữ lại, đƣợc rửa giải trong thể tích loại trừ Vo (thể tích trống). Sự chia tách theo kích thƣớc phân tử xảy ra giữa thể tích trống và tổng thể tích thấm, chia tách hiệu quả thƣờng đƣợc thực hiện ở hai phần ba đầu tiên của khoảng này.
Xây dựng một đồ thị biểu thị sự phụ thuộc giữa thể tích lƣu của các chất chuẩn dùng cho hiệu chuẩn và hàm logarit của khối lƣợng phân tử của chúng. Đƣờng chuẩn thƣờng xấp xỉ với một đƣờng thẳng nằm giữa giới hạn loại trừ và giới hạn thấm tổng thể. Khối lƣợng phân tử của thành phần quan tâm có thể đƣợc ƣớc lƣợng từ đƣờng chuẩn.
Trong nghiên cứu của mình, Myslabodski và cộng sự [17] đã sử dụng phƣơng pháp GPC kết hợp với tán xạ ánh sáng để xác định trọng lƣợng phân tử trung bình của kappa carrageenan, kết quả cho thấy ở 78 0C, pH=5,8 và thời gian 64 phút thì thu đƣợc carrageenan có Mw là 473 kDa, khi tăng nhiệt độ lên 84 0C và giảm pH xuống còn 3,1 trong thời gian thủy phân nhanh hơn, 24 phút, thì trọng lƣợng phân tử giảm còn 76 kDa.