gan bằng CCl4
Hoạt tính kháng oxy hĩa bảo vệ gan của cao chiết từ các cây thuộc họ Cà phê cũng thể hiện thơng qua hoạt động điều hịa hàm lượng MDA và GSH trong mơ gan của các
nhĩm chuột thí nghiệm. Hoạt tính kháng oxy hĩa in vivo của các cao chiết được đánh giá
dựa trên khả năng kháng peroxide hĩa lipid màng tế bào và sản sinh chất kháng oxy hĩa nội sinh. Nghiên cứu dựa vào hàm lượng MDA để xác định sự kháng peroxide hĩa lipid màng tế bào và hàm lượng GSH để xác định khả năng sản sinh chất kháng oxy hĩa nội sinh ở mơ gan chuột.
Quá trình peroxide hĩa lipid màng tế bào ở chuột uống CCl4 xảy ra dưới sự chuyển
hĩa bởi các enzyme cytochrome P-450 của gan để chuyển hĩa CCl4 tạo thành các chất
chuyển hĩa cĩ độc cao như gốc trichloromethyl (CCl3•
) và peroxy trichloromethyl (CCl3OO•). Các gốc CCl3•
và CCl3OO• cĩ khả năng liên kết cộng hĩa trị với protein hoặc lipid của màng tế bào và các bào quan, tách các nguyên tử hydro khỏi acid béo khơng bão hịa để bắt đầu quá trình peroxide hĩa lipid do đĩ gây tổn thương màng tế bào, rối loạn cân bằng nội mơi, rối loạn hoạt động của một số enzyme và cuối cùng gây ra tổn thương
hoặc hoại tử tế bào gan (Mahmud et al., 2012). Quá trình peroxide hĩa lipid màng tế bào
gan tạo ra nhiều MDA. Do đĩ, xác định hàm lượng MDA sẽ đánh giá được khả năng kháng peroxide hĩa lipid ở mơ gan của các cao chiết.
Kết quả thực nghiệm được trình bày ở Bảng 4.13 cho thấy, hàm lượng MDA ở mơ
gan của nhĩm chuột đối chứng bệnh (uống CCl4) (18,6±0,44 nM MDA/g mơ) tăng cao
gấp 11,64 lần so với nhĩm chuột bình thường (1,6±0,07 nM MDA/g mơ). Kết quả này
cho thấy việc sử dụng CCl4 đã thúc đẩy quá trình peroxide hĩa lipid ở gan chuột. Chính
quá trình peroxide hĩa lipid của màng tế bào gan dẫn đến việc giải phĩng các enzyme ALT và AST vào máu gây tăng hàm lượng ALT và AST trong máu đã được trình bày trong Bảng 4.12. Bên cạnh đĩ, ảnh hưởng của dầu olive và DMSO 1% đến hàm lượng MDA ở mơ gan chuột cũng được đánh giá. Kết quả cho thấy, hàm lượng MDA ở nhĩm chuột uống dầu olive và DMSO 1% là 1,45±0,07 nM MDA/g mơ, khác biệt khơng cĩ ý nghĩa (p>0,05) so với nhĩm chuột bình thường. Như vậy, dầu olive và DMSO 1% khơng ảnh hưởng đến hàm lượng MDA ở mơ gan chuột.
Glutathione (GSH) là một thiol nội bào trong các sinh vật sống, đĩng vai trị trung tâm trong việc điều phối quá trình bảo vệ kháng oxy hĩa trong cơ thể. Ở trạng thái stress oxy hĩa, GSH được chuyển đổi thành glutathione disulfide (GSSG) dẫn đến quá trình
peroxide hĩa lipid (Ghassam et al., 2014). Hàm lượng GSH giảm cĩ liên quan mật thiết đến việc tăng cường quá trình peroxide hĩa lipid ở nhĩm đối chứng bệnh. Kết quả thí nghiệm cho thấy nhĩm đối chứng bệnh cĩ hàm lượng GSH (126,3±10,7 nM GSH/g mơ) thấp hơn nhĩm chuột bình thường (524,1±77,3 nM GSH/g mơ) 4,15 lần. Kết quả này cĩ
sự tương đồng với nghiên cứu của Ghassam et al. (2014), hàm lượng GSH giảm ở chuột
bị tổn thương gan bởi CCl4. Ở nhĩm chuột uống dầu olive và DMSO 1%, hàm lượng
GSH được xác định là khác biệt khơng cĩ ý nghĩa về mặt thống kê so với nhĩm chuột bình thường (p>0,05). Từ đĩ cho thấy dầu olive và DMSO 1% khơng ảnh hưởng đến hàm lượng GSH trong mơ gan chuột.
Các cao chiết được xem là cĩ khả năng chống lại tổn thương gan do CCl4 khi làm
giảm được hàm lượng MDA trong gan. Các cao chiết nghiên cứu đều cĩ khả năng làm
giảm hàm lượng MDA ở mơ gan chuột uống CCl4 theo liều sử dụng. Ở nhĩm chuột uống
CCl4 và cao chiết lá Mơ lơng ở các liều 100, 200 và 400 mg/kg cho thấy hiệu quả làm
giảm hàm lượng MDA lần lượt xuống cịn 10,0±0,36 nM MDA/g mơ; 6,37±1,68 nM MDA/g mơ và 2,32±0,04 nM MDA/g mơ. Cao chiết lá Mơ lơng làm cho hàm lượng GSH từ 213,3±10,2 nM GSH/g mơ ở liều 100 mg/kg tăng lên 1030,1±19,1 nM GSH/g mơ ở
liều 400 mg/kg. Ở nhĩm chuột uống CCl4 và cao chiết lá Mơ leo ở các liều 100, 200 và
400 mg/kg cho thấy cao chiết làm giảm hàm lượng MDA lần lượt xuống cịn 8,87±0,08 nM MDA/g mơ; 4,17±0,09 nM MDA/g mơ và 2,02±0,05 nM MDA/g mơ. Cao chiết lá Mơ leo làm cho hàm lượng GSH từ 237,9±10.1 nM GSH/g mơ ở liều 100 mg/kg tăng lên 1055,5±207,8 nM GSH/g mơ ở liều 400 mg/kg. Cả hai cao chiết khi so với nhĩm đối chứng bệnh cĩ thể thấy rằng hàm lượng MDA đã giảm và GSH đã tăng cĩ ý nghĩa thống kê (p<0,05).
Bảng 4.13: Hàm lượng MDA và GSH trong gan chuột thí nghiệm Nhĩm thí nghiệm Bình thường Olive, DMSO 1% CCl4 CCl4, silymarin 16 mg/kg CCl4, lá Mơ lơng 100 mg/kg CCl4, lá Mơ lơng 200 mg/kg CCl4, lá Mơ lơng 400 mg/kg CCl4, lá Mơ leo 100 mg/kg CCl4, lá Mơ leo 200 mg/kg CCl4, lá Mơ leo 400 mg/kg CCl4, lá Trang to 100 mg/kg CCl4, lá Trang to 200 mg/kg CCl4, lá Trang to 400 mg/kg CCl4, lá Gáo trắng 100 mg/kg CCl4, lá Gáo trắng 200 mg/kg CCl4,lá Gáo trắng 400 mg/kg CCl4, rễ Gáo trắng 100 mg/kg CCl4, rễ Gáo trắng 200 mg/kg CCl4, rễ Gáo trắng 400 mg/kg CCl4, vỏ thân Gáo trắng 100 mg/kg CCl4, vỏ thân Gáo trắng 200 mg/kg CCl4, vỏ thân Gáo trắng 400 mg/kg CCl4, lá Gáo vàng 100 mg/kg CCl4, lá Gáo vàng 200 mg/kg CCl4, lá Gáo vàng 400 mg/kg CCl4, rễ Gáo vàng 100 mg/kg CCl4, rễ Gáo vàng 200 mg/kg CCl4, rễ Gáo vàng 400 mg/kg CCl4, vỏ thân Gáo vàng 100 mg/kg CCl4, vỏ thân Gáo vàng 200 mg/kg CCl4, vỏ thân Gáo vàng 400 mg/kg
Ghi chú: Các giá trị trình bày là mean±SEM, n=5; Các ký tự giống nhau theo sau trong cùng một cột khác biệt khơng cĩ ý nghĩa về mặt thống kê ở mức 5%.
Cao chiết lá Trang to làm cho hàm lượng MDA giảm từ 8,23±0,23 nM MDA/g mơ ở liều 100 mg/kg xuống cịn 1,79±0,1 mg/kg ở liều 400 mg/kg. Cao chiết lá Trang to liều 100, 200 và 400 mg/kg làm cho hàm lượng MDA giảm lần lượt 2,26, 4,17 và 10,41 lần so với nhĩm đối chứng bệnh. Đồng thời, cao chiết lá Trang to làm hàm lượng GSH ở liều 100 mg/kg (493,3±28,1 nM GSH/g mơ) tăng 3,91 lần, ở liều 200 mg/kg (888,4±17,5 nM GSH/g mơ) tăng 7,03 lần, ở liều 400 mg/kg (1226±52,5 nM GSH/g mơ) tăng 9,71 lần so
với nhĩm đối chứng bệnh (126,3±10,7 nM GSH/g mơ). Cao chiết lá Trang to liều 400 mg/kg cĩ thể làm giảm hàm lượng MDA (MDA=1,79±0,1 nM MDA/g mơ) và tăng hàm lượng GSH (GSH=1226±52,5 nM GSH/g mơ) tốt hơn silymarin liều 16 mg/kg.
Ở nhĩm chuột uống CCl4 và cao chiết lá Gáo trắng ở các liều 100, 200 và 400 mg/kg cho thấy hiệu quả tích cực khi làm giảm hàm lượng MDA lần lượt xuống cịn 7,57±0,32 nM MDA/g mơ; 2,86±0,14 nM MDA/g mơ và 1,85±0,07 nM MDA/g mơ. Cao chiết lá Gáo trắng làm cho hàm lượng GSH từ 590,6±96,7 nM GSH/g mơ ở liều 100 mg/kg tăng lên 2358,4±207,8 nM GSH/g mơ ở liều 400 mg/kg. Khi so với nhĩm đối chứng bệnh cĩ thể thấy rằng hàm lượng MDA đã giảm và GSH đã tăng khác biệt cĩ ý nghĩa thống kê
(p<0,05).
Hàm lượng MDA ở nhĩm uống CCl4 và cao chiết rễ Gáo trắng cĩ sự giảm dần theo
liều sử dụng. Cao chiết rễ Gáo trắng liều 100 mg/kg (3,47±0,12 nM MDA/g mơ), 200 mg/kg (2,38±0,16 nM MDA/g mơ) và 400 mg/kg (1,70±0,05 nM MDA/g mơ) cĩ thể giảm hàm lượng MDA lần lượt là 5,37; 7,83 và 10,96 lần so với nhĩm đối chứng bệnh.
Trong khi đĩ, chuột uống CCl4 và cao chiết rễ Gáo trắng cĩ hàm lượng GSH tăng dần
theo liều sử dụng. Cao chiết rễ Gáo trắng ở liều 100 mg/kg cĩ hàm lượng GSH 842,5±137 nM GSH/g mơ tăng 1,61 lần so với nhĩm bình thường, ở liều 200 và 400 mg/kg cao chiết rễ Gáo trắng cĩ hàm lượng GSH tăng lần lượt 2,22 lần và 2,79 lần so với nhĩm chuột sử dụng silymarin 16 mg/kg.
Hàm lượng MDA ở mơ gan chuột uống CCl4 và cao chiết vỏ thân Gáo trắng dao
động từ 1,75±0,05 đến 3,55±0,11 nM MDA/g mơ. Cao chiết vỏ thân Gáo trắng liều 400 mg/kg làm cho hàm lượng MDA giảm cịn 1,75±0,05 nM MDA/g mơ khác biệt khơng cĩ
ý nghĩa về mặt thống kê (p>0,05) so với nhĩm chuột bình thường (1,6±0,07 nM MDA/g
mơ). Hàm lượng GSH trong mơ gan chuột uống CCl4 và cao chiết vỏ thân Gáo trắng cũng
được cải thiện. Cao chiết vỏ thân Gáo trắng làm cho hàm lượng GSH tăng từ 758,3±83,1 nM GSH/g mơ ở liều 100 mg/kg lên 3078,10±264,50 nM GSH/g mơ ở liều 400 mg/kg. Cao chiết vỏ thân Gáo trắng liều 200 mg/kg cĩ hàm lượng GSH (1913,4±254,6 nM GSH/g mơ) cao gấp đơi so với nhĩm sử dụng silymarin 16 mg/kg.
Ở nhĩm chuột uống CCl4 và được điều trị bằng cao chiết lá Gáo vàng cũng cho thấy
giảm hoạt động peroxide hĩa lipid màng tế bào khi mà hàm lượng MDA giảm 3,73 lần ở liều 100 mg/kg, 6,42 lần ở liều 200 mg/kg và 11,72 lần ở liều 400 mg/kg so với nhĩm đối chứng bệnh. Ngược với hàm lượng MDA, hàm lượng GSH ở liều 100 mg/kg cao chiết lá Gáo vàng là 243,4±72,6 nM GSH/g mơ đã tăng lên 1512,8±16,3 nM GSH/g mơ ở liều 400 mg/kg. Ở liều 200 mg/kg cao chiết lá Gáo vàng cĩ hàm lượng GSH (835,7±105,2) tương đương nhĩm sử dụng silymarin 16 mg/kg (p>0,05).
Cao chiết rễ Gáo vàng ở các liều 100, 200 và 400 mg/kg cĩ hàm lượng MDA giảm lần lượt 6,81±0,29 nM MDA/g mơ, 2,85±0,19 nM MDA/g mơ và 1,73±0,11 nM MDA/g mơ. Cao chiết rễ Gáo vàng liều 400 mg/kg cĩ hiệu quả giảm sự peroxide hĩa lipid thể hiện qua sự giảm hàm lượng MDA tương đương với tinh chất silymarin liều 16 mg/kg (p>0,05). Hàm lượng chất kháng oxy hĩa nội sinh GSH được xác định tăng dần từ 648,8±106,7 nM GSH/g mơ ở liều 100 mg/kg lên 2407,1±106,5 nM GSH/g mơ khi sử dụng liều 400 mg/kg. Ở liều 200 mg/kg cao chiết rễ Gáo vàng cĩ hàm lượng GSH 1217±95,9 nM GSH/g mơ cao hơn nhĩm sử dụng silymarin 16 mg/kg là 1,28 lần.
Nhĩm sử dụng cao chiết vỏ thân Gáo vàng liều 100 mg/kg cĩ hàm lượng MDA là 8,71±0,81 nM MDA/g mơ và giảm xuống 1,93±0,06 nM MDA/g mơ ở liều 400 mg/kg. Cao chiết vỏ thân Gáo vàng liều 100, 200 và 400 mg/kg làm giảm hàm lượng MDA lần lượt 2,14; 6,21 và 9,65 lần so với nhĩm đối chứng bệnh. Đồng thời, hàm lượng GSH ở liều 100 mg/kg 704,9±153,5 nM GSH/g mơ tăng lên 2568±297,5 nM GSH/g mơ ở liều 400 mg/kg. Ở liều 200 mg/kg cao chiết vỏ thân Gáo vàng cĩ hàm lượng GSH (1832,6±145,6 nM GSH/g mơ) cao hơn 1,93 lần so với nhĩm sử dụng silymarin 16 mg/kg.
Như được trình bày trong Bảng 4.13, nếu xét ở liều 100 mg/kg, cĩ 8 cao chiết đều cĩ khả năng điều hịa giảm hơn 50% hàm lượng MDA so với nhĩm đối chứng bệnh, dao động từ 3,47±0,12 đến 8,87±0,08 nM MDA/g mơ. Trong đĩ, hàm lượng MDA cao nhất
đươc tìm thấy ở mơ gan chuột uống CCl4 và cao chiết vỏ thân Gáo vàng, cao chiết rễ Gáo
trắng được xem là cĩ khả năng kháng peroxide hĩa lipid màng tế bào cao nhất, khi hàm lượng MDA giảm cịn 3,47±0,12 nM MDA/g mơ. Riêng cao lá Mơ lơng cĩ khả năng điều hịa giảm hàm lượng MDA ít nhất khoảng 46%. Ở liều 100 mg/kg, cao chiết rễ Gáo trắng được xem là cĩ khả năng kích thích sản sinh chất kháng oxy hĩa nội sinh là GSH (842,5±137 nM GSH/g mơ) nhiều nhất.
Các cao chiết ở liều 200 mg/kg làm cho hàm lượng MDA trong mơ gan cĩ giá trị từ 2,07±0,07 đến 6,37±1,69 nM MDA/g mơ. Phần lớn các cao chiết tiếp tục làm giảm 50% hàm lượng MDA so với liều 100 mg/kg. Cao chiết lá Trang to liều 200 mg/kg cĩ hàm lượng MDA 4,47±0,36 nM MDA/g mơ cao hơn các cao chiết khác được khảo sát. Cao chiết lá Trang to liều 200 mg/kg được xem là cĩ khả năng kháng peroxide hĩa lipid thấp nhất. Trong khi đĩ, cao chiết vỏ thân Gáo trắng liều 200 mg/kg cĩ khả năng kháng peroxide hĩa lipid màng tế bào hiệu quả nhất, hàm lượng MDA là 2,07±0,07 nM MDA/g mơ, khác biệt cĩ ý nghĩa so với các cao chiết cịn lại ở cùng liều sử dụng. Trong khi hàm lượng MDA cĩ xu hướng giảm ở liều 200 mg/kg thì hàm lượng GSH lại tăng lên đáng kể. Hàm lượng GSH cĩ giá trị từ 750,8±36,8 ở cao chiết lá Mơ lơng đến 2114,7±87,6 nM
GSH ở cao chiết rễ Gáo trắng liều 200 mg/kg. Ở liều 200 mg/kg, nhĩm chuột cĩ hàm lượng GSH thấp nhất là nhĩm được điều trị bằng cao chiết lá Mơ lơng (750,8±36,8 nM GSH/g mơ), 3 nhĩm cĩ hàm lượng GSH tương đương nhau gồm lá Gáo vàng (835,7±105,2 nM GSH/g mơ), cao chiết lá Mơ leo (848,7±11,2 nM GSH/g mơ) và cao lá Trang to (888,4±17,5 nM GSH/g mơ) và khác biệt khơng cĩ nghĩa thống kê so với nhĩm sử dụng silymarin 16 mg/kg (949,3±10,4 nM GSH/g mơ).
Ở liều sử dụng 400 mg/kg, cĩ 7 cao chiết đều làm cho hàm lượng MDA giảm về
mức khác biệt khơng cĩ ý nghĩa thống kê so với nhĩm bình thường và nhĩm sử dụng silymarin 16 mg/kg. Trong khi đĩ, 2 cao chiết cĩ hàm lượng MDA giảm ít nhất gồm lá Mơ lơng (2,32±0,05 nM MDA/g mơ) và lá Mơ leo (2,02±0,05 nM MDA/g mơ). Trong các cao chiết được sử dụng, cao chiết lá Gáo vàng cĩ hàm lượng MDA (1,59±0,05 nM MDA/g mơ) là thấp nhất. Nhìn chung hàm lượng MDA giữa các cao chiết khơng cĩ sự chênh lệch nhiều, chứng tỏ hàm lượng MDA đã giảm về mức bình thường nên cĩ xu hướng ổn định.
Trong khi đĩ, hàm lượng GSH ở mơ gan chuột uống CCl4 và các cao chiết liều 400
mg/kg cĩ giá trị khác nhau. Cao chiết vỏ thân Gáo trắng cĩ hàm lượng GSH cao đến 3078,1±264,5 nM GSH/g mơ, khác biệt cĩ ý nghĩa thống kê so với các cao chiết cịn lại khi sử dụng ở liều 400 mg/kg. Riêng 2 cao chiết lá Mơ lơng (1030,1±19,1 nM GSH/g mơ) và cao lá Mơ leo (1055,5±11,5 nM GSH/g mơ) cĩ hàm lượng GSH thấp nhất, lần lượt thấp hơn 2,98 và 2,91 lần so với nhĩm uống cao chiết vỏ thân Gáo trắng. Từ kết quả thí nghiệm ở Bảng 4.13 cĩ thể sắp xếp theo thứ tự các nhĩm sinh ra hàm lượng GSH từ mức cao xuống thấp gồm các nhĩm sử dụng cao chiết: vỏ thân Gáo trắng, rễ Gáo trắng, vỏ thân Gáo vàng, rễ Gáo vàng, lá Gáo trắng, lá Gáo vàng, lá Trang to, lá Mơ leo và lá Mơ lơng.