6. Bố cục của luận án
2.4.4. Khảo sát hoạt tính sinh học của dịch chiết rễ cây mật nhân
Quy trình khảo sát hoạt tính sinh học trên đối tượng dịch chiết rễ cây mật nhân từ các dung môi chiết là nước và ethanol 80 % được thực hiện tại các phòng thí nghiệm của Trung tâm kỹ thuật tiêu chuẩn đo lường chất lượng 2 – Tổng cục tiêu chuẩn đo lường chất lượng, Trung tâm kiểm nghiệm dược phẩm, mỹ phẩm – Sở Y tế tỉnh Thừa Thiên Huế, Trường đại học bách khoa – Đại học Đà Nẵng và Viện sinh học – Viện hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam. Các phương pháp cụ thể sau:
- Khả năng gây độc tế bào ung thư cytotoxic assay trên các dòng tế bào ung thư
MKN7 dạ dày , SW626 buồng trứng , SK-Mel-2 da , NIH/3T3 nguyên bào sợi của gốc phôi chuột KB biểu mô , Hep-G2 (gan), LU-1 vú , MCF7 phổi được xác định dựa theo phương pháp đối với tế bào nuôi cấy dạng đơn lớp Khả năng gây độc tế bào ung thư trên dòng tế bào ung thư HL-60 bạch cầu được xác định dựa theo phương pháp đối với các dòng tế bào nuôi cấy hỗn dịch [29] [30].
- Hoạt tính kháng viêm thông qua khảo sát cytokine tiền viêm và cytokine gây
viêm được xác định dựa theo phương pháp nghiên cứu của Wansu Park và cộng sự năm 2012 [33].
- Khả năng ức chế đại thực bào sản sinh NO được xác định dựa theo phương
pháp của Bernardes và cộng sự vào năm 2014 [31].
- Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase được xác định dựa theo phương pháp
của Hakamata và cộng sự vào năm 2009 [86].
- Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định được xác định dựa theo phương pháp hệ
nồng độ trong môi trường lỏng của Hadacek và cộng sự vào năm 2000 [34].
Các thí nghiệm trên được thực hiện tại các phòng thí nghiệm của Viện sinh học – Viện hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam
- Hoạt tính kháng oxy hóa được xác định dựa theo phương pháp thông qua phản
ứng bao vây gốc tự do DPPH để đánh giá hoạt tính chống oxy hóa của dịch chiết vì điều kiện thực hiện thuận lợi và gần đây có nhiều tác giả đã chọn phương pháp này [35]. Các thí nghiệm này được thực hiện tại các phòng thí nghiệm của Trường đại học bách khoa – Đại học Đà Nẵng
- Thử độc tính bất thường được thực hiện dựa theo phương pháp được trình bày
trong dược điển Việt Nam tập IV. Các thí nghiệm này được thực hiện tại các phòng thí nghiệm của Trung tâm kiểm nghiệm dược phẩm, mỹ phẩm – Sở Y tế tỉnh Thừa Thiên Huế
- Khả năng không gây độc đối với tế bào người được xác định dựa theo phương
pháp của Skekan và công sự vào năm 1990 [87]. Các thí nghiệm này được thực hiện tại các phòng thí nghiệm của Viện sinh học – Viện hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam
Các phép thử hoạt tính sinh học được lặp lại 3 lần để đảm bảo tính chính xác với r2 ≥ 0,99. Trình tự tiến hành các phương pháp khảo sát hoạt tính sinh học của dịch chiết rễ cây mật nhân nêu trên được trình bày cụ thể tại phụ lục 3.