Các cao chiết cĩ khả năng bảo vệ gan hiệu quả được chọn để khảo sát độc tính cấp và độc tính bán trường diễn.
3.2.6.1 Thử nghiệm độc tính cấp
Thử nghiệm độc tính cấp của cao chiết được tiến hành theo hướng dẫn ở quyết định số 141/QĐ-K2ĐT năm 2015 về tài liệu chuyên mơn “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng thuốc đơng y, thuốc từ dược liệu” do Cục trưởng Cục Khoa học cơng nghệ và Đào tạo ban hành. Dựa theo hướng dẫn trên để tiến hành và kết hợp với chọn mơ hình liều cố định của tổ chức OECD 423 (Organization for Economic Cooperation and Development) (Bộ Y tế, 2007). Ngồi ra, nghiên cứu cịn tham khảo thêm một số tác giả khác về liều lượng thử nghiệm độc tính cấp đối với cao chiết thực
vật trong nghiên cứu của Kandimalla et al. (2016). Chuột khỏe mạnh (20-25 g) được
chia thành các nhĩm thí nghiệm, mỗi nhĩm gồm 5 con.
Nhĩm chuột bình thường cho uống nước cất (Nhĩm đối chứng).
Nhĩm chuột uống cao chiết một lần duy nhất ở liều 2000 hoặc 5000 mg/kg khối lượng chuột.
Chuột được cho uống thuốc vào lúc 8-9 giờ sáng.
Thử nghiệm được tiến hành trong 14 ngày. Chuột được cho uống cao chiết và được quan sát cứ sau 30 phút một lần trong 8 giờ vào ngày đầu tiên và tiếp tục quan sát theo dõi trong vịng 72 giờ để kiểm tra sự xuất hiện của các dấu hiệu thay đổi hành vi, ngộ độc và tử vong. Sau đĩ, chuột được quan sát hàng ngày, ghi nhận kết quả sau mỗi ngày và xác định giá trị LD50 (nếu cao chiết cĩ độc tính). Sau 14 ngày thử nghiệm, giải phẫu chuột để quan sát đại thể về hình dạng, màu sắc của các cơ quan nội tạng.
3.2.6.2 Thử nghiệm độc tính bán trường diễn
Chuột khỏe mạnh cĩ khối lượng 20-25 g chia thành 2 nhĩm thí nghiệm, mỗi nhĩm thí nghiệm 5 con chuột. Chuột đươc cho uống nước cất hoặc uống cao chiết thực vật liều 400 mg/kg khối lượng chuột (liều cao nhất trong thử nghiệm bảo vệ gan), 1 lần mỗi ngày trong vịng 90 ngày. Tiến hành quan sát, cân và ghi nhận trọng lượng chuột mỗi 15 ngày một lần trong 90 ngày. Sau thời gian thử nghiệm, các nhĩm chuột được cân khối lượng, gây mê và giải phẫu:
Quan sát đại thể hình dạng, màu sắc của các cơ quan nội tạng.
Lấy máu ở tim xét nghiệm: (1) các chỉ số sinh hĩa như: hàm lượng glucose, enzyme alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), ure, creatinine và các chỉ số lipid máu. (2) các chỉ số huyết học bao gồm: số lượng các loại bạch cầu, số lượng hồng cầu, số lượng tiểu cầu, lượng huyết sắc tố trong một thể tích máu, thể tích khối hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu, nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu, thể tích trung bình tiểu cầu, thể tích khối tiểu cầu và độ phân bố hồng cầu.