- Vật phẩm được cố định trong dung dịch glutaraldehyt 4% trong dung dịch đệm cacodylat thời gian 5 giờ ở
1.Vị trí phôi bào bị thoái hóa, bề mặt màng trong suốt bị co rúm; 2 Tinh trùng
71
Ảnh 3.9. Phôi tươi ngày 3 (TEM - 800×)
1. Màng trong suốt; 2. Phôi bào; 3. Mảnh vỡ bào tương.
Ảnh 3.10. Màng trong suốt của phôi tươi ngày 3 (TEM - 10000×)
1. Ranh giới trong của màng ZP; 2. Glycoprotein dạng sợi
3
2 1 1
2
72
* Phôi sau rã đông còn sống nguyên vẹn có cấu trúc như phôi trước đông gồm 2 phần: Màng trong suốt, các phôi bào.
- Quan sát màng trong suốt ở độ phóng đại nhỏ không thấy khác so với trước đông lạnh (ảnh 3.12). Tuy nhiên, khi quan sát ở vật kính lớn hơn chúng tôi thấy sau khi rã đông màng trong suốt có mật độ điện tử mịn hơn, không nhìn rõ cấu trúc các glycoprotein dạng sợi như ở phôi tươi (ảnh 3.13).
- Quan sát cấu trúc bên trong phôi bào chúng tôi thấy màng tế bào không bị biến đổi, nhân và hạt nhân có thể quan sát rất rõ và không thấy sự thay đổi đáng kể, trong bào tương quan sát thấy các ti thể không bị tổn thương, tuy nhiên có thể thấy xuất hiện các không bào hoặc một vài vị trí thoái hóa hạt (ảnh 3.14).
Ảnh 3.11. Phôi bào của phôi tươi ngày 3 (2000×)
1. Màng trong suốt; 2. Bào tương; 3. Nhân; 4. Ti thể; 5. Không bào 2 3 1 4 5
73
Ảnh 3.12. Phôi sau rã đông ngày 3 (TEM - 1000×)
1. Màng trong suốt; 2. Phôi bào; 3. Không bào
Ảnh 3.13. Màng trong suốt của phôi ngày 3 sau rã đông (TEM – 10.000×)
1. Ranh giới trong của màng ZP; 2. Glycoprotein dạng sợi
2 2 2
1
1
74
* Phôi ngày 3 thoái hóa sau rã đông quan sát dưới kính hiển vi điện tử truyền qua thấy màng nhân tế bào bị nhăn nhúm, có chỗ đứt gẫy, nhiều nếp gấp, ti thể biến dạng chất nền sáng, không quan sát thấy mào ti thể, các lưới nội bào có hạt bao quanh ti thể (ảnh 3.15)
Ảnh 3.14. Phôi bào của phôi ngày 3 sau rã đông (TEM – 5.000×)
1. Màng nhân; 2. Ty thể; 3. Thoái hóa hạt 4. Chất nhiễm sắc; 5. Hạt nhân
Ảnh 3.15. Phôi ngày 3 thoái hóa sau rã đông (TEM – 5.000×)
1. Ty thể; 2. Màng nhân; 3. Chất nhiễm sắc; 4. Hạt nhân
1 3 3 2 5 4 2 4 1 3
75
3.3. Hình thái cấu trúc phôi nuôi cấy ngày 5 trước đông lạnh và sau rã đông
3.3.1. Sự thay đổi về độ dầy màng trong suốt, đường kính phôi và số lượng tế bào lá nuôi trước đông lạnh và sau rã đông: bào lá nuôi trước đông lạnh và sau rã đông:
Các phôi nuôi cấy đến ngày 5 là phôi ở giai đoạn phôi nang, mỗi phôi có các thành phần là màng trong suốt, tế bào lá nuôi (TE), khoang dịch phôi và đám tế bào bên trong phôi (ICM) có thể quan sát được dưới kính hiển vi đảo ngược (Ảnh 3.16A). Phôi sau rã đông còn sống nguyên vẹn có các thành phần như phôi trước đông (ảnh 3.16B). Những phôi sống sau rã đông tiếp tục nuôi cấy 1 ngày, quan sát thấy kích thước phôi to lên, màng trong suốt mỏng đi, số tế bào lá nuôi đếm được trên 1 mặt phẳng quan sát tăng lên (ảnh 3.17)
Ảnh 3.16. Phôi ngày 5